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侯健: 作品数：54 被引量：139H指数：6; 供职机构：中国农业大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>

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兔转基因单细胞克隆株的分离培养及其染色体倍性分析被引量：4: 2002年; 为检测原代二倍体细胞转基因后单细胞克隆的增殖能力及其染色体倍性稳定性 ,用脂质体介导的转染方法将质粒DNApEGFP -C1(带有报告基因GFP和Neor)导入体外培养的兔胎儿成纤维细胞中 ,经G4 18药物筛选后 ,分离出 73个GFP阳性细胞克隆 ,最后存活 13个 (18% ) ,对其中 9个克隆的染色体倍性进行分析 ,结果只有 2个 (2 2 % )克隆的染色体倍性正常率在 75 %以上 ,分别为 80 %和 75 % ,其余 7个克隆的染色体倍性正常率均在 70 %以下。这表明 ,当使用转基因单细胞克隆株作为供核细胞生产克隆动物时 ,单细胞克隆的增殖代数和染色体倍性的稳定性需要进一步研究提高。; 侯健安晓荣关宏苟克勉林爱星陈永福; 关键词：染色体倍性核型分析

卵丘细胞核移植技术生产克隆牛犊被引量：41: 2002年; 分别以短期培养的5头牛卵丘细胞（1～5 BCC）为细胞核供体,共用1188枚体外成熟的去核卵母细胞构建了931枚重构胚（78.4％）.体外培养后,763枚（82％）发育至2-细胞期,627枚（67.3％）发育至8-细胞期,最后获得囊胚275枚（29.5％）.囊胚的平均细胞数为124±24.5（n=20）.分析不同个体来源的卵丘细胞,同一个体卵丘细胞饥饿与否以及饥饿时间的长短、融合后核/质相容时间（融合到激活的时间长短）等因素对核移植效率的影响发现,5个个体的体细胞核移植囊胚率（14.1％,45.2％,27.3％,34.3％vs1.5％）有显著差异（P<0.05）.同一供体细胞饥饿与否（47.1％vs44.4％）、饥饿11～12 d（52.5％）和18～19 d（41.6％）均不影响核移植囊胚率（P≥0.05）.核/质相容2～3h的囊胚率（20.3％）显著低于3～6h组（31.0％,P<0.05）.3～6h范围内,囊胚率无差异（P≥0.05）.其中63枚冷冻的核移植囊胚解冻后移植给31头受体牛,妊娠4例,最后顺利获得2头克隆牛犊.结果表明,牛卵丘细胞饥饿不是核移植成功的关键因素,核质相容程度和供体细胞的个体差异对核移植效率有一定影响.卵丘细胞能够获得全程发育的克隆牛犊.; 安晓荣苟克勉关宏侯健林爱星陈永福朱士恩曾申明田见晖; 关键词：卵丘细胞囊胚牛犊克隆

一种抗氧化剂在动物卵母细胞体外成熟中的应用: 本发明公开了一种抗氧化剂在动物卵母细胞体外成熟中的应用。本发明提供的改进动物卵母细胞体外成熟的方法，包括：在动物卵母细胞体外成熟液中添加艾地苯醌。本发明还提供了一种艾地苯醌在改进动物卵母细胞体外成熟中的应用。具体的，所述...; 侯健田浩刘克雄; 文献传递

猫重组变应原Fel d 1与乙肝病毒核心抗原融合基因的原核表达被引量：2: 2016年; 为将猫重组变应原Fel d 1蛋白展示在乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒的表面,本试验将编码Fel d 1蛋白的两个基因chain1和chain2拼接在一起形成重组Fel d 1(rFel d 1),然后插入到HBcAg的c/e1loop区,取代HBcAg c/e1loop区的D78与E83之间的氨基酸。经密码子优化后进行全基因合成,成功构建了pET28aHBcAg-rFel d 1原核表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核诱导表达与Ni-NTA亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE电泳、Western blotting和透射电镜检测。结果显示,本试验成功表达了HBcAg-r Fel d 1融合蛋白,并利用镍柱纯化得到了较纯的HBcAg-rFel d 1融合蛋白,进一步利用负染法透射电子显微镜检测到HBcAgrFel d 1融合蛋白呈现病毒样颗粒结构。HBcAg-rFel d 1融合蛋白能自发形成病毒样颗粒结构,为猫过敏症的预防与治疗性疫苗的开发奠定基础。; 裴业春安晓荣侯健陈永福闫凤祥关宏韦双双王大勇; 关键词：乙肝病毒核心抗原 FEL 病毒样颗粒

