贾帅争
- 作品数：41 被引量：72H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金军队“十五”医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学交通运输工程更多>>
- 真核蛋白表面展示系统被引量：5
- 2000年
- 酵母表面展示和杆状病毒表面展示是近年来发展起来的新的蛋白表面展示技术,可用于展示需糖基化作用、二硫键异构化等翻译后修饰才表现功能活性的复杂真核蛋白。本文简述了该技术的基本原理、应用、研究进展及其发展前景。
- 贾帅争
- 关键词：酵母杆状病毒
- 报告基因标记的HCV全基因组复制细胞模型的建立被引量：1
- 2011年
- 目的建立稳定的报告基因标记的HCV全基因组复制细胞模型，对细胞内病毒蛋白和核酸的表达水平进行定量。方法把neo抗性基因插入到Luc-JCl中，构建Luc-JC。将体外转录的Luc-JCRNA转染Huh7细胞，经筛选后获得的G418抗性克隆，通过荧光素酶活性检测、Westernblot和HCVNS3／4A对eYFP—MAVS的切割试验进行鉴定。用IFN-α处理筛选到的细胞，观察细胞中荧光素酶活性、HCV相关蛋白和RNA的变化，对复制细胞在抗病毒药物评价方面的应用进行初步验证。结果G418加压筛选得到了多个含HCV全基因组的细胞克隆。在细胞克隆中，荧光素酶活性检测观察到萤火虫荧光素酶；Westernblot检测到HCVNS3和NS5A蛋白的表达；由于NS3／4A的切割，eYFP—MAVS的定位由线粒体转移到细胞质。IFN-α处理阳性克隆细胞，荧光素酶活性、HCV蛋白表达和RNA水平明显降低。结论成功建立稳定的报告基因标记的HCV全基因组复制细胞模型，报告基因能用来指示细胞内HCV蛋白和RNA的表达水平，为进一步开展HCV致病机制研究和治疗药物筛选奠定了基础。
- 高博贾帅争彭剑淳王怡樊炜李银太詹林盛许金波
- 关键词：丙型肝炎病毒萤火虫荧光素酶细胞模型
- 丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶瞬时表达小鼠模型的建立被引量：2
- 2011年
- 目的:建立丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶体内活性评价模型。方法:利用NS4A/B是NS3/4A丝氨酸蛋白酶作用底物的特性,构建融合基因NS3/NS4A/B-SEAP,底物片段NS4A/B插在NS3/4A和人分泌性碱性磷酸酶(SEAP)之间,融合基因表达后SEAP的分泌依赖于有活性的NS3/4A在NS4A/B位点的切割。将含融合基因的质粒NS3/4A(△4AB)SEAP通过水动力转染技术转染到小鼠体内,检测小鼠血清中SEAP的活性,高活性的SEAP是该评价体系成立的证据。结果与结论:在瞬时表达NS3/4A的小鼠血清中检测到了高活性的SEAP,建立了可用于评价抗NS3/4A的小鼠体内瞬时模型。
- 闫虎路遥杜娟贾帅争付秋霞彭剑淳周勇詹林盛
- 关键词：丙型肝炎病毒
- 盐水法、微板法和微柱凝胶法检测O型血清中抗-A,抗-B效价的比较研究被引量：4
- 2006年
- 比较用盐水法、微板法和微柱凝胶法检测O型血清抗-A,抗-B效价的可靠性及可操作性,选择一种检测大批量标本的可靠方法。使用盐水法、微板法和微柱凝胶法对同一组30例标本进行检测和比较。结果三种方法检测结果没有一致性,盐水法敏感性最低,微柱凝胶法敏感性最高,微板法的检测结果较为稳定。说明微板法适合进行大批量标本的抗体效价检测。
- 陈民才贾帅争席映辉冯双利王全立
- 关键词：O型血微板法微柱法
- 一种肝脏高效表达调控序列及其应用
- 本发明公开了一种肝脏高效表达调控序列及其应用，其目的是提供一种肝脏高效表达调控序列及其在肝脏中表达外源基因中的应用。该序列为序列表中SEQ ID №：1或SEQ ID №：2所示核苷酸序列，其中，含有肝脏特异性启动子AA...
- 付秋霞贾帅争王全立
- 文献传递
- 一种可活体成像监测肝脏中NF-κB活性的小鼠模型及其构建方法
- 本发明公开了一种可活体成像监测肝脏中NF-κB活性的小鼠模型及其构建方法。本发明通过构建携带噬菌体整合酶识别位点attB基因、NFκB基因以及萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因的重组载体，用水动力法将其导入小鼠体内，得到...
