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施开创: 作品数：112 被引量：454H指数：12; 供职机构：广西动物疫病预防控制中心更多>>; 发文基金：广西省自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西科技创新能力与条件建设项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生机械工程更多>>

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PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV多重RT-PCR检测方法的建立: 针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪Delta冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)基因序列，分别设计特异性引物，扩增PEDVN基因(750bp)、TGEVM基因(544 bp)、...; 王睿敏施开创黎宗强尹彦文谢守玉莫胜兰陆文俊屈素洁; 关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪轮状病毒多重RT-PCR

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型共感染对外周血单个核细胞促炎细胞因子mRNA表达的影响被引量：8: 2009年; 将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)单感染和共感染6周龄健康仔猪,采用Real-ti me PCR技术对外周血单个核细胞(PBMC)中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α等促炎细胞因子的mRNA表达进行定量分析。结果表明,病毒感染后,PRRSV感染组、PCV2感染组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达水平均上调,其中PRRSV感染组的IL-6、IL-8显著上调,PCV2感染组的IL-6、IL-8和TNF-α显著上调;PRRSV/PCV2共感染组仅有IL-8和TNF-α的mRNA表达水平上调且差异显著;并且,PRRSV/PCV2共感染组IL-1β、IL-6和IL-8的mRNA表达水平均低于单独感染组,仅TNF-α的mRNA表达水平显著高于单感染组。结果提示,TNF-α的过量表达可能在PRRSV和PCV2协同致病机制中扮演重要角色。; 施开创杨汉春郭鑫邢华伟盖新娜陈艳红查振林; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染外周血单个核细胞促炎细胞因子

A型塞尼卡病毒与O型、A型、亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3: 2022年; 为建立鉴别检测A型塞尼卡病毒(SVA)与O型、A型、亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)的方法,针对SVA 3D基因与O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV VP1基因,分别设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同时检测SVA与O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。所建立的方法能特异性扩增SVA及O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV,与其他主要猪源病毒无交叉反应;对SVA与O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV质粒标准品的检出下限分别为2.50×10^(1)、2.50×10^(2)、2.50×10^(2)、2.50×10^(2)copies/μL;组内与组间重复性试验的变异系数均小于2%。应用所建立方法检测2019年来自广西的30份临床疑似样品,SVA和O型FMDV的检出阳性率分别为20%和70%,而未能检出A型和亚洲Ⅰ型FMDV。结果表明,本研究所建立的多重荧光定量RT-PCR方法为SVA与O型、A型、亚洲Ⅰ型FMDV的临床检测和流行病学调查提供了特异、敏感、高效的技术手段。; 施开创谢守玉赵晶莫胜兰刘惠心尹彦文司红彬屈素洁陆文俊冯淑萍粟艳琼; 关键词：口蹄疫病毒荧光定量RT-PCR

猪脑心肌炎病毒SYBR GreenⅠ real-time PCR检测方法的建立: 针对猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV) VP1基因序列设计并合成一对引物,构建含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR Green Ⅰ r...; Shi-kaichuang施开创陈进喜Chen-jinxiQu-sujie屈素洁Xu-ruisheng许瑞胜Xiong-yi熊毅Liu-qi刘棋陈汉忠Chen-hanzhonLi-gang李刚; 关键词：猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR 病原检测

猪源脑心肌炎病毒GXLC株全基因组序列测定与分析: 对猪源脑心肌炎病毒(EMCV)GXLC株进行全基冈组克隆、测序和分析。采用RT-PCR技术分段扩增基因组开放阅读框(ORF)，应用3’-RACE和5’-RACE技术扩增3’-UTR和5’-UTR，分别对扩增片段进行克隆和...; 施开创屈素洁陈进喜许瑞胜郑敏刘棋陈汉忠李刚; 关键词：同源性比较系统进化分析

