李永强
- 作品数：22 被引量：34H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 基因芯片技术检测重要人兽共患病病毒方法的建立被引量：2
- 2009年
- 为了建立能对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定用的基因芯片技术,本实验首先设计针对每种病毒的寡核苷酸探针并进行探针特异性的生物信息学验证.然后探索病毒核酸随机扩增方法,优化杂交动力学条件,建立本芯片标准的数据处理分析方法.最后用细胞培养的病毒和模拟临床标本验证芯片的敏感性与特异性.结果表明,锚定随机PCR扩增法适合于本芯片病毒核酸的扩增;芯片杂交前用0.25%NaBH4进行封闭,最优杂交条件为51℃,2h及50%甲酰胺浓度;芯片具有较好的敏感性及检测特异性.初步结果表明,本实验所建立的基因芯片技术可应用于对25种重要人兽共患病病毒进行筛查及鉴定.
- 李永强康晓平孙庆歌刘洪常国辉祝庆余杨银辉
- 关键词：基因芯片技术特异性
- 人源高致病性H5N1不同蚀斑特性病毒致病力研究
- 2011年
- 目的分析不同空斑特性病毒致病力的差异,为禽流感病毒跨种属传播机制研究提供新的思路与依据。方法利用病毒蚀斑技术,从A/Beijing/01/03(H5N1)(BJ01)病毒中分离纯化不同蚀斑特性的病毒——较大和较小蚀斑病毒。采用纯化的大、小斑病毒滴鼻感染小鼠,观察并记录感染后14d小鼠体重和死亡数变化,分析大、小斑病毒致病力的差异。结果 BJ01株原始病毒呈现大小不一的混合斑状态,从BJ01株分离纯化了大斑病毒L1、L2和小斑病毒S1、S2、S3,其中小斑病毒S1和S2的致病力较强,大斑病毒L1和小斑病毒S3的致病力较弱,大斑病毒L2病毒致病力最弱。同种空斑特性的病毒致病力差异显著,不同空斑特性病毒在致病力上也存在显著差异。结论 H5N1病毒的空斑大小与病毒致病力没有线性相关性,但可以根据空斑大小,利用蚀斑技术分离纯化出致病力差异明显的病毒。
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- 关键词：毒力
- 一种检测人畜共患病病毒的基因芯片及其应用
- 本发明公开了一种检测人畜共患病病毒的基因芯片及其应用。本发明提供的基因芯片包括病毒检测探针，其特征在于：所述病毒检测探针由以下的探针组成：核苷酸序列分别是表2中序列1-150的病毒检测探针和核苷酸序列分别是序列1-150...
- 杨银辉李永强康晓平刘洪孙庆歌户义李靖祝庆余
- 文献传递
- 针对多种强致病性病毒的基因芯片检测方法的建立
- 甲病毒属中的东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、基孔肯亚病毒，黄病毒属中的森林脑炎病毒、乙型脑炎病毒、黄热病毒、登革病毒等，以及其他一些病毒如汉坦病毒、新疆出血热病毒等、可引起严重的人类疾病，目前己被联合国卫生组织列为生物战...