- 詹林盛周勇阎少多贾帅争
- 文献传递
- 小鼠脂联素与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达被引量：7
- 2005年
- 以绿色荧光蛋白(GFP)基因(gfp)为报告基因,构建小鼠脂联素(mADPN)基因(mAd)与gfp的融合基因mAd/gfp表达载体pCI-neo-apoEHCR-hAATp-mAd-gfp,脂质体法转染体外培养的COS-7细胞,荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达可间接反映mADPN的表达,并通过RT-PCR在核酸水平进一步确证mAd的表达。荧光显微镜观察及RT-PCR结果均证明mADPN在COS-7细胞中获得了高效表达,表明mADPN重组表达载体pCI-neo-apoEHCR-hAATp-mAd可以在真核细胞COS-7中高效表达mADPN,为进一步探讨mAd在小鼠体内的表达提供了可行性依据。
- 王会中付秋霞高明贾帅争詹林盛王全立
- 关键词：脂联素融合基因真核表达
- 一种可活体成像监测肝脏中IFN-β或NF-κB活性的小鼠模型及其构建方法
- 本发明公开了一种可活体成像监测肝脏中IFN-β或NF-κB活性的小鼠模型及其构建方法。本发明通过构建携带噬菌体整合酶识别位点attB基因、IFN-β启动子或NFκB基因以及萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因的重组载体，用...
- 詹林盛周勇阎少多贾帅争
- 文献传递
- 人LDLR基因的克隆及在Hepa1-6细胞中的表达
- 2004年
- 目的 :从能感染HCV的人肝癌细胞HepG2中克隆出人LDLR基因 ,构建其真核表达质粒 ,并在小鼠肝癌细胞Hepa1 6中进行表达。方法 :从HepG2中提取总RNA ,采取逆转录PCR(RT PCR)方法得到人LDLR的cDNA。将获得的人LDLR基因克隆到真核表达载体pcDNA3中 ,进行酶切和序列鉴定。将重组质粒pcDNA3 hLDLR和空载体转入Hepa1 6 ,G4 18筛选 ,并用RT PCR和FACS检测人LDLR基因转录和蛋白的表达。结果 :人LDLR的cDNA已插入载体pcDNA3构建成真核表达质粒pcDNA3 hLDLR ,双酶切和测序表明 ,克隆的人LDLR与已登录GenBank的序列存在核苷酸多态性 ,但编码的氨基酸序列完全一致 ,该序列的GenBank登录号为gi|2 16 2 96 4 7|gb|AY114 15 5 .1,并且真核表达质粒的构建正确。用脂质体介导的方法转入Hepa1 6后 ,用RT PCR和FACS检测表明 ,细胞可表达人LDLR。结论 :成功地构建了真核表达质粒pcDNA3 hLDLR ,为进一步研究HCV和人LDLR的相互作用 ,以及建立可能的HCV细胞感染模型奠定了基础。
- 吕丽萍贾帅争王海平詹林盛王全立
- 关键词：克隆基因表达质粒
- 脂联素在小鼠肝脏的高效稳定表达被引量：1
- 2005年
- 目的:获得小鼠脂联素(ad iponectin,ADPN)在肝脏的高效稳定表达,方法:构建含肝脏特异性启动子hAATp和增强子ApoEHCR的小鼠脂联素基因(mAd)的真核表达载体pAA-neo-mAd。以绿色荧光蛋白(green fluo-rescent prote in,GFP)为报告基因证明该载体在COS-7细胞中表达后,流体动力法(hydrodynam ics-based procedure)通过尾静脉注射将其导入小鼠肝脏,通过肝脏mAd mRNA定量(半定量RT-PCR法)、免疫组织化学检测及血清脂联素水平测定(定量ELISA法)鉴定脂联素在肝脏的表达及表达效率。结果:肝组织RT-PCR的结果显示,注射后12 h肝脏内即可检测到mAd mRNA的表达,且能持续表达6周以上。24 h后血清脂联素水平显著升高,48 h达到峰值,一直持续6周后仍明显高于正常水平。肝脏脂联素免疫组化染色呈阳性。结论:流体动力法能有效地将质粒载体pAA-neo-mAd导入小鼠肝脏,并能在小鼠肝脏高效稳定地表达重组小鼠脂联素。
- 王会中付秋霞陈竞新贾帅争詹林盛孙红琰王全立
- 关键词：脂联素肝脏质粒载体
