李法曾
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金军队杰出人才基金更多>>
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- 组蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用检测
- 2013年
- 目的:构建组蛋白H2A、H2B、H3、H4的酵母双杂交诱饵载体,检测其在酵母细胞中的表达和自激活活性,为应用酵母双杂交系统筛选与组蛋白相互作用的蛋白奠定基础。方法:扩增H2A、H2B、H3、H4蛋白基因编码区cDNA序列,克隆至酵母表达载体pGBK-T7中,再将其转化至酵母细胞AH109中,提取酵母总蛋白,检测各种组蛋白的表达,并检测表达的组蛋白在酵母细胞中对报告基因有无自激活作用。结果:将H2A、H2B、H3、H4基因的cDNA克隆至酵母表达载体pGBK-T7中,其中组蛋白H4得到正确表达,且对报告基因LacZ、HIS3、Ade无激活作用。结论:可以利用酵母双杂交系统筛选与H4相互作用的蛋白质。
- 李玮妮李法曾张浩陈立涵程龙徐小洁刘婕叶棋浓
- 关键词：组蛋白酵母双杂交表观遗传
- 运用新型的反向PCR策略高效构建基因的点突变体被引量：4
- 2011年
- 基因的点突变体在其结构和功能研究中发挥非常关键的作用,如何高效、经济地构建基因点突变体是许多分子生物学研究遇到的棘手问题.以PIAS3点突变体的构建为对象,设计了新型的以反向PCR为基础的点突变构建流程,获得的点突变体质粒经测序后均与预期相符,并在293T细胞内得到了正确表达.以上结果表明,该实验设计方案能够高效、方便地用于基因点突变体的构建,为进一步研究它们的分子功能打下了基础.
- 程龙韩白玉侯莎韩永健徐小洁蒋凯李法曾杨智洪窦京涛吕朝晖张浩叶棋浓
- 关键词：反向PCRPIAS3点突变
- SUMO-2/3与孕激素受体的共价结合及其对该受体转录活性的调节被引量：2
- 2011年
- 目的研究B型孕激素受体(progesterone receptor B type;PRB)是否能被SUMO-2、SUMO-3类泛素化修饰,并探讨这种修饰对孕激素受体转录活性的影响。方法以人的MCF-7 cDNA为模板进行PCR反应,扩增出SUMO-2、SUMO-3的cDNA,构建真核表达载体pcDNA3FLAG-SUMO2与pcDNA3FLAG-SUMO3;将质粒pXJ40-myc-PRB分别与pcDNA3-FLAG、pcDNA3FLAG-SUMO2、pcDNA3FLAG-SUMO3共转染人胚肾细胞293T,运用免疫共沉淀及western印迹的方法检测其是否发生类泛素化修饰;运用测定荧光素酶报告基因的方法检测类泛素化修饰对孕激素受体转录活性的影响。结果构建成功表达载体pcDNA3FLAG-SUMO2与pcDNA3FLAG-SUMO3;免疫共沉淀实验证实sumo2/3均可以与PRB共价结合;SUMO-2、SUMO-3能以孕激素依赖的方式增强PRB的转录活性。结论 SUMO-2、SUMO-3分子能够对孕激素受体PRB进行类泛素化修饰,并调节其分子功能。
- 韩白玉李法曾程龙徐小洁蒋凯付洁韩永健吕朝晖窦京涛张浩叶棋浓
- 关键词：PRB转录活性
