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张峣: 作品数：25 被引量：35H指数：4; 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金“十二五”国家科技计划农村领域黑龙江省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

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猪轮状病毒ΔVP8*亚单位重组蛋白及其应用: 本发明涉及一种猪轮状病毒ΔVP8*亚单位重组蛋白以及该蛋白的编码基因。本发明还提供了在该重组蛋白中增加破伤风毒素T细胞表位P2后所形成的重组蛋白以及编码基因。本发明的ΔVP8*蛋白为VP8*中第64-223位氨基酸，能有...; 冉旭华翟军军闻晓波魏晓曼张峣曹思张春山崔玉东; 文献传递

牛副流感病毒3型血凝素-神经氨酸酶蛋白在杆状病毒中的表达被引量：4: 2016年; 目的在杆状病毒中表达牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type-3,BPIV-3)血凝素-神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase,HN)。方法提取BPIV-3 BN-1株RNA,设计特异性引物扩增HN全长ORF,将其克隆至杆状病毒供体载体p Fast Bac HTA中,获得重组供体质粒p Fast Bac-HN。将p Fast Bac-HN转化至感受态细胞E.coli DH10Bac,制备穿梭质粒Bacmid-HN。将纯化的Bacmid-HN经脂质体转染至Sf21昆虫细胞,拯救重组杆状病毒,并进行Western blot鉴定。结果经PCR及测序鉴定证明,HN基因重组供体质粒p Fast Bac-HN及穿梭质粒Bacmid-HN构建正确。利用Sf21昆虫细胞成功拯救重组杆状病毒,连续传代扩增3代的病毒滴度为2×108 CPE/ml。重组HN蛋白的相对分子质量约70 000,可与BPIV-3阳性血清发生特异性反应。结论在杆状病毒表达系统中成功表达了BPIV-3重组HN蛋白,为BPIV-3的诊断及疫苗效力评价奠定了基础。; 卢元赫张玲玲张峣任博雯祝子涵冉旭华倪宏波刘阳阳李维香闻晓波; 关键词：杆状病毒真核细胞基因表达

牛轮状病毒VP6蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：4: 2016年; 目的原核表达牛轮状病毒(rotavirus,RV)VP6蛋白,并制备其多克隆抗体。方法根据Gen Bank中登录的牛RV UK株VP6基因序列(X53667.1)设计一对特异性引物,RT-PCR扩增牛RV UK株VP6全长编码区片段,克隆至载体p ET-28a,构建重组表达质粒p ET-28a-Bo-RV-VP6,转染至E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析。将重组蛋白与弗氏佐剂混合后免疫豚鼠,共免疫3次,每次间隔2周,末次免疫后2周,经心脏采血,分离血清,制备VP6多克隆抗体,Western blot法检测其与牛RV的反应原性。结果经双酶切和测序鉴定,重组表达质粒p ET-28a-Bo-RV-VP6构建正确。重组蛋白以包涵体的形式表达,表达产物分别为43 000、34 000、27 000和15 000 4种不同相对分子质量的重组蛋白,纯化后纯度可达95%以上,可与牛RV阳性血清发生特异性反应。制备的VP6蛋白多克隆抗体效价>1∶7 000,且可识别RV天然VP6蛋白。结论原核表达了牛RV VP6蛋白,并制备了抗VP6多克隆抗体,为后续RV疫苗效力评价及RV侵入机理等方面的研究奠定了基础。; 冉旭华曹思刘阳阳张玲玲张峣倪宏波闻晓波; 关键词：牛轮状病毒 VP6基因原核细胞基因表达多克隆抗体

一种人轮状病毒△VP8*亚单位重组蛋白及其应用: 本发明涉及一种人轮状病毒△VP8*亚单位重组蛋白及其应用。该人轮状病毒△VP8*亚单位重组蛋白包括破伤风毒素中T细胞表位P2和轮状病毒△VP8*亚单位。本发明重组蛋白可以大大提高△VP8*亚单位疫苗的免疫效力，可以诱导更...; 闻晓波孔凡志冉旭华张峣曹殿军朱战波张春山; 文献传递

C基因型牛副流感3型病毒分离株全基因组测序及分析被引量：2: 2016年; 目的对宁夏地区分离得到的1株C基因型牛副流感3型病毒(bovine parainfluenza 3 virus,BPIV3)进行全基因组测序,并进行同源性及进化树分析。方法参考Gen Bank上登录的BPIV3中国分离株SD0835基因组序列设计5对引物,覆盖病毒基因组全长,提取BPIV3总RNA,以其为模板,进行RT-PCR扩增,扩增产物与p MD誖18-T Vector连接,连接产物转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞,将阳性克隆进行核苷酸测序,测序结果通过分子生物学软件进行拼接,并与Gen Bank上登录的参考序列进行比较,构建系统进化树。结果成功分离得到1株BPIV3,命名为NX49,NX49株全基因组核酸序列为15 474 nt,提交至Gen Bank的序列号为KT071671。NX49与中国山东C型分离株SD0835的同源性最高,为99.3%;与中国内蒙古A型分离株NM09的同源性为82.5%;与澳大利亚B型分离株Q5592的同源性为81.4%。结论 NX49与SD0835同属一个进化分枝,但由于地域及时间上的不同,可能造成它们之间在基因水平上存在差异。; 冉旭华张峣卢元赫曹思张玲玲刘阳阳倪宏波闻晓波; 关键词：全基因组 C基因型测序