一种提高羔羊体外胚胎发育能力的方法: 本发明公开了一种提高羔羊体外胚胎发育能力的方法。本发明提供了一种促进羔羊卵子体外成熟的方法，为将离体羔羊的卵母卵丘细胞复合体在添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液中进行体外成熟培养，实现促进羔羊卵子体外成熟。本发明用添加成...; 侯健田浩关宏闫凤祥; 文献传递

一种羊胚胎玻璃化冷冻保存液配方及冷冻方法: 本发明公开了一种羊胚胎玻璃化冷冻液及冷冻方法。该冷冻液包括基础液、蔗糖、乙二醇和丙二醇；其中，基础液由SOF‑HEPES溶液和胎牛血清组成，体积比为6‑9：2‑1；蔗糖在冷冻液中的浓度为0.5‑0.8mol/L；乙二醇在...; 侯健高恩恩; 文献传递

一种诱导动物体外细胞可逆永生化的载体及其应用: 本发明公开了一种诱导动物体外细胞可逆永生化的载体及其应用。本发明所提供的诱导动物体外细胞可逆永生化的载体含有大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因，以及表达盒1和表达盒2；所述表达盒1从上游到下游依次包括如下元件：P<S...; 侯健张娜安晓荣; 文献传递

一种羊胚胎玻璃化冷冻保存液配方及冷冻方法: 本发明公开了一种羊胚胎玻璃化冷冻液及冷冻方法。该冷冻液包括基础液、蔗糖、乙二醇和丙二醇；其中，基础液由SOF‑HEPES溶液和胎牛血清组成，体积比为6‑9：2‑1；蔗糖在冷冻液中的浓度为0.5‑0.8mol/L；乙二醇在...; 侯健高恩恩; 文献传递

一种诱导动物体外细胞可逆永生化的载体及其应用: 本发明公开了一种诱导动物体外细胞可逆永生化的载体及其应用。本发明所提供的诱导动物体外细胞可逆永生化的载体含有大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因，以及表达盒1和表达盒2；所述表达盒1从上游到下游依次包括如下元件：P<S...; 侯健张娜安晓荣; 文献传递

胞浆内精子注射技术生产小鼠被引量：11: 2005年; 以piezo操作系统为技术支撑 ,在掌握小鼠卵母细胞胞浆内精子注射技术 (ICSI)的基础上 ,进行了ICSI技术生产试管小鼠的尝试。来自成年昆明 (KM)小鼠附睾尾的新鲜精子 ,剪切去尾后 ,直接将精子头注射到B6D2F1小鼠卵母细胞质中 ,注射后 1h ,83 .3%的卵母细胞存活。6h时 ,84 . 0 %的成活卵子成功受精 ,形成原核 ,排出PB2 体外培养的ICSI胚胎 ,卵裂率 (98%vs 94 . 7% )和 4_细胞期胚胎比率 (89 5 %vs 92 . 1% )均与培养的体内受精卵没有差异 (P >0 . 0 5 ) ;但是 ,桑椹胚(6 3 8%vs84 . 2 % )和囊胚发育率 (2 5 .7%vs 6 8. 4 % )极显著地 (P <0 . 0 1)低于对照组。12 0枚原核期胚胎移植给 7只假孕受体后 ,4只受孕小鼠共产出 2 8只ICSI小鼠 (2 3. 3% )。健康成年的 2 5只ICSI小鼠都没有明显的生理和行为异常。随机选择其中的 2 0只小鼠 ,分别进行ICSI小鼠间、ICSI与KM小鼠间共 12组的交配 ,结果所有雌鼠妊娠产仔。在成功建立小鼠ICSI技术的基础上 ,成功获得了我国的首例ICSI小鼠 ,并且证明这些ICSI小鼠都具有正常的繁殖后代的能力。; 严阿勇李明安晓荣侯健关宏陈永福苟克勉; 关键词：ICSI 囊胚小鼠生殖力