潘虹
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 新型聚甲基丙烯酸酯毛细管整体柱的制备及其在加压毛细电管色谱中的应用
- 毛细管整体柱(Capillary monolithic column)是一种通过有机或无机聚合方法在毛细管柱内发生原位聚合形成的连续色谱固定相,它制备简单,通透性好,并且克服了填充柱的柱塞效应,还可以引入多种功能性基团,...
- 潘虹
- 关键词：加压毛细管电色谱毛细管整体柱多肽生物碱
- 不同重组病毒载体在大鼠骨髓间充质干细胞中的转染效率及基因表达被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨不同的重组病毒载体对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)的转染效率和外源基因表达水平,为利用骨髓间充质干细胞进行细胞和基因治疗提供实验依据。方法:采用淋巴细胞分离液、密度梯度离心及体外培养方法分离rMSCs,流式细胞仪检测细胞表面CD11b、CD45和CD90的表达鉴定细胞类型。进一步用携带绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组Ad5-EGFP、Ad5F35-EGFP、rAAV1/2-EGFP、rAAV2-EGFP及Lentivirus-EGFP转染体外培养的rMSCs,荧光显微镜观察、流式细胞仪检测EGFP阳性率和荧光强度。结果:rMSCs细胞表面CD11b、CD45和CD90阳性率分别为(14.1±3.3)%、(1.1±0.4)%和(82.3±5.7)%。Ad5-EGFP按10、100和1000MOI转染rMSCs,2d后流式细胞仪检测,EGFP阳性率分别为(33.6±2.7)%、(88.6±1.0)%及(99.9±0.1)%,荧光强度为4.4±0.3、39.8±1.5及811.4±3.9;Ad5F35-EGFP按10、100和1000MOI转染rMSCs,2d后阳性率分别为(96.9±0.4)%、(99.9±0.1)%及(99.7±0.1)%,荧光平均强度为369.3±14.8、895.4±7.5及703.2±38.4;rAAV1/2-EGFP及rAAV2-EGFP按1×104和1×105vg/细胞转染rMSCs,6d后阳性率分别为(0.94±0.31)%及(1.30±0.36)%,和(2.16±0.38)%及(3.90±0.33)%;LV-EGFP按30(TU/细胞)转染rMSCs,6d后阳性率为(60.5±3.2)%,荧光强度为27.0±3.6。结论:Ad5、Ad5F35及LV能够有效转染体外培养的rMSCs并表达外源基因,转染效率与病毒的用量间存在量效关系。
- 潘虹刘新建吴继红田毓华谢匡成陈霞芳张圣海黄倩林志新
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因治疗转染效率基因表达
- 大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定、基因转导及眼内移植
- 随着细胞和基因治疗技术和方法的发展,载体细胞或种子细胞逐渐成为影响细胞和基因治疗成功与否的关键环节之一。干细胞因其具有高度的自我更新能力和多向分化潜能，已成为组织工程中首选的种子细胞。骨髓间充质干细胞（rMSCs）来源充...
