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多重RT-PCR用于临床检测三种胃肠炎病毒的研究被引量：16: 2007年; 轮状病毒、诺瓦克病毒和星状病毒是引起病毒性胃肠炎的主要病原因子。研究采用JV12/JV13、P1/P2和Mon340/Mon348三对引物,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR技术,并应用于128份临床粪便样本的检测,检出轮状病毒62份(48.44%),诺瓦克病毒8份(6.25%),星状病毒11份(8.59%)。在灵敏度试验中,轮状病毒的检测灵敏度为5pg/mL、诺瓦克病毒和星状病毒的检测灵敏度均为50pg/mL。该研究所建立3种常见胃肠炎病毒的多重RT-PCR方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于临床病原诊断和溯源。; 寇晓霞吴清平王大鹏郭伟鹏邓梅清; 关键词：诺瓦克病毒轮状病毒星状病毒多重RT-PCR

诺瓦克病毒研究进展被引量：14: 2007年; 诺瓦克病毒(Noroviruses,NVs)是1972年在美国首次发现的新生病毒,到1995年国内才有报道。该病毒是严重危害人类健康的重要食源性病毒,可导致不同年龄阶段人群的急性病毒性腹泻。因为至今没有发现合适的细胞系和动物模型用于NVs的体外增殖,所以对于该病毒的研究相对滞后。随着分子生物学及其他学科的不断发展,不同类群NVs全基因组测序完成并且病毒核衣壳蛋白分别获得真核和原核系统体外表达,从而对该病毒特性产生了一些新的认识和观点。论文从NVs的基因组结构与功能、蛋白质组成与功能、检测方法应用与发展和流行病学积累四个方面,系统介绍了该病毒国内外的研究现状以及其中存在的问题;其中,其蛋白质研究及其检测方法成为NVs的热点。论文还对NVs分子进化、检测技术和病毒体外增殖模式等提出不同的看法和建议。; 王大鹏吴清平寇晓霞; 关键词：诺瓦克病毒食源性

二氧化氯对脱氧核糖核苷三磷酸和质粒DNA的作用被引量：5: 2008年; 以75mmol/L的二氧化氯作用于脱氧核糖核苷三磷酸dCTP、dTTP、dGTP、dATP混合物(浓度均为100μmol/L),液相色谱显示它们在260nm波长处的峰面积分别下降了54.23%±2.08%、66.25%±3.32%、55.47%±0.23%、59.59%±3.27%。纯化质粒被二氧化氯作用后电泳条带未出现明显弥散和拖尾现象。45mmol/L以上二氧化氯能彻底抑制质粒DNA的PCR模板活性,150mmol/L的二氧化氯才能使纯化质粒的转化率降至对照组的0.20%±0.20%。实验证明二氧化氯对DNA具有损伤作用,这种损伤可能与嘧啶碱和嘌呤碱的共轭双键被破坏有关。; 韦明肯吴清平王大鹏吴军林张菊梅; 关键词：二氧化氯质粒高效液相色谱转化率

诺如病毒在牡蛎组织中分布的研究: 诺如病毒( Norovirus，NV)是一种新生食源性病毒，牡蛎是其主要传播载体之一。但是到目前为止，NV在牡蛎不同组织的累积分布状况仍不清楚。所以，研究该病毒在牡蛎组织中的分布对于提高食源性病毒的检出率和保障人民生活的...; 王大鹏; 关键词：诺如病毒牡蛎 RT-PCR 免疫学检测

诺瓦克病毒ORF2的原核表达及其产物分析: 2008年; 诺瓦克病毒(Norovirus,NV)是1972年在美国首次发现的新生病毒,直到1995年国内才有报道。该病毒是严重危害人类健康的重要食源性病毒,可导致不同年龄阶段人群的急性病毒性腹泻。实验以提取临床NV阳性腹泻样本的基因组RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增得到全长为1623bp编码NV主要衣壳蛋白VP1的ORF2全基因序列。将测序结果进行进化分析,结果表明该病毒属于NVGII。将ORF2亚克隆到原核表达载体pET-28a构建原核表达载体,鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。经IPTG诱导表达,获得大小约62kD的融合蛋白并命名为rVP1。以纯化的rVP1免疫新西兰大白兔后制备高免血清,WesternBlot结果表明,实验所获得的多克隆抗体可以特异性识别临床样本中NVVP1。因此,rVP1具有良好的免疫原性和反应原性。对小于rVP1的蛋白条带进行WesternBlot分析,结果表明所有条带均为rVP1的部分蛋白。双向琼脂扩散试验结果显示实验所获得的高效价多克隆抗体与纯化的原核表达产物仅形成单一沉淀带。; 王大鹏吴清平姚琳寇晓霞张菊梅; 关键词：诺瓦克病毒 VP1 原核表达

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王大鹏