朱小宁
- 作品数：7 被引量：27H指数：3
- 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：湖南省科技重大专项长沙市科技计划项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 副猪嗜血杆菌Neu基因的克隆表达及表达产物的免疫原性被引量：4
- 2010年
- 为研究副猪嗜血杆菌(HPS)基因工程疫苗,以HPS5型毒株为模板,通过PCR扩增获得副猪嗜血杆菌神经氨酸酶(Neu)全基因,将其克隆至pMD18-T载体并对其进行测定和分析。结果表明,Neu全基因含一个2187bp的开放阅读框,编码一含729个氨基酸的蛋白,与Neu基因参考序列(登录号:NZ-ABKM01000006)的同源性为99.0%。以pMD-Neu基因为模板,重新设计引物,扩增得到HPSNeu蛋白的部分编码区,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建得到重组原核表达质粒pET-Neu。将pET-Neu在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,经SDS-PAGE分析,重组蛋白Neu主要以包涵体形式表达,分子质量为52ku;Western-blot分析表明,重组蛋白Neu能与阳性血清发生特异性抗原反应。将纯化重组蛋白Neu试验性注射免疫昆明小鼠,攻毒试验结果显示,氢氧化铝佐剂组的保护性较低,仅有10%;而弗氏佐剂组具有较高的保护性,保护率高达60%。
- 刘俊琦余兴龙蒋大良朱小宁李润成肖利军刘春红罗维葛猛
- 关键词：副猪嗜血杆菌神经氨酸酶原核表达免疫原性
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的原核表达及其表达产物的免疫原性被引量：7
- 2010年
- 根据GenBank中登录的副猪嗜血杆菌(HPS)D15基因鸟枪序列(登录号:NZ_ABKM01000005)设计1对特异性引物,以HPS5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增了D15基因。将其进行T-A克隆,构建pMD18D15质粒并进行序列测定和分析。结果表明,D15基因含有一个2418bp的开放阅读框,编码805个氨基酸,与D15基因参考序列的同源性为99.9%。该HPSD15基因的推导氨基酸序列具有典型Omp85蛋白家族的拓扑结构特征。以pMD18D15质粒为模板,用PCR方法扩增HPSD15基因,并将其克隆到pET-28a(+)中,构建pETD15原核表达质粒,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG诱导重组菌,并用SDS-PAGE和Western-blot检测诱导物。结果表明,pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白的分子质量约为94ku,融合蛋白能被HPS阳性血清识别,提示该融合蛋白具有反应原性。昆明小鼠和豚鼠免疫试验结果表明,D15重组蛋白具有一定的诱导免疫保护反应的能力。
- 朱小宁余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军将大良
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白原核表达免疫原性
- 副猪嗜血杆菌的分离与鉴定及其16S rRNA生物信息学分析被引量：18
- 2009年
- 从湖南省内送检的疑似患多发性浆膜炎与关节炎的猪病料中分离到12株细菌,细菌学试验证明12株细菌均符合副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)形态、培养和生化特性.根据HPS16SrRNA序列设计引物对12株细菌进行PCR扩增,均得到预期目的条带,将扩增片段测序并运用DNAStar软件与GenBank中不同血清型HPS基因序列进行比对,表明其与Genbank中已公布的不同血清型HPS菌株16SrRNA序列的同源性为90.4%～99.9%,其中与血清5型同源性最高,对所测序列与参考序列进行遗传进化树分析,结果表明其中11株属于血清5型HPS.
- 朱小宁余兴龙李润成颜运秋刘俊琦罗维杨大为葛猛王亚李薇
- 关键词：副猪嗜血杆菌RRNA
- 副猪嗜血杆菌的分离鉴定及其外膜蛋白D15的免疫原性研究
- 猪革拉泽氏病(Glasser’s Disease)是由副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)引起的一种以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为典型特征的传染病。本实验室从湖南省内送检的疑似HPS...
- 朱小宁
- 关键词：副猪嗜血杆菌克隆表达免疫原性
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性分析
- 根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZBKM01000005,设计一对特异性引物,以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段.将其进行T-A克隆,构建pETD15质粒并进...
- 朱小宁余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军将大良
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白原核表达免疫原性
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5基因的表达及表达产物的免疫原性分析被引量：2
- 2010年
- 实验通过将副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白(Outer membrane protein,OMP)P5基因克隆至pET-28a(+)中,构建pET-OMP5原核表达质粒,再将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),通过IPTG诱导重组菌,SDS-PAGE显示pET-OMP5重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,Western-blot表明融合蛋白能被阳性血清识别。昆明小鼠试验结果表明OMP5重组蛋白具有一定的诱导免疫保护反应的能力。
- 刘俊琦余兴龙朱小宁蒋大良李润成肖利军刘春红
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白免疫原性
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性分析
- 根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZ_ABKM01000005，设计一对特异性引物，以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板，通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段。将其进行T-A克隆，构建pETD15质粒...
- 朱小宁将大良余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白免疫原性
- 文献传递