猪非典型瘟病毒GX01-2018株全基因组分子特征的分析: 2019年; 猪非典型瘟病毒(APPV)被证实是新生仔猪先天性震颤的致病因子。为了解广西APPV流行毒株的分子遗传特征,采用RT-PCR分段扩增APPV阳性病料,经克隆、测序、拼接,获得1株APPV的全基因序列,遂被命名为GX01-2018株。结果显示,GX01-2018株基因组全长11 565 bp,包括一个编码3 635个氨基酸的阅读框(ORF)。同源性分析显示,GX01-2018株与国内代表毒株广西GX-CH_2016株、江西JX-JM01-2018A01株、广东China/GD-SD/2016株、广东GD株核苷酸序列的同源性分别为98.2%、92.9%、83.4%、90.8%。GX01-2018株与国外代表毒株美国000515株、德国Bavaria_S5/9株、奥地利AUT-2016_C株、荷兰NL1株核苷酸序列的同源性分别为87.8%、90.7%、90.5%、90.7%。上述国内外代表毒株间Npro、Erns、E2基因核苷酸序列的同源性分别为79.1%～97.2%、83.0%～98.4%、83.1%～96.8%。基于APPV全基因组以及E2、Npro、Erns基因核苷酸序列绘制遗传进化树,获得相似的进化树图。来自广西的GX01-2018株与欧洲型毒株位于一个分支,而同样来自广西的GX04/2017株与美洲型毒株位于另一个分支。表明APPV流行毒株具有遗传多样性,来自同一地区的流行毒株出现较大的遗传变异。; 尹彦文施开创孙文超莫胜兰陆文俊屈素洁; 关键词：基因组序列分子特征

2018年广西重要猪源病毒性疫病流行病学调查被引量：12: 2020年; 为了解2018年广西猪群重要疫病流行情况,试验采集广西各地的病死猪组织样品及病猪腹泻拭子,应用多重实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),应用多重实时荧光定量PCR检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、猪圆环病毒2型(PCV2)及猪圆环病毒3型(PCV3),应用多重RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRoV)。结果显示,所检测的694份组织样品中,CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV、PCV1、PCV2、PCV3的阳性率分别为11.10%、18.88%、7.20%、5.19%、2.45%、67.00%和5.76%;2种病原混合感染率为41.21%,3种病原混合感染率为4.32%,其中PRRSV和PCV2混合感染率最高。所检测的792份肠内容物及拭子腹泻样品中,PEDV、PDCoV、TGEV、PRoV的阳性率分别为9.72%、5.81%、1.77%和6.31%;2种病原混合感染率为5.30%,其中PEDV和PRoV混合感染率最高。结果表明,当前多种重要病毒性疫病仍在广西猪群发生和流行,并且多重感染普遍存在,应进一步加强监测和防控。; 施开创尹彦文王孝德谢守玉石永胜刘宏梅陆文俊屈素洁冯淑萍粟艳琼; 关键词：病毒性疫病流行病学调查

猪瘟病毒和不同型猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测方法的建立被引量：1: 2012年; 为建立能同时检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,针对CSFV和PRRSV的基因序列设计3对特异性引物,第1对引物扩增CSFV毒株NS2基因508bp片段,第2对引物扩增PRRSV美洲型经典毒株和变异毒株Nsp2基因338bp/248bp片段,第3对引物扩增PRRSV欧洲型毒株ORF5基因614bp片段。经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV毒株和PRRSV美洲型经典毒株、变异毒株及欧洲型毒株的多重RT-PCR方法。该方法可以特异扩增CSFV和PRRSV,而与猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)均无交叉反应;对CSFV和PRRSV 4种重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝/μL。对采集的106份临床疑似病料进行检测,结果CSFV和PRRSV变异株混合阳性4份,占3.77%(4/106);CSFV阳性7份,占6.60%(7/106);PRRSV变异株阳性17份,占16.04%(17/106)。结果表明,建立的多重RT-PCR检测方法可以用于CSFV和PRRSV的临床快速鉴别诊断和流行病学调查。; 莫胜兰施开创胡杰邹联斌陆文俊李军; 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒

猪促炎细胞因子多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用: 2012年; 为建立及应用定量检测猪促炎细胞因子mRNA表达水平的方法,从分子水平研究脑心肌炎病毒(EMCV)的致病机制,分别构建含有猪促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及管家基因β-actin基因片段的重组质粒标准品,建立了检测IL-1β/β-actin、IL-6/β-actin、TNF-α/β-actin的多重TaqMan real-time PCR检测方法。标准曲线的相关系数均达到0.998以上;初始模板的检出下限均达到10拷贝/μL;只有以目标cDNA为模板,并加入特异性引物和探针的反应才能检测到荧光信号;组内与组间的变异系数均小于2%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株感染仔猪心肌中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达水平进行检测。结果表明,所建立的多重TaqMan real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于猪IL-1β、IL-6、TNF-α基因的检测及定量分析。; 施开创梁媛陈芳芳屈素洁莫胜兰李军; 关键词：促炎细胞因子脑心肌炎病毒 TAQMAN探针

鸡传染性喉气管炎的研究 Ⅰ.鸡传染性喉气管炎病毒某些生物学特性的研究 Ⅱ.应用间接ELISA法检测鸡传染性喉气管炎病毒抗体的研究: 施开创

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