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绵羊Musclin基因5’调控区元件的预测和分析: 2012年; Musclin是由Nishizawa等(2004)采用信号序列捕获(signal sequence trap,SST)技术在小鼠首次发现的一种肌源性细胞因子,与肌肉的营养代谢有关。为了研究Musclin基因在骨骼肌的转录调控机制,我们克隆了绵羊Musclin基因的部分5’调控区序列,分析了不同物种之间的同源性。; 杜荣秦健关宏张红强周英刘文花侯健安晓荣; 关键词：调控区生物信息学分析肌源性营养代谢转录调控机制同源性

利用Cre／lox重组系统在转基因动物中筛选高效表达外源基因的“友好”基因座被引量：3: 2004年; 本实验的目的是利用Cre／lox重组系统进行“友好”基因座的筛选，即利用一个两端带有lox位点的标记基因去转染动物细胞或生产转基因动物，获得可以高效表达外源基因的“友好”基因座。一旦筛选到好的基因座，就建成了一个可以在动物体稳定地高效表达外源基因的技术平台。为此，利用野生型loxP位点和含有一个点突变的lox511位点分别构建两个载体pSL-loxGFP和pSL-loxIFN。首先将含有GFP和新霉素基因的质粒pSL-loxGFP DNA转染牛胎儿成纤维细胞，并用G418筛选，挑选出发绿色荧光的细胞克隆。经增殖培养之后，再将含有鸡γ-干扰素基因的质粒pSL-loxIFN和含有Cre重组酶基因的质粒pBS185 DNA共转染发荧光的细胞克隆，筛选出发生重组后不再发光的细胞克隆。用PCR法检测了两个不发荧光的细胞克隆及发荧光的细胞克隆，并使用质粒pSL-loxIFN、质粒pSL-loxGFP及牛基因组作为对照。检测结果显示，在Cre重组酶的作用下，两个不发荧光的细胞克隆中，一个发生了基因置换，另一个发生了基因删除。以上实验表明，巧妙地用Cm／lox重组系统，可以构建一套使外源基因在动物体内定点地高效表达的技术体系。; 桑璐郭英任立明安晓荣候健关宏陈永福; 关键词：细胞克隆 IFN 基因座共转染 CRE/LOX

兔转基因单细胞克隆株的分离培养及其染色体倍性分析被引量：4: 2002年; 为检测原代二倍体细胞转基因后单细胞克隆的增殖能力及其染色体倍性稳定性 ,用脂质体介导的转染方法将质粒DNApEGFP -C1(带有报告基因GFP和Neor)导入体外培养的兔胎儿成纤维细胞中 ,经G4 18药物筛选后 ,分离出 73个GFP阳性细胞克隆 ,最后存活 13个 (18% ) ,对其中 9个克隆的染色体倍性进行分析 ,结果只有 2个 (2 2 % )克隆的染色体倍性正常率在 75 %以上 ,分别为 80 %和 75 % ,其余 7个克隆的染色体倍性正常率均在 70 %以下。这表明 ,当使用转基因单细胞克隆株作为供核细胞生产克隆动物时 ,单细胞克隆的增殖代数和染色体倍性的稳定性需要进一步研究提高。; 侯健安晓荣关宏苟克勉林爱星陈永福; 关键词：染色体倍性核型分析

胞浆内精子注射技术生产小鼠被引量：11: 2005年; 以piezo操作系统为技术支撑 ,在掌握小鼠卵母细胞胞浆内精子注射技术 (ICSI)的基础上 ,进行了ICSI技术生产试管小鼠的尝试。来自成年昆明 (KM)小鼠附睾尾的新鲜精子 ,剪切去尾后 ,直接将精子头注射到B6D2F1小鼠卵母细胞质中 ,注射后 1h ,83 .3%的卵母细胞存活。6h时 ,84 . 0 %的成活卵子成功受精 ,形成原核 ,排出PB2 体外培养的ICSI胚胎 ,卵裂率 (98%vs 94 . 7% )和 4_细胞期胚胎比率 (89 5 %vs 92 . 1% )均与培养的体内受精卵没有差异 (P >0 . 0 5 ) ;但是 ,桑椹胚(6 3 8%vs84 . 2 % )和囊胚发育率 (2 5 .7%vs 6 8. 4 % )极显著地 (P <0 . 0 1)低于对照组。12 0枚原核期胚胎移植给 7只假孕受体后 ,4只受孕小鼠共产出 2 8只ICSI小鼠 (2 3. 3% )。健康成年的 2 5只ICSI小鼠都没有明显的生理和行为异常。随机选择其中的 2 0只小鼠 ,分别进行ICSI小鼠间、ICSI与KM小鼠间共 12组的交配 ,结果所有雌鼠妊娠产仔。在成功建立小鼠ICSI技术的基础上 ,成功获得了我国的首例ICSI小鼠 ,并且证明这些ICSI小鼠都具有正常的繁殖后代的能力。; 严阿勇李明安晓荣侯健关宏陈永福苟克勉; 关键词：ICSI 囊胚小鼠生殖力

