刘新建
- 作品数：12 被引量：16H指数：3
- 供职机构：上海交通大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带mda-7/IL24的嵌合型溶瘤腺病毒对wnt信号异常肿瘤的靶向基因—病毒治疗
- 目的:恶性肿瘤严重危害人类健康,基因治疗给肿瘤治疗带来了新的希望。肿瘤基因治疗涉及如何将治疗基因有效地送达靶组织和靶细胞,调控治疗基因选择性、高效地在肿瘤细胞内表达,以最大限度杀伤肿瘤细胞又不损害正常细胞作为发展方向和终...
- 刘新建
- 关键词：溶瘤腺病毒
- 文献传递
- 携带MDA-1/IL24的嵌合型溶瘤腺病毒对WNT信号异常肿瘤的靶向基因-病毒治疗
- 刘新建
- 不同重组病毒载体在大鼠骨髓间充质干细胞中的转染效率及基因表达被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨不同的重组病毒载体对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)的转染效率和外源基因表达水平,为利用骨髓间充质干细胞进行细胞和基因治疗提供实验依据。方法:采用淋巴细胞分离液、密度梯度离心及体外培养方法分离rMSCs,流式细胞仪检测细胞表面CD11b、CD45和CD90的表达鉴定细胞类型。进一步用携带绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组Ad5-EGFP、Ad5F35-EGFP、rAAV1/2-EGFP、rAAV2-EGFP及Lentivirus-EGFP转染体外培养的rMSCs,荧光显微镜观察、流式细胞仪检测EGFP阳性率和荧光强度。结果:rMSCs细胞表面CD11b、CD45和CD90阳性率分别为(14.1±3.3)%、(1.1±0.4)%和(82.3±5.7)%。Ad5-EGFP按10、100和1000MOI转染rMSCs,2d后流式细胞仪检测,EGFP阳性率分别为(33.6±2.7)%、(88.6±1.0)%及(99.9±0.1)%,荧光强度为4.4±0.3、39.8±1.5及811.4±3.9;Ad5F35-EGFP按10、100和1000MOI转染rMSCs,2d后阳性率分别为(96.9±0.4)%、(99.9±0.1)%及(99.7±0.1)%,荧光平均强度为369.3±14.8、895.4±7.5及703.2±38.4;rAAV1/2-EGFP及rAAV2-EGFP按1×104和1×105vg/细胞转染rMSCs,6d后阳性率分别为(0.94±0.31)%及(1.30±0.36)%,和(2.16±0.38)%及(3.90±0.33)%;LV-EGFP按30(TU/细胞)转染rMSCs,6d后阳性率为(60.5±3.2)%,荧光强度为27.0±3.6。结论:Ad5、Ad5F35及LV能够有效转染体外培养的rMSCs并表达外源基因,转染效率与病毒的用量间存在量效关系。
- 潘虹刘新建吴继红田毓华谢匡成陈霞芳张圣海黄倩林志新
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因治疗转染效率基因表达
- 免疫毒素腺病毒载体靶向性提高肿瘤基因治疗效果研究
- 恶性肿瘤是危害人类健康与生命的最主要的疾病,尽管近年来在化疗、放疗和手术治疗等方面取得了长足的进步,但仍然不能遏制肿瘤发病率和死亡率的上升趋势。基因治疗正逐渐成为一种很有效的肿瘤辅助治疗手段,主要应用于中晚期病人。目前肿...