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- 关键词：基因芯片技术免疫荧光病原体检测
- 文献传递
- 5种人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的初步建立被引量：10
- 2009年
- 为建立可同时检测裂谷热病毒(RVFV)、戊型肝炎病毒(HEV)、狂犬病毒(RV)、水泡性口炎病毒(VSV)及口蹄疫病毒(FMDV)5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR快速检测方法,本研究根据GenBank登录的上述5种病毒的全基因组序列,设计了5对多重PCR引物,通过优化反应条件,建立检测以上5种病毒的多重RT-PCR方法。通过对同一种属的其他病毒及相关病毒的检测,确定方法的特异性;通过对体外转录合成的RNA进行定量检测的方法,确定方法的敏感度。实验结果表明:在同一RT-PCR反应体系中可同时检测以上5种病毒,扩增片段长度分别为499bp、137bp、274bp、224bp、389bp;而对新城疫病毒(NDV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛流行热病毒(BEFV)和乙型脑炎病毒(JBEV)的检测均为阴性;5种病毒RNA的最低检测拷贝数分别为2.91×104、3.14×103、1.25×103、6.65×103和2.38×104。利用该方法对11份RV已知阳性样本和7份HEV已知阳性样本检测结果均呈阳性。本研究建立了一种快速、可同时检测5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和较高的敏感性。
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- 关键词：戊型肝炎病毒狂犬病毒水泡性口炎病毒口蹄疫病毒多重RT-PCR
- 针对多种强致病性病毒的基因芯片检测方法的建立
- 2008年
- 为了制备灵敏的可检测多种烈性病毒性病原体的基因芯片,本研究设计了针对21种烈性病毒性病原体的基因芯片检测探针,每种5条,长50 bp.并以甲病毒属的基孔肯亚病毒和黄病毒属的黄热病毒细胞培养物为检测模型,摸索了合适的病毒基因处理与扩增方法.将提取的病毒RNA先用DNaseⅠ处理,以去除掉其中的DNA分子,然后利用病毒属特异性引物进行反转录,以引导病毒基因组的合成,从而尽可能地减少宿主细胞基因成分的干扰.进行随机PCR扩增后将扩增产物与基因芯片进行杂交,分别出现了4条基孔肯亚病毒探针信号和5条黄热病毒的探针信号,说明所设计的检测探针具有较好的特异性,可用于这2种病毒的特异性检测.这种病毒基因样品的处理和扩增方法也为此基因芯片的临床应用奠定了基础.
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- 关键词：病毒探针设计芯片检测
- 医学RNA病毒属水平基因芯片筛查技术的研究
- 本研究目的是建立能够在属水平对医学RNA病毒进行快速筛查的基因芯片技术，在出现新(突)发传染病疫情或公共卫生事件时，能利用该芯片，快速将病毒性病原体筛查到属水平，为进一步进行病原体的分离培养、鉴定及传染病疫情的防控提供有...
- 杨银辉康晓平李永强刘洪孙庆歌林方祝庆余
- 关键词：RNA病毒免疫学检验基因芯片
- 文献传递
- 人类流感病毒多重PCR分型方法的建立被引量：3
- 2010年
- 目的建立一种可以同时检测人类A型流感病毒,B型流感病毒及A型流感病毒H1,H3,H5亚型的多重RT-PCR方法。方法根据人类流感病毒的特异性基因设计并合成多对特异性引物,建立可同时扩增出人类流感病毒亚型特异性片段的多重PCR的方法。同时,对该方法的特异性和敏感性进行了评价,并利用该方法对39份疑似swineH1N1的临床标本进行检测。结果该方法可同时扩增出A型流感病毒M基因203bp,B型流感病毒M基因296bp,A型流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为362bp(H1),112bp(H3),188bp(H5),494bp(swineH1)。该实验最低可检测新甲型H1N1(A/Beijing/501/2009)病毒RNA0.5TCID50。该方法的特异性实验结果显示,在多重PCR检测中未检出非特异扩增的PCR产物。同时,使用该方法从39份疑似新甲型H1N1的临床咽拭子标本中检测出新甲型H1N1阳性的标本4份(10.2%),季节性H1N1亚型2份(5.1%),H3N2亚型12份30.7%,本次实验结果与WHO通过实时PCR方法检测的结果一致。结论本研究建立的多重PT-PCR方法快速、敏感,特异性强,可用于人类流感病毒的分型检测。
- 林方熊伟康晓平李永强刘洪李辉祝庆余杨银辉
- 关键词：人类流感病毒病毒分型多重PCR
- 检测黄病毒属病毒的基因芯片探针及基因芯片检测方法
- 本发明提供一组检测黄病毒属病毒的基因芯片探针及一种通用的检测方法。包括森林脑炎病毒(Tick borne encephalitis)探针、登革病毒(Dengue virus)探针和乙型脑炎病毒(Japanese ence...
- 康晓平杨银辉李永强刘洪孙庆歌祝庆余
- 文献传递
- 检测五种人兽共患病病毒的方法及专用试剂盒
- 本发明公开了一种检测五种人兽共患病病毒的方法及专用试剂盒。该检测病毒的试剂盒，包括用于检测口蹄疫病毒的引物对A：序列表中序列1所示的DNA，序列表中序列2所示的DNA。用本发明试剂盒检测病毒的方法，特异性强，检测结果可靠...
- 杨银辉孙庆歌吴东来康晓平李永强刘洪祝庆余
- 文献传递
