魏晓曼
- 作品数：18 被引量：26H指数：4
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金黑龙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 96孔板防错加样架
- 本实用新型提供了一种96孔板防错加样架，该加样架包括横滑板（1）和与横滑板（1）相互垂直的竖滑板（2），横滑板（1）与竖滑板（2）的两端分别置于96孔板（3）的板面上。本实用新型通过设置横滑板和竖滑板，在加样过程中，起到...
- 冉旭华闻晓波宋佰芬计红李冬野苗艳魏晓曼
- 文献传递
- 肝片吸虫组织蛋白酶L真核表达载体构建及重组蛋白活性分析被引量：3
- 2013年
- 目的构建肝片吸虫组织蛋白酶L(CatL)的真核表达载体,研究重组蛋白的生物学活性。方法以构建好的重组质粒pET30a-FhCatL为模板,利用PCR技术扩增肝片吸虫组织蛋白酶L基因(catL),连接真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-N1-CatL,转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光,Western blotting检测重组蛋白表达情况。结果重组质粒pEGFP-N1-CatL在HeLa细胞中获得了表达,Western blotting结果表明真核表达质粒表达的重组蛋白能与自然感染肝片吸虫的山羊阳性血清发生特异性反应。结论肝片吸虫CatL真核表达载体构建成功,真核表达产物可与自然感染的山羊阳性血清发生特异性反应,具有免疫反应性,可做为分子疫苗的候选和诊断抗原进行进一步的研究。
- 闻晓波冉旭华王春仁宋佰芬魏晓曼李晓娟王密苗艳
- 关键词：肝片吸虫真核表达活性分析
- 透析袋浮力夹
- 本实用新型提供了一种透析袋浮力夹，用于解决目前使用的夹子无法配合使用磁子搅拌的方式进行快速透析的问题。该透析袋浮力夹包括两个夹片和连接两夹片的轴，其中，夹片的另一端部设有可扣合连接的凹槽和弹性凸块，所述的夹片上设置有泡沫...
- 冉旭华沈冰蕾闻晓波计红李冬野魏晓曼苗艳
- 文献传递
- 破伤风毒素T细胞表位P2对猪轮状病毒△VP8^＊蛋白免疫原性的增强作用被引量：1
- 2016年
- 仔猪轮状病毒腹泻严重危害养猪业，为了开发亚单位疫苗，本课题组前期构建了猪轮状病毒SB-1A株截短的VP8^＊蛋白（△VP8^＊，64～223位氨基酸）原核表达载体pET28a—SB1A△VP8^＊。为了进一步提高亚单位疫苗的免疫原性，将破伤风毒素的通用T细胞表位P2引入重组亚单位蛋白，构建重组载体pET28a—P2-SB-IA△VP8^＊。P2-S13-1A△VP8^＊和S13-1A△VP8^＊在大肠杆菌中表达并纯化。重组蛋白与氢氧化铝佐剂混合后经肌肉注射免疫Balb／c小鼠，利用间接ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平。结果显示：P2-S13-1A△VP8^＊和S昏1A△VP8^＊在大肠杆菌中得到了高水平、可溶性表达；重组蛋白P2-SB-1A△VP8^＊诱导的血清抗体水平显著高于SB-1A△VP8^＊，说明P2可以增强SB-1A△VP8^＊的免疫原性，为日后开发猪轮状病毒亚单位疫苗奠定了基础。
- 闻晓波魏晓曼冉旭华曹思张峣倪宏波张玲玲
- 关键词：猪轮状病毒T细胞表位P2
- 重力亲和层析柱架
- 本实用新型提供了一种重力亲和层析柱架，专门用于重力亲和层析试验，解决目前使用夹子进行简单固定存在的易脱落以及装卸不便的问题。该重力亲和层析柱架包括支撑杆、底座、挡板，支撑杆插装在底座上，支撑杆上设置有辅撑环，支撑杆与辅撑...
- 闻晓波冉旭华宋佰芬李冬野计红苗艳魏晓曼
- 文献传递
- 药敏试验快诊培养皿
- 本实用新型提供了一种药敏试验快诊培养皿，该培养皿包括皿底和与皿底配套使用的皿盖，所述的皿底上设置有药物圈，药物圈与皿底边缘之间设置长度刻度线。本实用新型通过设置药物圈，使用时，直接将含有定量抗菌药的滤纸片贴在药物圈处即可...