- 刘新建张圣海吴继红陈霞芳于惠黄倩
- 关键词：免疫毒素腺病毒靶向性肿瘤基因治疗
- 文献传递
- 重组腺病毒介导绿色荧光蛋白基因对小鼠眼组织的转染和表达被引量：2
- 2007年
- 目的研究不同剂量Ad5-EGFP前房注射后,报告基因在小鼠眼部组织的表达情况及分布特点。方法24只BALB/c小鼠随机分组。实验组以不同浓度梯度前房注射Ad5-EGFP。对照组前房分别注射PBS和不给予任何注射。观察活体眼部组织EGFP表达情况及阳性细胞的类型。结果低浓度注射组在各个时间点眼表均未观察到EGFP荧光表达。高浓度注射组在注射病毒第1d即可以观察EGFP的表达,在第10d时眼表EGFP荧光亮度、范围增加最为明显。EGFP在角膜内皮细胞、虹膜色素上皮细胞及小梁网阳性表达。结论Ad5型腺病毒载体定向携带报告基因在眼前节表达,为眼前节疾病的基因治疗提供了实验依据。
- 于慧吴继红张圣海刘新建张巨峰易苗英黄倩
- 关键词：角膜内皮细胞报告基因
- MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的制备及其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用被引量：2
- 2010年
- 目的:构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒,制备MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白,研究该融合蛋白在肿瘤细胞内的定位及其对肿瘤细胞致凋亡作用。方法:PCR扩增MDA-7/IL-24基因,插入含有HaloTag(HT7)标签的载体中,构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒;MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白经IPTG诱导表达后纯化。利用带有荧光标记的HT7配基观察MDA-7/IL-24-HT7在肿瘤细胞内的定位。MTT法及AnnexinV-PI染色法检测MDA-7/IL-24-HT7对肿瘤细胞生长和凋亡的影响。结果:成功构建了表达MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的原核及真核表达质粒,MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白主要存在于E.coliBL21的包涵体内。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白定位于肿瘤细胞的内质网上。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞的生长,1mg/mlMDA-7/IL-24-HT7融合蛋白作用大肠癌HCT116细胞、肝癌SMMC7721细胞96h后,细胞凋亡率分别为(34.7±1.3)%和(22.1±0.9)%,显著高于未处理的肿瘤细胞(P<0.01)。结论:带有HaloTag标签的MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。
- 刘新建徐萍钱其军黄倩
- 关键词：MDA-7/IL-24HALOTAG融合蛋白肝肿瘤大肠肿瘤凋亡
- 二氯化钴对腺病毒基因表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:研究二氯化钴(CoCl2)对缺氧反应元件调控E1AE1B表达的条件复制型腺病毒载体(Ad-5HRE-E1AE1B-RFP)和缺乏缺氧反应元件的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-EGFP)在肿瘤细胞内表达和复制的影响。方法:肿瘤细胞经不同浓度的CoCl2处理后,Western印迹法检测缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达;倒置荧光显微镜、FCM法及空斑形成实验等观察经CoCl2处理后,感染条件复制型腺病毒和(或)复制缺陷型腺病毒的肿瘤细胞中外源基因的表达水平和病毒复制情况;小动物成像仪观察缺氧调控的条件复制型腺病毒在肿瘤内提高复制缺陷型腺病毒表达的效率。结果:适当浓度的CoCl2(0.4和0.08μg/mL)能使胃癌细胞株(SGC7901)中HIF-1α蛋白稳定表达并积聚,可较好地模拟缺氧状态;在0.4μg/mLCoCl2作用下,Ad-5HRE-E1AE1B-RFP对肿瘤细胞的感染效率明显提高,表现为外源基因RFP阳性表达的百分率和荧光强度均明显提高,但空斑形成实验显示Ad-5HRE-E1AE1B-RFP并没有复制。0.4μg/mLCoCl2也能提高其他非缺氧调控的复制缺陷型腺病毒如Ad-EGFP、Ad-Luc的感染效率和表达水平;Ad-5HRE-E1AE1B-RFP与复制缺陷型腺病毒Ad-Luc联合注射裸鼠肿瘤能显著提高Ad-Luc的表达。结论:CoCl2能明显提高腺病毒的基因表达水平,其作用机制不仅与CoCl2诱导缺氧有关,也可能与影响基因转录有关。
