彭剑淳
- 作品数：32 被引量：187H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金军队“十五”医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学自动化与计算机技术更多>>
- 报告基因标记的HCV全基因组复制细胞模型的建立被引量：1
- 2011年
- 目的建立稳定的报告基因标记的HCV全基因组复制细胞模型，对细胞内病毒蛋白和核酸的表达水平进行定量。方法把neo抗性基因插入到Luc-JCl中，构建Luc-JC。将体外转录的Luc-JCRNA转染Huh7细胞，经筛选后获得的G418抗性克隆，通过荧光素酶活性检测、Westernblot和HCVNS3／4A对eYFP—MAVS的切割试验进行鉴定。用IFN-α处理筛选到的细胞，观察细胞中荧光素酶活性、HCV相关蛋白和RNA的变化，对复制细胞在抗病毒药物评价方面的应用进行初步验证。结果G418加压筛选得到了多个含HCV全基因组的细胞克隆。在细胞克隆中，荧光素酶活性检测观察到萤火虫荧光素酶；Westernblot检测到HCVNS3和NS5A蛋白的表达；由于NS3／4A的切割，eYFP—MAVS的定位由线粒体转移到细胞质。IFN-α处理阳性克隆细胞，荧光素酶活性、HCV蛋白表达和RNA水平明显降低。结论成功建立稳定的报告基因标记的HCV全基因组复制细胞模型，报告基因能用来指示细胞内HCV蛋白和RNA的表达水平，为进一步开展HCV致病机制研究和治疗药物筛选奠定了基础。
- 高博贾帅争彭剑淳王怡樊炜李银太詹林盛许金波
- 关键词：丙型肝炎病毒萤火虫荧光素酶细胞模型
- 丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶瞬时表达小鼠模型的建立被引量：2
- 2011年
- 目的:建立丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶体内活性评价模型。方法:利用NS4A/B是NS3/4A丝氨酸蛋白酶作用底物的特性,构建融合基因NS3/NS4A/B-SEAP,底物片段NS4A/B插在NS3/4A和人分泌性碱性磷酸酶(SEAP)之间,融合基因表达后SEAP的分泌依赖于有活性的NS3/4A在NS4A/B位点的切割。将含融合基因的质粒NS3/4A(△4AB)SEAP通过水动力转染技术转染到小鼠体内,检测小鼠血清中SEAP的活性,高活性的SEAP是该评价体系成立的证据。结果与结论:在瞬时表达NS3/4A的小鼠血清中检测到了高活性的SEAP,建立了可用于评价抗NS3/4A的小鼠体内瞬时模型。
- 闫虎路遥杜娟贾帅争付秋霞彭剑淳周勇詹林盛
- 关键词：丙型肝炎病毒
- 利用萤光素酶标记的肿瘤细胞建立肝癌原位移植模型及其活体成像被引量：9
- 2008年
- 目的:利用生物发光成像技术非侵入性地监测活体裸鼠原位肝癌发展过程。方法:将包含有萤火虫萤光素酶基因的pCI-neo-Luc载体转染人肝癌HepG2细胞系,筛选获得具有高萤光素酶活性的细胞克隆;利用流式细胞仪对萤光素酶表达的稳定性进行初步研究,并分析细胞的生物发光情况;持续表达萤光素酶的肿瘤细胞培养扩增后被植入裸鼠皮下,2周后以形成的异体瘤作为供体瘤,进行肝脏原位移植手术;对建立的肝癌原位移植模型,用影像学资料显示肿瘤部位,用IVIS成像系统动态监测肿瘤生长情况。结果:体外影像的结果显示,表达萤光素酶细胞的数量与发光强度呈正相关;活体成像的结果显示,成功地建立了萤光素酶标记的原位肝癌动物模型。结论:生物发光成像可以监测活体内肝癌演进过程,为抗肿瘤药物的筛选和评价提供了新的手段和工具。
- 孙萍王怡孙志东彭剑淳周勇詹林盛
- 关键词：生物发光成像萤光素酶原位肝癌
- 丙型肝炎病毒核心蛋白寡核苷酸适配子的筛选与鉴定被引量：14
- 2002年
- 目的 筛选、鉴定抗HCV核心蛋白 (C蛋白 )的寡核苷酸适配子 (aptamers)。方法 利用systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment (SELEX)技术 ,以HCVC蛋白为靶分子 ,从体外合成的 81bp随机单链DNA文库中筛选与HCVC蛋白特异结合的寡核苷酸适配子 ,并进行了解离常数 (Kd)测定和适配子序列测定。再分别利用ClustalW软件包和DNAFoldingSever分析适配子的一级结构和二级结构。结果 经过 9轮循环筛选 ,随机ssDNA库与HCVC蛋白的结合率从 0 .5 %上升到32 .5 %。所有的一级结构没有共同的同源序列 ,但可分 5个家族 ,每个家族具有共同的保守序列。二级结构分析表明 ,适配子形成的茎环、凸环结构可能是与HCVC蛋白结合的结构基础。其中寡核苷酸适配子C4与HCVC蛋白特异结合的亲和力最高 ,Kd值为 6 8nmol L。
- 詹林盛孙红琰彭剑淳邵宁生王全立
- 关键词：丙型肝炎丙型肝炎病毒核心蛋白SELEX技术
- 一种HCV转基因小鼠模型及其构建方法与应用
- 本发明公开了一种HCV转基因小鼠模型及其构建方法与应用。本发明所提供的构建HCV转基因小鼠模型的方法，包括下述步骤：1)构建包括海肾荧光素酶基因和萤火虫荧光素酶基因以及位于所述海肾荧光素酶基因和萤火虫荧光素酶基因之间的H...
