郑喜邦
- 作品数：72 被引量：167H指数：6
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金国家自然科学基金广西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- CRISPR/Cas9 knock-in介导的输卵管特异性表达转基因鸡研究进展
- 2020年
- 利用动物生物反应器生产重组蛋白是一种具有应用前景的生物技术。鸡输卵管生物反应器是理想的动物生物反应器之一,其优点在于表达的外源蛋白能够分泌到蛋清中,可避免蛋白提取过程中对鸡本身造成伤害,同时蛋清成分简单,便于后期的纯化。目前利用慢病毒结合原始生殖细胞(PGCs)制备转基因鸡被认为是最可行的方法,但因外源基因随机整合且生殖系传递效率较低,使转基因鸡研究受到技术上的限制。而2013年问世的CRISPR/Cas9基因敲入(CRISPR/Cas9 knock-in)技术能够使外源基因精准定向插入基因组特异性位点,这对生产输卵管特异性转基因鸡具有重大意义。文章综述了鸡输卵管反应器的研究进展、CRISPR/Cas9 knock-in技术在输卵管特异性表达转基因鸡研究和鸡育种领域的应用现状,并指出了目前存在的问题和相应的解决办法。
- 刘灵康郑喜邦
- 关键词：转基因鸡原始生殖细胞基因敲入
- 小鼠IL-1β、TNF-α TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及脑心肌炎病毒感染小鼠的检测被引量：7
- 2011年
- 为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后促炎细胞因子的表达水平、从分子水平深入研究EMCV的致病机制,本研究分别建立了检测小鼠IL-1β、TNF-α和管家基因β-actin 的 TaqMan real-time PCR 检测方法。该方法标准曲线的相关系数均达到0.998以上,检出下限均达到10copies/μL质粒标准品,组内与组间的变异系数均小于2%。应用该方法对猪源 EMCV GXLC 株人工感染小鼠的脑、心、脾中IL-1β、TNF-α mRNA 的转录水平进行检测,发现感染后第4dIL-1β、TNF-α mRNA 的转录水平达到峰值,并且与小鼠发病死亡高峰存在明显的时间相关性。本研究所建立的TaqMan real-time PCR 检测方法为小鼠促炎细胞因子的检测及定量分析提供了技术手段。
- 陈宏备施开创李向涛郑敏郑喜邦李军
- 关键词：脑心肌炎病毒小鼠促炎细胞因子荧光定量RT-PCR
- 山羊Sox2基因克隆、原核表达和GST融合蛋白纯化被引量：4
- 2009年
- 本研究旨在克隆山羊Sox2基因,构建pGEX-Sox2原核表达重组质粒,从大肠杆菌中获得纯化的GST-Sox2融合蛋白。应用RT-PCR方法从6周龄胎山羊生殖嵴扩增Sox2基因编码全序列,将其克隆到pMD18-T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体。重组质粒pGEX-Sox2转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳及Western blotting检测GST-Sox2融合蛋白表达,用谷胱甘肽Sepharose 4B介质分离纯化该融合蛋白。结果表明,山羊Sox2基因编码序列全长为960 bp;在优化的表达条件(1 mmol.L-1IPTG,22℃诱导16h)下,重组质粒(pGEX-Sox2)在大肠杆菌得到了高效表达;谷胱甘肽Sepharose 4B颗粒纯化蛋白得到预期大小的融合蛋白(约60 ku)。结论,本研究克隆了山羊Sox2基因,获得了纯化的GST-Sox2融合蛋白,为制备其多克隆抗体奠定了基础,为进一步研究山羊iPS细胞(Induced pluripotent stem cells)创造了条件。
- 郑喜邦杨照海刘平赵华卢晟盛卢克焕毕方方
- 关键词：原核表达蛋白纯化山羊
- 2例犬子宫蓄脓的诊断及治疗
- 犬子宫蓄脓是宠物临床常见产科疾病之一。本文报道了2例罹患子宫蓄脓病犬的诊断及治疗过程,旨在为犬子宫蓄脓临床综合诊疗提供参考资料。患犬临床常表现为精神沉郁,烦渴多尿、呕吐腹泻、腹围膨大、阴门红肿、阴道有异臭味分泌物排出、体...