- 冉旭华沈冰蕾闻晓波计红李冬野魏晓曼苗艳
- 文献传递
- 猪轮状病毒ΔVP8*亚单位重组蛋白及其应用
- 本发明涉及一种猪轮状病毒ΔVP8*亚单位重组蛋白以及该蛋白的编码基因。本发明还提供了在该重组蛋白中增加破伤风毒素T细胞表位P2后所形成的重组蛋白以及编码基因。本发明的ΔVP8*蛋白为VP8*中第64-223位氨基酸，能有...
- 冉旭华翟军军闻晓波魏晓曼张峣曹思张春山崔玉东
- 文献传递
- 猪轮状病毒Gottfried株和SB-1A株截短VP8基因的原核表达、蛋白纯化及免疫原性分析被引量：5
- 2013年
- 目的原核表达猪轮状病毒(porcine rotavirus,PRV)Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化重组蛋白,并检测其免疫原性。方法经PCR从含有全长VP4基因片段的重组质粒pCR4-Gottfried VP4和pCR4-SB-1A VP4中分别扩增截短的VP8*基因(△VP8*,64～223位氨基酸),分别插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-Gottfried-△VP8*和pET-28a-SB-1A-△VP8*,分别转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。应用ProBondTMResin纯化两种重组蛋白,重组蛋白与A(lOH)3佐剂混合后,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平。结果两种重组表达质粒经双酶切和测序证实构建正确;表达的两种目的蛋白相对分子质量约25 000,均以包涵体和可溶性两种形式存在,均可与鼠源抗Histag单克隆抗体特异性结合;纯化的两种重组蛋白纯度均在95%以上,免疫BALB/c小鼠可产生较高的血清抗体水平。结论成功在大肠埃希菌中表达了PRV Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化的两种蛋白免疫原性较好,为进一步研制安全、高效的PRV亚单位疫苗奠定了基础。
- 魏晓曼闻晓波冉旭华崔玉东
- 关键词：猪轮状病毒原核细胞免疫原性
- 猪轮状病毒重组VP8*蛋白的原核表达及免疫原性分析被引量：5
- 2015年
- 为了分析原核表达的猪轮状病毒（PRV）Gottfried株截短的VP8＊（△VP8＊aa64—223）重组蛋白的免疫原性，通过构建原核表达载体pET-28a—Gotffried—△VP8＊（aa64—223），转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达、经SDS—PAGE和Westernblotting检测，并纯化后，肌肉免疫Balb／c小鼠，证明重组蛋白相对分子质量约25．0kDa，以包涵体和可溶性两种形式存在，纯化的重组蛋白纯度在95％以上，可溶性蛋白产量可达14～15mg·L-1。ELISA方法检测表明该重组蛋白可以诱导高滴度的特异性抗体，证明其具有良好的免疫原性，为进一步研制PRV亚单位疫苗及建立ELISA诊断方法奠定基础。
- 毕艳铎魏晓曼冉旭华曹思张峣张玲玲苗艳闻晓波
- 关键词：猪轮状病毒原核表达
- 牛轮状病毒UK株NSP1基因序列分析及原核表达被引量：2
- 2015年
- 轮状病毒是引起多种幼龄动物及5周龄以下儿童腹泻的主要病原体。NSP1非结构蛋白是轮状病毒基因5的产物,为长约55ku的RNA结合蛋白。现已发现NSP1蛋白是一种毒力决定因子,可颉颃宿主先天性免疫应答。参照GenBank收录的牛轮状病毒UK株序列设计并合成1对特异性引物,本试验利用RT-PCR方法扩增牛轮状病毒UK株NSP1基因,克隆入pET-28a(+)表达载体,经双酶切和测序鉴定,并利用分子生物学软件进行同源性比对分析。本试验结果显示获得的NSP1基因全长编码区序列为1 473bp,编码491个氨基酸,与美国WC3株同源性最高。将阳性重组质粒转入E.coli Rosetta(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析,结果表明重组蛋白分子质量约为55ku,以包涵体形式表达,可与鼠抗His-tag抗体反应。本试验成功获得牛轮状病毒UK株NSP1基因,且实现了在原核表达系统中高效表达重组蛋白,本试验结果为研究NSP1蛋白在细胞内定位与其活性之间的相互关系奠定了基础。
- 冉旭华曹思张峣魏晓曼闻晓波倪宏波朱战波
- 关键词：原核表达
