陈立涵
- 作品数：7 被引量：5H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- RSRC1增强ERβSUMOylation修饰及其分子机制
- 雌激素受体(ERα和ERβ)在女性和男性发育及生殖生理中发挥不可替代的作用。除此以外，ERs在骨密度的维持，心血管，中枢神经和免疫系统也发挥重要的作用。ERα和ERβ在许多种类的肿瘤的发生发展中也发挥重要作用。雌激素受体...
- 陈立涵
- 关键词：雌激素受体转录活性基因修饰分子机制
- 文献传递
- 组蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用检测
- 2013年
- 目的:构建组蛋白H2A、H2B、H3、H4的酵母双杂交诱饵载体,检测其在酵母细胞中的表达和自激活活性,为应用酵母双杂交系统筛选与组蛋白相互作用的蛋白奠定基础。方法:扩增H2A、H2B、H3、H4蛋白基因编码区cDNA序列,克隆至酵母表达载体pGBK-T7中,再将其转化至酵母细胞AH109中,提取酵母总蛋白,检测各种组蛋白的表达,并检测表达的组蛋白在酵母细胞中对报告基因有无自激活作用。结果:将H2A、H2B、H3、H4基因的cDNA克隆至酵母表达载体pGBK-T7中,其中组蛋白H4得到正确表达,且对报告基因LacZ、HIS3、Ade无激活作用。结论:可以利用酵母双杂交系统筛选与H4相互作用的蛋白质。
- 李玮妮李法曾张浩陈立涵程龙徐小洁刘婕叶棋浓
- 关键词：组蛋白酵母双杂交表观遗传
- 慢病毒介导的敲低UBC9表达抑制ERβ类泛素化修饰水平被引量：3
- 2013年
- 目的建立稳定敲低UBC9蛋白表达的293T细胞株,检测其对雌激素受体β(ERβ)类泛素化修饰水平的调节作用。方法构建4条针对人UBC9基因的慢病毒短发夹RNA(shRNA)的干扰载体,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后,收集病毒上清,感染293T细胞,经嘌呤霉素(puromycin)筛选后获得稳定表达慢病毒介导UBC9 shRNA的混合细胞集落,分别用实时(real-time)PCR和Western印迹方法检测UBC9的表达情况,瞬时转染方法检测UBC9表达水平对ERβ类泛素化修饰水平的影响。结果建立了稳定敲低UBC9的293T细胞株,UBC9降低能够抑制ERβ类泛素化修饰水平。结论 UBC9在ERβ类泛素化修饰反应中发挥重要作用。
- 李玮妮陈立涵程龙徐小洁付洁关鑫刘婕张浩叶棋浓
- 关键词：慢病毒属UBC9ERΒRNA干扰
- 慢病毒介导雌激素受体β在乳腺癌细胞中的高表达抑制上皮细胞间质转化相关基因的表达被引量：1
- 2013年
- 目的:建立稳定高表达雌激素受体β(ERβ)蛋白表达的乳腺癌ZR75-1细胞株,检测其对上皮细胞间质转化(EMT)相关基因的影响。方法:将编码人ERβ的cDNA序列插入慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后收集病毒上清,感染乳腺癌ZR75-1细胞,经嘌呤霉素筛选后获得稳定高表达含Myc标签的人ERβ的混合细胞集落,以及作为对照组整合有对照慢病毒载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro的混合细胞集落,提取细胞蛋白,用Myc抗体检测Myc-ERβ融合蛋白的表达,同时检测EMT相关基因Snail、E-Cadherin、N-Cadherin的表达水平和GSK-3β的磷酸化水平。结果:建立了稳定高表达Myc-ERβ融合蛋白的乳腺癌细胞株,和对照组相比,Myc-ERβ高表达抑制EMT相关蛋白N-cadherin和Snail的表达,增强E-cadherin分子的表达,抑制GSK-3β磷酸化水平。结论:建立了Myc-ERβ高表达的乳腺癌细胞株,发现ERβ高表达抑制EMT相关分子的表达,为深入研究分子在乳腺癌中调控的机制奠定了基础。
- 李玮妮陈立涵程龙付洁林亚红刘婕张浩叶棋浓
- 关键词：上皮细胞间质转化雌激素受体乳腺癌
- 雌激素受体α短发夹RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌干细胞的影响
- 2015年
- 目的:构建特异抑制雌激素受体α(ERα)基因的短发夹RNA(sh RNA)慢病毒表达载体,检测其对ERα的干扰效果,并探讨其对MCF7细胞中乳腺癌干细胞含量的影响。方法:以人的ERα核酸序列为靶标,根据sh RNA设计原则设计并化学合成特异的sh RNA序列,经退火处理后与p SIH-H1质粒连接,转化大肠杆菌DH5α后挑取单克隆并测序;将该克隆进行病毒包装并感染乳腺癌MCF7细胞,用嘌呤霉素进行筛选,最终得到稳定克隆;收取细胞,用Western印迹和q RT-PCR检测ERα在m RNA及蛋白水平上的变化,流式细胞术检测敲低ERα能否影响MCF7乳腺癌干细胞的含量。结果:经测序分析表明目标sh RNA序列成功插入载体,q RT-PCR检测稳定克隆,发现该sh RNA能有效抑制目的基因的m RNA转录水平,同时Western印迹检测发现内源性ERα量明显下降;流式细胞术检测发现ERα敲低的MCF7稳定克隆中雌激素诱导的乳腺癌干细胞含量上升的现象被明显抑制。结论:设计并构建的抑制ERα的sh RNA能够有效抑制ERα的表达,并下调MCF7细胞中乳腺癌干细胞的含量,为研究ERα在乳腺癌干细胞中的功能及机制奠定了实验基础。
- 杜佩云程龙姜丽娜陈立涵林佳佳叶棋浓苏金为
- 关键词：雌激素受体Α肿瘤干细胞短发夹RNA流式细胞术
- ERbeta类泛素化修饰及其生物学意义
- (ER)属于核受体超家族成员,为典型的配体(雌激素)依赖的转录因子。迄今为止发现两类ER:ER和ERbeta,它们为不同基因编码的产物,结构上高度同源。和ERalpha类似,ERbeta雌激素受体与配体结合后可通过基因组...
- 张浩李玮妮陈立涵韩白玉程龙徐小洁叶棋浓
- 文献传递
- 一种快速构建基因多个点突变体方法的建立被引量：1
- 2013年
- 蛋白质内部多个位点的翻译后修饰在基因的功能调节过程中发挥重要作用,基因的点突变体在其结构和功能研究中发挥非常关键的作用,因此,高效、快速构建基因的多个点突变体在基因的功能研究中意义重大.本研究在建立了对目的基因进行高效准确的单点突变方法的基础上,以SRrp53点突变体的构建为例,设计了新型的以反向PCR为基础的多个点突变的实验流程,获得的多位点突变体质粒经测序后均与预期相符,将测序正确的多位点突变体质粒转染293T细胞后,均表达了分子质量正确的蛋白质.以上结果表明,该实验设计方案能够高效、方便地用于基因多个点突变体的构建,为进一步研究它们的分子功能打下了基础.
- 陈立涵李玮妮张浩程龙叶棋浓
- 关键词：反向PCR
