谢莲英
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：厦门大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 凝血靶向通用效应因子tTF/SA融合蛋白的表达及活性鉴定
- 2007年
- 制备凝血靶向通用效应因子tTF/SA融合蛋白,并鉴定其生物学活性。利用PCR技术构建tTF与链霉亲和素SA的融合基因,克隆至表达载体pET22b(+),在E.coliBL21(DE_3)中表达,镍亲和层析柱纯化tTF/SA融合蛋白。凝血实验和FⅩ活化实验鉴定融合蛋白中tTF的活性,ELISA鉴定融合蛋白中SA与生物素Biotin结合的活性。获得序列正确的tTF/SA/pET22b(+)重组子,融合基因在E.coliBL21(DE_3)中高效表达。纯化后的融合蛋白具有活化FⅩ、引起血液凝固的能力,且能与生物素结合。融合基因已成功在E.coliBL21(DE_3)中表达,tTF/SA融合蛋白具有TF和SA活性。融合蛋白tTF/SA可作为通用效应因子,与生物素化的肿瘤组织血管特异性载体联用,实现选择性诱发肿瘤组织血管栓塞的多点治疗。
- 王臻颜江华王阶平谢莲英吴娜
- 关键词：融合蛋白血管栓塞
- 人源化抗人肺癌单域抗体基因的构建、表达及活性分析被引量：6
- 2006年
- 目的:构建人源化的抗人肺癌单域抗体hu3D3VH基因,在大肠杆菌中表达,对其蛋白活性进行分析。方法:采用CDR移植技术对mAb3D3的重链可变区进行人源化,通过重叠PCR获得hu3D3VH的基因。构建pET22(b+)/hu3D3VH表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达。表达产物通过Ni亲和层析柱纯化。采用间接ELISA和竞争抑制ELISA法进行活性分析。结果:通过重叠PCR获得序列正确的目的基因。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,目的蛋白的纯度达95%以上。hu3D3VH具有与亲本抗体相同的抗原反应性,并能抑制mAb3D3与L342细胞的结合。结论:获得的人源化单域抗体hu3D3VH,保留了与mAb3D3相同的反应性和特异性,为进一步临床应用奠定了基础。
- 王阶平庄国洪杨桂旺王臻李文珠谢莲英颜江华
- 关键词：人源化活性分析
- ADPN基因构建、蛋白表达及其对宫颈癌Hela细胞生长的影响
- 脂联素/(Adiponectin,ADPN/)表达水平的降低与乳腺癌、前列腺癌、胃癌等的发生存在负相关,血浆ADPN水平可以作为肿瘤发生的一个重要检测指标。体外研究报道,ADPN能抑制乳腺癌和前列腺癌细胞的生长。而有关A...
- 谢莲英
- 关键词：凋亡
- 文献传递
- 重组人脂联素基因构建、表达、纯化及活性鉴定被引量：2
- 2007年
- 根据脂联素cDNA序列设计并合成9条寡聚核苷酸片段,经重叠PCR技术获得重组人脂联素基因.构建pET-22b(+)/ADPN表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上.表达产物通过Ni-NTA柱纯化,SDS-PAGE分析显示,其分子量约为30 ku,与预期结果一致.内皮细胞生长抑制实验证实,重组人脂联素生理浓度下具有抑制人内皮细胞生长的活性并呈时间依赖性.以上工作为进一步研究脂联素的生物学功能奠定了基础.
- 谢莲英张长弓吴娜王臻颜江华
- 关键词：脂联素基因构建蛋白表达
- 重组人瘦素的基因构建、表达及活性鉴定被引量：1
- 2006年
- 根据NCBI中公布的人瘦素cDNA序列，设计并合成了6个89bp左右的DNA小片段，经重叠延伸PCR扩增获得464bp的rhLep的完整基因片段。构建pET22b（＋）／rhLep表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达。目的蛋白以包涵体的形式表达，表达量占菌体总蛋白的50％以上。表达产物用Ni^2＋亲和层析柱纯化，SDS-PAGE结果表明，含6×His标签的目的蛋白的相对分子量约16kD。MTT比色法实验显示，当低剂量（10～30ng／mL）时，rhLep具有促进内皮细胞生长的作用；在高剂量（50-225ng／mL）时，rhLep具有杀伤人内皮细胞的活性。其最大杀伤率达到98．8％。吖啶橙荧光染色观察到高剂量rhLep对人内皮细胞有明显的凋亡作用。以上工作为进一步了解瘦素的体内体外生物活性奠定了基础。
- 吴娜张长弓谢莲英王臻颜江华
- 关键词：瘦素基因构建细胞存活率