不同因素对绵羊同期发情的影响被引量：15: 2008年; 用CIDR(阴道栓)和PMSG(孕马血清促性腺激素)处理小尾寒羊、蒙古绵羊、小尾寒羊和东北绵羊的杂交品种,注射PMSG后24h引入试情公羊,以便确定母羊是否发情。实验结果表明:在繁殖季节,不同品种绵羊的同期发情率无显著差异(P>0.05);季节影响小尾寒羊的同期发情效果;阴道栓放置时间的长短影响同期发情率,以12～14d为宜;用450UPMSG处理羊比400U的只平均排卵数稍高(1.545±0.741n=299,1.505±0.647n=88),但不存在统计学上的差异(P>0.05).; 李秋艳阎凤祥侯健关宏陈永福安晓荣; 关键词：绵羊 PMSG 阴道栓同期发情

卵丘细胞核移植技术生产克隆牛犊被引量：40: 2002年; 分别以短期培养的5头牛卵丘细胞（1～5 BCC）为细胞核供体,共用1188枚体外成熟的去核卵母细胞构建了931枚重构胚（78.4％）.体外培养后,763枚（82％）发育至2-细胞期,627枚（67.3％）发育至8-细胞期,最后获得囊胚275枚（29.5％）.囊胚的平均细胞数为124±24.5（n=20）.分析不同个体来源的卵丘细胞,同一个体卵丘细胞饥饿与否以及饥饿时间的长短、融合后核/质相容时间（融合到激活的时间长短）等因素对核移植效率的影响发现,5个个体的体细胞核移植囊胚率（14.1％,45.2％,27.3％,34.3％vs1.5％）有显著差异（P<0.05）.同一供体细胞饥饿与否（47.1％vs44.4％）、饥饿11～12 d（52.5％）和18～19 d（41.6％）均不影响核移植囊胚率（P≥0.05）.核/质相容2～3h的囊胚率（20.3％）显著低于3～6h组（31.0％,P<0.05）.3～6h范围内,囊胚率无差异（P≥0.05）.其中63枚冷冻的核移植囊胚解冻后移植给31头受体牛,妊娠4例,最后顺利获得2头克隆牛犊.结果表明,牛卵丘细胞饥饿不是核移植成功的关键因素,核质相容程度和供体细胞的个体差异对核移植效率有一定影响.卵丘细胞能够获得全程发育的克隆牛犊.; 安晓荣苟克勉关宏侯健林爱星陈永福朱士恩曾申明田见晖; 关键词：卵丘细胞囊胚牛犊克隆

绵羊Musclin基因5'调控区元件的预测和分析: Musclin是由Nishizawa等(2004)采用信号序列捕获(signal sequence trap,SST)技术在小鼠首次发现的一种肌源性细胞因子,与肌肉的营养代谢有关。为了研究Musclin基因在骨骼肌的转录...; 杜荣秦健关宏张红强周英刘文花侯健安晓荣; 文献传递

猫重组变应原Fel d 1与乙肝病毒核心抗原融合基因的原核表达被引量：3: 2016年; 为将猫重组变应原Fel d 1蛋白展示在乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒的表面,本试验将编码Fel d 1蛋白的两个基因chain1和chain2拼接在一起形成重组Fel d 1(rFel d 1),然后插入到HBcAg的c/e1loop区,取代HBcAg c/e1loop区的D78与E83之间的氨基酸。经密码子优化后进行全基因合成,成功构建了pET28aHBcAg-rFel d 1原核表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核诱导表达与Ni-NTA亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE电泳、Western blotting和透射电镜检测。结果显示,本试验成功表达了HBcAg-r Fel d 1融合蛋白,并利用镍柱纯化得到了较纯的HBcAg-rFel d 1融合蛋白,进一步利用负染法透射电子显微镜检测到HBcAgrFel d 1融合蛋白呈现病毒样颗粒结构。HBcAg-rFel d 1融合蛋白能自发形成病毒样颗粒结构,为猫过敏症的预防与治疗性疫苗的开发奠定基础。; 裴业春安晓荣侯健陈永福闫凤祥关宏韦双双王大勇; 关键词：乙肝病毒核心抗原 FEL 病毒样颗粒

一种提高羔羊体外胚胎发育能力的方法: 本发明公开了一种提高羔羊体外胚胎发育能力的方法。本发明提供了一种促进羔羊卵子体外成熟的方法，为将离体羔羊的卵母卵丘细胞复合体在添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液中进行体外成熟培养，实现促进羔羊卵子体外成熟。本发明用添加成...; 侯健田浩关宏闫凤祥; 文献传递

绵羊肌肉抑制素C-端的表达、纯化及多克隆抗体的制备: 2009年; 为深入了解绵羊myostatin基因的表达及调控机理,进行了绵羊myostatin蛋白多克隆抗体的制备。首先将绵羊myostatin基因C-端克隆入含组氨酸标签的表达载体pET-30a-c(+)中,转化大肠杆菌BL21后IPTG诱导表达,然后利用Ni2+亲和层析纯化重组蛋白,薄层扫描及Bradford法分别检测纯化后蛋白的纯度与含量。应用重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法检测多克隆抗体效价,用Western blot及免疫细胞化学染色检测抗体特异性。结果,薄层扫描分析纯化后蛋白纯度可达95%以上,Bradford法检测蛋白浓度约5 mg.mL-1,制备的抗血清效价可达1∶250 000以上,Western blot检测证明抗体特异性良好,免疫细胞化学染色表明抗血清可检测到肌肉细胞中内源性myostatin的表达,说明所制备的多克隆抗体可以应用于进一步研究,有助于阐明绵羊myostatin的表达及调控机理。; 马毅舒建洪李晴关宏安晓荣陈永福; 关键词：绵羊克隆原核表达纯化多克隆抗体

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关宏

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