陈宏备
- 作品数：8 被引量：25H指数：4
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- 发文基金：广西省自然科学基金广西科技创新能力与条件建设项目更多>>
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- 小鼠IL-1β、TNF-α TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及脑心肌炎病毒感染小鼠的检测被引量：7
- 2011年
- 为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后促炎细胞因子的表达水平、从分子水平深入研究EMCV的致病机制,本研究分别建立了检测小鼠IL-1β、TNF-α和管家基因β-actin 的 TaqMan real-time PCR 检测方法。该方法标准曲线的相关系数均达到0.998以上,检出下限均达到10copies/μL质粒标准品,组内与组间的变异系数均小于2%。应用该方法对猪源 EMCV GXLC 株人工感染小鼠的脑、心、脾中IL-1β、TNF-α mRNA 的转录水平进行检测,发现感染后第4dIL-1β、TNF-α mRNA 的转录水平达到峰值,并且与小鼠发病死亡高峰存在明显的时间相关性。本研究所建立的TaqMan real-time PCR 检测方法为小鼠促炎细胞因子的检测及定量分析提供了技术手段。
- 陈宏备施开创李向涛郑敏郑喜邦李军
- 关键词：脑心肌炎病毒小鼠促炎细胞因子荧光定量RT-PCR
- 小鼠IL-1β、TNF-α TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
- 为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后促炎细胞因子的表达水平、从分子水平深入研究EMCV的致病机制，分别针对小鼠促炎细胞因子IL-1β、TNF-α以及管家基因β-actin的基因序列设计了1对特异性引物和一条探针，构建含有...
- 陈宏备施开创李向涛郑敏郑喜邦李军
- 关键词：动物模型促炎细胞因子荧光定量PCR脑心肌炎病毒
- 猪脑心肌炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：12
- 2011年
- 为了建立猪脑心肌炎病毒(EMCV)的检测方法,根据GenBank中EMCV 3D基因的保守序列设计并合成1对引物和1条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了该病毒的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。该方法线性关系好,以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数达到0.998;敏感性高,检测下限为10copies/μL,比普通PCR敏感100倍;特异性强,只有EMCV呈阳性,而与猪口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、BHK-21正常细胞均无交叉反应;重复性好,组内与组间的变异系数均小于1.5%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株人工感染小鼠的脑、心、脾中的病毒载量进行了检测,同时对临床采集的153份可疑病料进行了检测。结果表明,本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的检测及定量分析。
- 施开创陈宏备覃芳芸李向涛胡杰郑喜邦李军
- 关键词：脑心肌炎病毒TAQMAN探针
- 猪脑心肌炎病毒GXLC株VP1基因的原核表达及鉴定被引量：4
- 2011年
- 根据猪脑心肌炎病毒(EMCV)GXLC株的基因组序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增EMCV VP1基因目的片段,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建了EMCV VP1基因重组表达质粒pET-32a-VP1。将pET-32a-VP1转化BL21(DE3)株感受态细胞,并用IPTG进行诱导表达。结果显示,经SDS-PAGE分析,VP1蛋白获得高效表达,融合蛋白质的分子质量约为52 ku,表达的重组蛋白以包涵体形式存在。经Western blot,结果显示所表达的VP1蛋白与猪抗EMCV阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,表明其具有良好的抗原反应原性。
- 李向涛施开创陈宏备郑敏钟诚李军
- 关键词：脑心肌炎病毒VP1基因原核表达抗原性
- 小鼠IL-6、iNOS TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：5
- 2011年
- 为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后IL-6、iNOS基因的表达水平,从分子水平深入研究EMCV的致病机制,分别针对小鼠IL-6、iNOS及管家基因β-actin的基因序列设计特异性引物和探针,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-6、iNOS和β-actin的TaqMan rea-ltime PCR检测方法。该方法线性关系好,IL-6、iNOS和β-actin标准曲线的相关系数均达到0.998;敏感性高,初始模板的检出下限均达到1×101拷贝/μL;特异性强,只有以总RNA反转录成的cDNA为模板,并加入特异性引物和探针的反应才检测到荧光信号;重复性好,组内与组间的变异系数均小于2%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株感染小鼠的脑、心脏中IL-6、iNOS mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,本研究建立的TaqMan real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于小鼠IL-6、iNOS基因的检测及定量分析。
- 施开创陈宏备胡杰覃芳芸郑喜邦李军
- 关键词：小鼠IL-6INOS荧光定量PCR脑心肌炎病毒
- 猪源脑心肌炎病毒GXLC株致病性研究
- 脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)可以引起以仔猪急性脑炎、心肌炎及母猪繁殖障碍为特征的传染性疾病。EMCV可以感染小鼠,导致心肌炎、脑炎、糖尿病等。本研究通过将猪源EMCV G...
- 陈宏备
- 关键词：细胞因子
- 文献传递
- 猪脑心肌炎病毒GXLC株VP1基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2010年
- 应用RT-PCR方法扩增猪脑心肌炎病毒GXLC株的VP1基因,扩增产物克隆入pMD18-T载体后进行测序,对获得的VP1基因序列进行分析。序列分析表明,GXLC株VP1基因长度为831 bp,编码277 aa,含有2个潜在的N-糖基化基序和9个抗原表位。同源性分析表明,GXLC株与国内外其他26个EMCV分离株VP1基因核苷酸序列的同源性在78.6%～99.6%之间、氨基酸序列的同源性在95.1%～99.3%之间。遗传进化分析表明,基于VP1基因序列绘制的系统进化树可以将所有EMCV分离株分成两个群,即Ⅰ群和Ⅱ群,Ⅰ群可再细分为Ⅰa亚群和Ⅰb亚群,其中猪源、鼠源EMCV在Ⅰ群和Ⅱ群中均有分布,人源EMCV则分布在Ⅱ群;GXLC株与其他中国分离株均属于Ⅰa亚群。
- 陈进喜施开创屈素洁郑敏李向涛陈宏备许瑞胜
- 关键词：脑心肌炎病毒VP1基因分子特征
- 猪IL-2、IL-12p40和IFN-γ SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 针对猪Th1型细胞因子IL-2、IL-12p40、IFN-γ以及管家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-2、IL-12p40、IFN-γ及β-actin的SYBR Green Ⅰ real-ti mePCR方法。该方法线性关系好,标准曲线的相关系数均达到0.997以上;敏感性高,初始模板的检出下限均达到100拷贝/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3.5%。应用所建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪外周血单个核细胞中IL-2、IL-12p40和IFN-γ mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,所建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好。
- 施开创莫胜兰许瑞胜李向涛陈宏备郑敏刘棋
- 关键词：TH1型细胞因子SYBR
