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重组腺病毒Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系感染效率的比较研究被引量：1: 2015年; 目的以Ad5-GFP及Ad5/F35-GFP为对照,评价Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系的感染效率。方法制备并纯化Ad5-GFP、Ad5/F11p-GFP及Ad5/F35-GFP三种重组腺病毒,以不同的感染复数(MOI)感染乳腺癌细胞系SKBR-3、MCF-7及肾癌细胞系786O。48 h后,荧光显微镜观察GFP的表达,流式细胞仪检测感染效率及不同细胞表面柯萨奇腺病毒受体(CAR)、CD46和桥粒芯糖蛋白质2的表达。结果 Ad5/F35-GFP对SKBR-3、MCF-7及786O均具有很高的感染效率,且其在较低的MOI时就具有较高的感染效率;Ad5/F11p-GFP对CD46高表达的MCF-7及786O具有较高的感染效率,5 MOI感染即可达到60%以上的感染效率;而Ad5-GFP仅对CAR高表达的细胞系786O具有较高的感染效率,且感染效率随着MOI的增加而升高。Ad5/F11p-GFP和Ad5/F35-GFP对三种肿瘤细胞系的感染效率明显高于Ad5-GFP。结论对5型腺病毒进行纤维顶球的改造,可增强对肿瘤细胞的感染效率。; 曹晓培肖凤君高瞻杨月峰张群伟王立生王恒湘王华

SIRT1在血管相关性疾病中的研究进展被引量：2: 2015年; 沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide-adenine dinucleotide,NAD)的去乙酰化酶,其可对组蛋白和非组蛋白发挥去乙酰化作用从而调节能量代谢、细胞衰老及凋亡等众多生命过程。在多种血管相关性疾病中,SIRT1通过对相关因子去乙酰化增加细胞能量供应、减少细胞凋亡、减轻炎症反应、抵抗氧化应激、改善血管内皮细胞功能,从而在血管相关性疾病中发挥重要作用。该文旨在对SIRT1在缺血性脑卒中、动脉粥样硬化及肿瘤这3种常见血管相关性疾病中的作用的研究进展及相应的信号通路进行综述。; 高瞻哈小琴王立生; 关键词：缺血性脑卒中动脉粥样硬化肿瘤

鞘氨醇激酶1调控沉默信息调节因子1表达的研究: 2017年; 目的探讨鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SPK1)与沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)表达的关系。方法用病毒感染复数(MOI)=20 p LKO.1-sh SPK1-GFP干涉慢病毒(sh SPK1组)及p PIG-U6-Scramble-GFP对照慢病毒(GFP-SC组)感染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),48 h后提取细胞RNA及蛋白,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)测定SIRT1基因及蛋白表达水平。用MOI=20 p HIV7-U6-sh SIRT1-RFP干涉慢病毒(sh SIRT1组)及p HIV7-U6-Scramble-RFP对照慢病毒(RFP-SC组)感染HUVECs,48 h后提取细胞RNA并用RT-PCR检测细胞SPK1基因表达水平。用100 nmol 1-磷酸鞘氨醇(S1P)处理HUVECs,分别在0.5、2、24及36 h提取细胞RNA,24、48及72 h提取细胞蛋白,检测SIRT1基因及蛋白表达水平。用100 nmol S1P处理干涉过SIRT1的HUVECs检测细胞的增殖、迁移及体外管状结构形成能力。结果 sh SPK1组SIRT1基因和蛋白表达水平低于GFP-SC组(P<0.01)。sh SIRT1组SPK1基因表达水平与RFP-SC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。100 nmol S1P处理HUVECs不同时间SIRT1基因及蛋白表达水平高于未处理组,HUVECs增殖能力高于sh SIRT1组(P<0.05,P<0.01)。sh SIRT1组HUVECs迁移率低于RFP-SC组,S1P处理组高于RFP-SC、sh SIRT1组(P<0.05)。sh SIRT1组HUVECs体外管状结构形成能力低于RFP-SC组,S1P处理组高于sh SIRT1组(P<0.05)。结论 SPK1可以正向调控SIRT1表达并对HUVECs功能产生影响。; 高瞻曾通旭王娟徐倩曹荟哲白燕青杨志华哈小琴; 关键词：人脐静脉内皮细胞组蛋白去乙酰化酶1 细胞增殖细胞运动

SPK1调控人脐静脉内皮细胞SIRT1表达及细胞迁移的机制研究: 2017年; 目的探讨鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SPK1)调控沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)表达及对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)迁移能力的机制。方法用病毒感染复数(MOI)=20的p LKO.1-sh SPK1-GFP干涉慢病毒(sh SPK1组)和p PIG-U6-Scramble-GFP对照慢病毒(GFP-SC组)感染HUVECs,48 h后提取细胞蛋白并用蛋白免疫印迹法检测ERK、P38 MAPK及AKT磷酸化水平。分别用PD98059、SB203580及Wortmannin处理HUVECs 1 h,检测ERK、P38 MAPK及AKT信号表达及SIRT1蛋白表达情况。取抑制剂干预后的细胞进行Transwell小室迁移实验,检测细胞迁移能力。结果sh SPK1组ERK、P38 MAPK及AKT的磷酸化水平均低于GFP-SC组(P<0.05,P<0.01)。PD98059、SB203580及Wortmannin组ERK、P38 MAPK、AKT磷酸化水平及SIRT1蛋白表达水平低于对照组,HUVECs的迁移能力较对照组弱(P<0.01)。结论 SPK1可以通过ERK、P38 MAPK及AKT通路调控HUVECs SIRT1的表达及迁移能力。; 高瞻曹荟哲白燕青王娟徐倩曾通旭杨志华哈小琴; 关键词：组蛋白去乙酰化酶1 人脐静脉内皮细胞信号调控

鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇信号对老年脐静脉内皮细胞增殖及迁移能力的影响研究: 2019年; 目的:探讨鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SPK1)及1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)对老年脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及迁移能力的影响。方法:通过实验确定pLKO.1-shSPK1-GFP干涉慢病毒及pPIG-U6-Scramble-GFP对照慢病毒的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI),并用最佳MOI感染HUVECs。48 h后提取细胞的蛋白质及RNA,蛋白免疫印迹法(western blot,WB)及实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)检测HUVECs内SPK1的蛋白和基因表达水平。用SPK1干涉慢病毒及对照病毒或S1P处理HUVECs,细胞活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCKit-8)检测细胞的增殖能力,Transwell检测细胞的迁移能力。结果:用最佳感染复数20 MOI的慢病毒感染HUVECs 48 h后,其SPK1的蛋白和基因表达水平均显著下调50%左右(P<0.01或P<0.05)。CCKit-8增殖实验及Transwell迁移实验表明,干涉SPK1可以显著抑制HUVECs的增殖及迁移能力(P<0.01)。而100 nM及200 nM S1P则可以显著促进HUVECs的增殖及迁移能力(P<0.01)。结论:HUVECs内SPK1表达水平的下降可以显著抑制HUVECs的增殖及迁移能力,而其催化产物S1P则可以促进HUVECs的增殖及迁移能力。; 高瞻高瞻王娟杨志华宋月娟冯强生; 关键词：1-磷酸鞘氨醇细胞增殖细胞迁移

组蛋白去乙酰化酶1对脐静脉内皮细胞增殖迁移和凋亡及管状结构形成能力的影响被引量：1: 2016年; 目的探讨组蛋白去乙酰化酶1（SIRT1）对脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖、迁移、凋亡和管状结构形成等生物学特性的影响。方法通过实验确定p人类免疫缺陷病毒（HIV）7-U6-shSIRT1-红色荧光蛋白（RFP）干涉慢病毒（shSIRT1组）及pHIV7-U6-Scramble-RFP对照慢病毒（RFP-SC组）的最佳感染复数，并感染HUVEC，48 h后测定HUVEC内的SIRT1基因和蛋白表达水平；检测HUVEC的增殖能力、迁移能力、凋亡情况及体外成管能力。结果慢病毒感染HUVEC 48 h后，shSIRT1组的SIRT1基因及蛋白表达水平均明显低于RFP-SC组［（0.271±0.005）比（1.000±0.018），（0.499±0.028）比（1.000±0.023）］（P〈0.01）。细胞贴壁的第2、3、4天，shSIRT1组HUVEC的增殖能力明显低于RFP-SC组［（4.84±0.61）比（6.16±1.19）、（6.23±0.35）比（9.67±0.86）、（7.32±0.67）比（10.40±0.61）］（均P〈0.01）。shSIRT1组细胞的迁移能力明显低于RFP-SC组［5个视野的平均细胞数：（72±17）个比（195±32）个］（P〈0.001）。shSIRT1组的细胞凋亡率明显高于RFP-SC组［（26.9±3.9）%比（9.9±2.0）%］（P〈0.05）。shSIRT1组细胞的成管能力明显低于RFP-SC组［5个复孔的平均成管数：（13.9±0.8）个比（25.6±1.4）个］（P〈0.05）。结论 HUVEC内SIRT1表达水平下降可以抑制细胞增殖、迁移和体外成管能力，并促进细胞凋亡。; 杨迎桂哈小琴高瞻王娟杨志华张菊林林静; 关键词：组蛋白去乙酰化酶1 细胞增殖细胞迁移小管形成