- 韦茏芹陈胜玖韦金鱼王鹏霞郑喜邦
- 文献传递
- 结缔组织生长因子小干扰RNA的构建及其干扰效果检测被引量：1
- 2008年
- 目的:构建结缔组织生长因子(CTGF)基因的小干扰RNA(siRNA),并检测其对CTGF基因表达的干扰效果。方法:根据CTGF基因序列,设计2条合理的CTGF-siRNA,并将其克隆到siRNA载体pSliencer2.1-U6 neo中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性菌落进行酶切和测序鉴定;将构建成功的CTGF-siRNA重组质粒与带FLAG标签的CTGF表达载体共同转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测siRNA的干扰效果。结果:构建了2个CTGF-siRNA重组质粒,2条siRNA都有干扰作用,其中一条的干扰效果可达75%以上。结论:构建的CTGF-siRNA可为进一步研究CTGF的功能提供参考。
- 李勤操郑喜邦王晓晖杨智洪姜艳超丁丽华李杰萍叶棋浓
- 关键词：结缔组织生长因子小干扰RNA
- 草食动物血清铜蓝蛋白酶的活性测定被引量：6
- 1996年
- 草食动物血清铜蓝蛋白酶的活性测定郑喜邦张才骏（指导）（青海畜牧兽医学院西宁８１０００３）铜蓝蛋白酶（ｃｅｒｕｌｏｐｌａｓｍｉｎ，ＣＰ）是一种与铜结合的α２球蛋白，血清中约有９５％的铜存在于ＣＰ中，ＣＰ具有氧化酶特性，亦称铜氧化酶。据报道，血清（血浆）...
- 郑喜邦张才骏
- 关键词：草食动物血清活性
- 稳定表达牛Nanog基因的成纤维细胞制作、多能性分析及转基因克隆胚胎构建
- ES细胞具有自我更新和多向分化潜能，是遗传操作、发育生物学和疾病模型极具价值的研究工具。家畜的ES细胞建系可用于人类遗传疾病模型制作和细胞移植治疗;还可应用于旨在改进家畜自身的生产性能，进而提高畜产品的质量的畜种改良、抗...
- 郑喜邦
- 关键词：NANOG基因分子克隆转染转基因克隆
- 文献传递
- 禽类染色体制备方法的比较研究被引量：4
- 2003年
- 以引进品种尼克红鸡为研究对象,对制备禽类染色体的外周血淋巴细胞培养法、羽髓法和改进的骨髓法进行了比较研究。结果表明:(1)外周血淋巴细胞培养法和羽髓细胞培养法制备染色体均未获得成功,因其操作复杂,技术条件要求高,周期长,成本高,可能不适宜于禽类的染色体制备。(2)直接羽髓法和改进的直接骨髓法以及骨髓短期孵育法却获得了成功,由于操作简便,周期短,成本低,适宜于禽类的染色体制备。
- 郑喜邦何宝祥张翊华
- 关键词：禽类染色体
- 水牛有腔卵泡颗粒细胞凋亡的生物形态学特征被引量：2
- 2006年
- 为了解水牛有腔卵泡闭锁的起因和有腔卵泡中是否存在卵泡颗粒细胞凋亡,本研究选择青春期前水牛和成年(发情间期和发情期)水牛的卵巢,采用石蜡组织切片、HE染色技术进行光镜观察,并采用DNA原位末端标记(TUNEL)技术和透射电镜观察研究了卵泡颗粒细胞凋亡的特征。结果表明:青春期前水牛的健康有腔卵泡上无或仅有极个别凋亡的卵泡颗粒细胞(GCs),而闭锁有腔卵泡上存在有多量凋亡的GCs,凋亡的形式:GCs层内出现单个或多个凋亡细胞,卵泡腔内出现凋亡小体群。在成年水牛发情间期的闭锁大卵泡上,GCs层弯曲皱折,存在多量凋亡的GCs。发情期水牛成熟卵泡的GCs层也存在GCs凋亡,排卵前的GCs层细胞全部脱落到卵泡腔内。本研究首次在同一组织切片上先后分别应用HE染色和TUNEL检查细胞凋亡,且证实了水牛有腔卵泡GCs凋亡的存在。超微结构显示了GCs凋亡的核边集化、核浓缩及凋亡小体的形态。上述结果提示:在水牛闭锁有腔卵泡中存在着GCs凋亡,GCs凋亡是启动水牛有腔卵泡闭锁的潜在机理。
- 何宝祥郑喜邦杜玉兰余四九李恭贺李彩萍
- 关键词：水牛细胞凋亡卵泡颗粒细胞TUNEL
- 麻保静对绵羊的麻醉观察
- 1992年
- 在20只青海杂种绵羊中进行麻保静麻醉试验。结果表明:麻保静按1.5mg/kg 的剂量进行肌肉注射,能使绵羊较快地进入麻醉状态;麻保静对杂种绵羊的主要影响是:体温下降,脉搏变慢,呼吸频率先增快后减慢,唾液分泌量减少。
- 宁顺章何富汉郑喜邦
- 关键词：绵羊麻醉