猪轮状病毒重组VP8*蛋白的原核表达及免疫原性分析被引量：5: 2015年; 为了分析原核表达的猪轮状病毒（PRV）Gottfried株截短的VP8＊（△VP8＊aa64—223）重组蛋白的免疫原性，通过构建原核表达载体pET-28a—Gotffried—△VP8＊（aa64—223），转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达、经SDS—PAGE和Westernblotting检测，并纯化后，肌肉免疫Balb／c小鼠，证明重组蛋白相对分子质量约25．0kDa，以包涵体和可溶性两种形式存在，纯化的重组蛋白纯度在95％以上，可溶性蛋白产量可达14～15mg·L-1。ELISA方法检测表明该重组蛋白可以诱导高滴度的特异性抗体，证明其具有良好的免疫原性，为进一步研制PRV亚单位疫苗及建立ELISA诊断方法奠定基础。; 毕艳铎魏晓曼冉旭华曹思张峣张玲玲苗艳闻晓波; 关键词：猪轮状病毒原核表达

一种人轮状病毒△VP8*亚单位重组蛋白及其应用: 本发明涉及一种人轮状病毒△VP8*亚单位重组蛋白及其应用。该人轮状病毒△VP8*亚单位重组蛋白包括破伤风毒素中T细胞表位P2和轮状病毒△VP8*亚单位。本发明重组蛋白可以大大提高△VP8*亚单位疫苗的免疫效力，可以诱导更...; 闻晓波孔凡志冉旭华张峣曹殿军朱战波张春山

轮状病毒UK株NSP1蛋白对人源宿主细胞干扰素调节因子3的影响被引量：2: 2018年; 目的探讨轮状病毒UK株NSP1蛋白对人源宿主细胞干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)的影响。方法将UK毒株感染人结肠腺癌细胞Caco-2 6、12、24 h后,通过实时定量PCR和Western blot检测细胞内源性IRF3在转录水平和蛋白水平的变化;构建质粒pCMV-3×FLAG-UK-NSP1和缺失IRF3结合结构域的质粒pCMV-3×FLAG-UK-NSP1△IRF3,分别单独转染及与p EGFP-N3-IRF3质粒共转染293T细胞4、8、12 h后,Western blot分析IRF3蛋白含量的变化。结果 IRF3 m RNA转录水平无明显变化,UK毒株感染组和NSP1质粒转染组IRF3蛋白含量均下降。结论 UK-NSP1能够介导人IRF3蛋白降解,且需要IRF3结合结构域参与。; 冉旭华刘阳阳曹思张峣闻晓波; 关键词：干扰素调节因子3 免疫抑制

破伤风毒素T细胞表位P2对猪轮状病毒△VP8^＊蛋白免疫原性的增强作用被引量：1: 2016年; 仔猪轮状病毒腹泻严重危害养猪业，为了开发亚单位疫苗，本课题组前期构建了猪轮状病毒SB-1A株截短的VP8^＊蛋白（△VP8^＊，64～223位氨基酸）原核表达载体pET28a—SB1A△VP8^＊。为了进一步提高亚单位疫苗的免疫原性，将破伤风毒素的通用T细胞表位P2引入重组亚单位蛋白，构建重组载体pET28a—P2-SB-IA△VP8^＊。P2-S13-1A△VP8^＊和S13-1A△VP8^＊在大肠杆菌中表达并纯化。重组蛋白与氢氧化铝佐剂混合后经肌肉注射免疫Balb／c小鼠，利用间接ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平。结果显示：P2-S13-1A△VP8^＊和S昏1A△VP8^＊在大肠杆菌中得到了高水平、可溶性表达；重组蛋白P2-SB-1A△VP8^＊诱导的血清抗体水平显著高于SB-1A△VP8^＊，说明P2可以增强SB-1A△VP8^＊的免疫原性，为日后开发猪轮状病毒亚单位疫苗奠定了基础。; 闻晓波魏晓曼冉旭华曹思张峣倪宏波张玲玲; 关键词：猪轮状病毒 T细胞表位 P2

牛轮状病毒UK株NSP1基因序列分析及原核表达被引量：2: 2015年; 轮状病毒是引起多种幼龄动物及5周龄以下儿童腹泻的主要病原体。NSP1非结构蛋白是轮状病毒基因5的产物,为长约55ku的RNA结合蛋白。现已发现NSP1蛋白是一种毒力决定因子,可颉颃宿主先天性免疫应答。参照GenBank收录的牛轮状病毒UK株序列设计并合成1对特异性引物,本试验利用RT-PCR方法扩增牛轮状病毒UK株NSP1基因,克隆入pET-28a(+)表达载体,经双酶切和测序鉴定,并利用分子生物学软件进行同源性比对分析。本试验结果显示获得的NSP1基因全长编码区序列为1 473bp,编码491个氨基酸,与美国WC3株同源性最高。将阳性重组质粒转入E.coli Rosetta(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析,结果表明重组蛋白分子质量约为55ku,以包涵体形式表达,可与鼠抗His-tag抗体反应。本试验成功获得牛轮状病毒UK株NSP1基因,且实现了在原核表达系统中高效表达重组蛋白,本试验结果为研究NSP1蛋白在细胞内定位与其活性之间的相互关系奠定了基础。; 冉旭华曹思张峣魏晓曼闻晓波倪宏波朱战波; 关键词：原核表达

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