- 詹林盛王全立饶林彭剑淳
- 文献传递
- ABO血型快速鉴定卡的研制
- ABO血型鉴定是安全输血的重要保证。目前临床上常用的血型定型试剂虽能够较快地得出结果, 但在许多应急条件下仍显不足,而需要更加简便快捷,且便于携带贮存的血型定型产品。本着进一步适应临床输血需要,笔者采用抗A、抗B血型单克...
- 杜芝燕孙红琰王全立刘晓达彭剑淳
- 关键词：ABO血型
- 文献传递
- 人和小鼠resistin基因的克隆与序列测定被引量：4
- 2002年
- 构建人和小鼠resistin基因cDNA克隆,并进行序列分析,为进一步进行resistin表达和生物学活性研究奠定基础。用RT-PCR方法扩增人和小鼠resistin基因cDNA,获得的片段连接至pGEM-T载体,转化大肠杆菌JM109,并经过酶切鉴定和序列测定。结果成功地构建了人和小鼠resistin基因cDNA克隆,人和小鼠resistin的氨基酸序列具有共同的结构特征CX28CX12CX8CXCX3CX10CXCXCX9CC,克隆的人resistincDNA在编码序列第133位的A被T代替,导致45位密码子编码的丝氨酸由半胱氨酸代替;小鼠resistincDNA在第16位的T被C取代,导致第6位密码子编码的苯丙氨酸改变为亮氨酸。密码子发生改变的生物学意义还有待于进一步研究。
- 詹林盛王会中彭剑淳王全立
- 关键词：小鼠RESISTIN基因克隆脂肪组织
- 膜锚定Gaussia萤光素酶的细胞标记及生物荧光成像
- 2011年
- 目的:制备表达膜锚定Gaussia萤光素酶(extGluc)报告基因的慢病毒,用于标记细胞。方法:将报告基因extGluc克隆至慢病毒载体pCCsin.PPT.SFFV.IRES.eGFP.Wpre(VeGFP)中,以聚乙烯亚胺(PEI)介导,将慢病毒包装所需4种质粒(pVeGFP-extGLuc、pMDL、pRev、pVSVG),转染293FT细胞,72 h后收集病毒上清进行浓缩,感染293FT细胞,并用流式细胞仪检测病毒滴度,生物荧光成像和化学发光分析extGluc的表达;之后,用收集的慢病毒感染人单核细胞白血病细胞株U937。结果:对经PCR筛选出的阳性克隆所含质粒进行酶切鉴定,表明extGlu报告基因插入载体中;重组慢病毒包装成功且病毒滴度为5×106 TU/mL;用包装的病毒颗粒感染293FT细胞,生物荧光成像和化学发光证实extGluc的膜定位,且酶活性与细胞数目呈线性相关;病毒颗粒能够感染悬浮细胞U937。结论:包装了extGluc标记的重组慢病毒,可用于标记细胞,为体内监测细胞迁移、聚集和变化提供了一种方法。
- 樊炜贾帅争王怡阎少多高博彭剑淳詹林盛
- 丙型肝炎病毒NS3螺旋酶寡核苷酸适配子的筛选与鉴定被引量：15
- 2005年
- 为筛选和鉴定抗丙型肝炎病毒(HCV) NS3螺旋酶(NS3h) 的寡核苷酸适配子(aptamers). 利用SELEX技术,以HCV NS3h为靶分子,从体外合成的81 bp随机单链DNA文库中筛选与HCV NS3h特异结合的寡核苷酸适配子. 克隆测序后,进行了解离常数(Kd) 测定和Clustal W软件包分析适配子一级结构. 经过8轮循环筛选,随机ssDNA库与HCV NS3h的结合率从0.45%上升到29.5%. 所有的一级结构没有共同的同源序列,但可分5个家族,其中4个家族具有共同的保守序列. 解离常数测定表明,寡核苷酸适配子H2与HCV NS3h特异结合的亲和力最高,Kd值为140 nmol/L. 适配子H2 (10 μmol/L)在体外对HCV NS3h的活性具有一定的抑制作用,抑制率达44%. 利用随机寡核苷酸文库获得了抗HCV NS3h的寡核苷酸适配子.
- 詹林盛卓海龙王会中彭剑淳王全立
- 关键词：丙型肝炎病毒SELEX
- HCVIRES介导萤火虫荧光素酶翻译的双顺反子载体的构建与在小鼠体内的表达被引量：13
- 2004年
- 将HCVIRES插入双报告基因海肾荧光素酶 (Rluc)基因和萤火虫荧光素酶 (Fluc)基因之间 ,建立了“依赖帽子的扫描机制”翻译表达Rluc ,HCVIRES调控Fluc翻译的双顺反子表达载体pCI Rluc HCVIRES Fluc ,通过酶切反应及转染HepG2细胞鉴定双荧光素酶瞬间表达活性等试验 ,证实获得了表达双荧光素酶的双顺反子载体 .并应用水压转染法将双顺反子表达质粒导入小鼠体内 ,在小鼠肝脏检测到高水平表达的Rluc和Fluc .该研究成功构建一种HCVIRES介导萤火虫荧光素酶基因表达的双顺反子载体 ,并在HepG2细胞及小鼠体内进行了瞬时表达 。
- 詹林盛饶林彭剑淳王全立
- 关键词：HEPG2肝癌细胞内部核糖体进入位点荧光素酶