- 潘虹
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因治疗视网膜变性
- 文献传递
- 依托泊苷提高复制缺陷型腺病毒介导外源基因在肿瘤细胞中的表达水平被引量：4
- 2007年
- 目的：研究化疗药物依托泊苷对腺病毒载体介导的外源基因在肿瘤细胞内表达水平的影响。方法：携带外源基因增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的复制缺陷型腺病毒Ad5-CMV-EGFP（MOI为1或10）单独或联合终质量浓度为0．2、2、20、40、80、100和200μg／ml的依托泊苷感染体外培养的肿瘤细胞NCI-H446（人非小细胞肺癌细胞株）、A549（人肺腺癌细胞株）、SMMC-7721（人肝癌细胞株）、SGC7901（人胃癌细胞株）、SKBR-3（人乳腺癌细胞株）和BTT（小鼠膀胱移行上皮癌细胞株）后不同时间，流式细胞仪分析肿瘤细胞EGFP阳性率和平均荧光强度，Western blotting检测EGFP蛋白表达，RT—PCR和实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞内EGFP的mRNA表达量和DNA拷贝数。结果：不同剂量的依托泊苷可不同程度地提高Ad5-CMV-EGFP在7种肿瘤细胞内的表达水平，但对EGFP阳性率无明显提高。10 MOI的Ad5-CMV-EGFP联合40μg／ml依托泊苷分别感染肿瘤细胞NCI-H446、NCI-H460、A549、SMMC-7721、SGC7901、SKBR-3和BTT 24h后，细胞内EGFP的荧光强度分别是单独感染的3．3、3．5、3．1、6．2、7．0、5．4和3．4倍。Ad5-CMV-EGFP联合应用依托泊苷后肿瘤细胞内EGFP蛋白表达增加2～5倍，EGFP mRNA表达量提高，但DNA拷贝数未见明显改变。结论：依托泊苷可提高腺病毒载体介导的外源基因在肿瘤细胞内的表达水平，该作用可能是在转录水平上发挥作用的。
- 张圣海吴继红刘新建陈霞芳田毓华谢匡成于慧潘虹黄倩
- 关键词：复制缺陷型腺病毒依托泊苷肿瘤基因表达
- 大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、基因转导及眼内移植
- 潘虹
- 关键词：MESENCHYMAL
- 不同重组病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞的效率及其基因表达(英文)
- 2008年
- 背景:利用基因工程细胞进行替代治疗和基因治疗中合适的供体细胞、靶细胞以及相应载体是细胞和基因治疗最为困难的部分。目的:检测重组腺病毒Ad5和Ad5F35、腺相关病毒rAAV1/2和rAAV2、慢病毒LV对大鼠骨髓间充质干细胞的感染效率和外源基因表达水平,拟筛选能够高效转导骨髓间充质干细胞的载体。设计、时间及地点:细胞基因工程对照观察,于2006-10/2007-03在上海市第一人民医院中心实验室完成。材料:清洁级SD大鼠10只用于制备骨髓间充质干细胞。所有重组病毒均携带增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)报告基因,Ad5由本实验室制备,Ad5F35由解放军第二军医大学钱其军教授惠赠,rAAV2及rAAV1/2为本元正阳基因技术有限公司产品,LV由中科院上海生化与细胞生物学研究所郭礼和教授惠赠。方法:采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第4代用于实验。按1×105/孔接种于24孔细胞培养板中,1d后细胞贴壁,设立5组:第1组向细胞培养液中加入10,100,1000MOIAd5-EGFP,第2组加入10,100,1000MOIAd5F35-EGFP,第3组加入1×104,1×105vgrAAV1/2-EGFP,第4组加入1×104,1×105vgrAAV2-EGFP,第5组加入30TULV-EGFP。Ad病毒感染2d,rAAV及LV病毒感染6d。主要观察指标:EGFP阳性表达及荧光强度。结果:Ad5-EGFP感染24h后镜下可见EGFP阳性细胞,随着病毒用量的增加EGFP阳性细胞数目增多,荧光亮度增强,12d后阳性细胞开始逐渐减少,荧光亮度减弱。Ad5F35-EGFP感染情况与Ad5-EGFP基本相似,但EGFP阳性细胞数和荧光亮度均增加。rAAV1/2-EGFP或rAAV2-EGFP感染6d后,EGFP阳性细胞数和荧光亮度均较弱。LV-EGFP感染第2天即可见少量EGFP阳性细胞,随着时间延长EGFP阳性细胞数目逐渐增多,至第6天表达EGFP荧光的细胞数量及亮度不再有明显变化。结论:腺病毒Ad5、Ad5F35与慢病毒LV能够有效感染体外培养的骨髓
- 潘虹刘新建吴继红田毓华谢匡成陈霞芳张圣海黄倩林志新
- 关键词：骨髓间充质干细胞