小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1对脐静脉内皮细胞增殖、迁移和凋亡的影响: 2015年; 目的探讨小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1(SENP1)对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移及凋亡的影响。方法用20个感染复数的p LKO.1-SENP1-小发夹RNA(shRNA)-绿色荧光蛋白(GFP)干涉慢病毒(SENP1干涉组)和p PIG-U6-随机序列(scramble)-GFP对照慢病毒(GFP-SC对照组)感染HUVEC。病毒感染HUVEC 48 h后,用流式细胞仪检测慢病毒的感染效率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western蛋白质印迹法检测HUVEC内SENP1基因和蛋白表达水平。用CCK8试剂盒检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞的迁移能力,流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果 GFP-SC对照组和SENP1干涉组感染效率均>97%。与GFP-SC对照组比较,SENP1干涉组HUVEC SENP1基因和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。CCK8法测定结果表明,SENP1干涉组HUVEC增殖能力较GFP-SC对照组明显降低(P<0.01)。SENP1干涉组细胞迁移过Transwell小室的细胞数量明显低于GFP-SC对照组(P<0.01)。用低浓度血清(含2%胎牛血清)培养基诱导细胞凋亡24 h,SENP1干涉组细胞凋亡率即已升高到GFP-SC对照组的2倍左右(P<0.05);诱导凋亡至48 h,SENP1干涉组细胞凋亡率升高到对照组的3.2倍左右(P<0.05)。结论 HUVEC内SENP1表达水平的降低不仅可以显著抑制细胞增殖和迁移能力,亦可促进细胞凋亡。; 高瞻王华肖凤君曹晓培孙慧燕杨月峰哈小琴王立生; 关键词：脐静脉内皮细胞细胞增殖细胞迁移

骨髓间充质干细胞移植修复高原大鼠股骨缺损被引量：5: 2014年; 背景:对于高原地区受到环境负面影响的组织创伤,例如高原骨缺损,干细胞的特点可以提供一个良好的加速创伤修复的方法。目的:研究骨髓间充质干细胞治疗大鼠高原股骨缺损的创伤恢复效果。方法:分离提取雄性Wistar大鼠原代骨髓间充质干细胞,取第3代细胞进行细胞表型鉴定。雌性Wistar大鼠80只,制备实验性股骨圆形缺损后随机均分为平原对照组、平原骨髓间充质干细胞移植组、高原对照组、高原骨髓间充质干细胞移植组(n=20)。治疗后第30天拍X射线片观察股骨缺损区的修复情况,并于第10,20,30天分别采集股骨缺损区组织,检测其中碱性磷酸酶的含量。结果与结论:高原骨髓间充质干细胞移植组大鼠股骨缺损区愈合速度较高原对照组快,且碱性磷酸酶的含量较高原对照组高(P<0.05);平原骨髓间充质干细胞移植组的缺损区愈合速度也比平原对照组快,且碱性磷酸酶的含量也较平原对照组高(P<0.05)。平原骨髓间充质干细胞移植组的缺损区愈合速度较高原骨髓间充质干细胞移植组快,且碱性磷酸酶的含量较高原骨髓间充质干细胞移植组高(P<0.05)。说明骨髓间充质干细胞的局部移植可提高高原股骨缺损区局部的碱性磷酸酶含量,加速缺损区的创伤修复速度,但高原股骨缺损区的愈合修复较平原组慢。; 王鲲伏小平杨志华郑英高瞻高彩艳买超平哈小琴; 关键词：骨髓间充质干细胞移植 WISTAR大鼠股骨缺损碱性磷酸酶骨缺损区愈合速度

鞘氨醇激酶1干扰慢病毒载体及干扰慢病毒的构建被引量：1: 2016年; 目的构建人鞘氨醇激酶1（SPK1）干扰慢病毒载体,并制备SPK1干扰慢病毒.方法将1 ～5号pLKO.2-shSPK1质粒及pLKO.1-Scramble-RFP对照质粒转染人胚肾293（HEK293）细胞,实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测pLKO.2-shSPK1质粒对SPK1的干扰效率,筛选干扰效果最好的pLKO.2-shSPK1质粒;将所筛选质粒中以SPK1为靶点的短发夹结构RNA（SPK1-shRNA）插入pLKO.1-Scramble-GFP质粒中,获得表达shRNA-SPK1的pLKO.1-shSPK1-GFP重组质粒;将该质粒进行测序及酶切鉴定后,转染HEK293细胞48 h后荧光显微镜及流式细胞仪观察绿色荧光强度,qRT-PCR检测其对SPK1的干扰效率.将pLKO.1-shSPK1-GFP重组质粒进行慢病毒包装及滴度检测.结果与pLKO.1-Scramble-RFP对照质粒比较,转染1～5号pLKO.2-shSPK1质粒的HEK293细胞中SPK1 mRNA水平均有一定程度降低,其中3号pLKO.2-shSPK1质粒干扰效果最好,选取其进行pLKO.1-shSPK1-GFP重组质粒构建,经测序及酶切检验,证明重组质粒构建成功.pLKO.1-shSPK1-GFP重组质粒转染HEK293细胞后,绿色荧光阳性率达94.4％,SPK1 mRNA水平明显下降（P＜0.01）,干扰率达51.0％.进行慢病毒包装后测得病毒滴度为6×10^8 pfu/ml.结论本研究成功构建了人SPK1干扰慢病毒载体,并制备了SPK1干扰慢病毒.; 高瞻王娟杨志华白雅丽哈小琴; 关键词：慢病毒 RNA干扰

一种检验科用血液涂片装置: 本发明公开了一种检验科用血液涂片装置，包括设备主体、注液机构和压盖机构，所述设备主体的上端内侧设置有注液机构，且注液机构的外部一侧设置有压盖机构，所述注液机构包括储液箱、传液管、分散盘和滴针管，所述储液箱的外部两侧设置有...; 高瞻

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