- 刘新建季迅达田毓华陈霞芳谢匡成吴继红张圣海徐萍李川源黄倩
- 关键词：胃肿瘤腺病毒感染基因表达调控肿瘤缺氧诱导因子1二氯化钴
- 不同重组病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞的效率及其基因表达(英文)
- 2008年
- 背景:利用基因工程细胞进行替代治疗和基因治疗中合适的供体细胞、靶细胞以及相应载体是细胞和基因治疗最为困难的部分。目的:检测重组腺病毒Ad5和Ad5F35、腺相关病毒rAAV1/2和rAAV2、慢病毒LV对大鼠骨髓间充质干细胞的感染效率和外源基因表达水平,拟筛选能够高效转导骨髓间充质干细胞的载体。设计、时间及地点:细胞基因工程对照观察,于2006-10/2007-03在上海市第一人民医院中心实验室完成。材料:清洁级SD大鼠10只用于制备骨髓间充质干细胞。所有重组病毒均携带增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)报告基因,Ad5由本实验室制备,Ad5F35由解放军第二军医大学钱其军教授惠赠,rAAV2及rAAV1/2为本元正阳基因技术有限公司产品,LV由中科院上海生化与细胞生物学研究所郭礼和教授惠赠。方法:采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第4代用于实验。按1×105/孔接种于24孔细胞培养板中,1d后细胞贴壁,设立5组:第1组向细胞培养液中加入10,100,1000MOIAd5-EGFP,第2组加入10,100,1000MOIAd5F35-EGFP,第3组加入1×104,1×105vgrAAV1/2-EGFP,第4组加入1×104,1×105vgrAAV2-EGFP,第5组加入30TULV-EGFP。Ad病毒感染2d,rAAV及LV病毒感染6d。主要观察指标:EGFP阳性表达及荧光强度。结果:Ad5-EGFP感染24h后镜下可见EGFP阳性细胞,随着病毒用量的增加EGFP阳性细胞数目增多,荧光亮度增强,12d后阳性细胞开始逐渐减少,荧光亮度减弱。Ad5F35-EGFP感染情况与Ad5-EGFP基本相似,但EGFP阳性细胞数和荧光亮度均增加。rAAV1/2-EGFP或rAAV2-EGFP感染6d后,EGFP阳性细胞数和荧光亮度均较弱。LV-EGFP感染第2天即可见少量EGFP阳性细胞,随着时间延长EGFP阳性细胞数目逐渐增多,至第6天表达EGFP荧光的细胞数量及亮度不再有明显变化。结论:腺病毒Ad5、Ad5F35与慢病毒LV能够有效感染体外培养的骨髓
- 潘虹刘新建吴继红田毓华谢匡成陈霞芳张圣海黄倩林志新
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 阿霉素类抗肿瘤药物与腺相关病毒的复合制剂及其用途
- 本发明属于生物医药领域，涉及新的基因治疗复合制剂及其用途和使用方法。公开了在使用腺相关病毒作为基因传递载体时，联合使用一定剂量的阿霉素，可使腺相关病毒开始表达外源基因的时间明显提前，转导效率和基因表达水平明显增加，表达时...
- 黄倩吴继红张圣海吴小兵董小岩裘玮刘新建陈霞芳谢匡成李惠明李川源
- 文献传递
- 依托泊苷提高复制缺陷型腺病毒介导外源基因在肿瘤细胞中的表达水平被引量：4
- 2007年
- 目的：研究化疗药物依托泊苷对腺病毒载体介导的外源基因在肿瘤细胞内表达水平的影响。方法：携带外源基因增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的复制缺陷型腺病毒Ad5-CMV-EGFP（MOI为1或10）单独或联合终质量浓度为0．2、2、20、40、80、100和200μg／ml的依托泊苷感染体外培养的肿瘤细胞NCI-H446（人非小细胞肺癌细胞株）、A549（人肺腺癌细胞株）、SMMC-7721（人肝癌细胞株）、SGC7901（人胃癌细胞株）、SKBR-3（人乳腺癌细胞株）和BTT（小鼠膀胱移行上皮癌细胞株）后不同时间，流式细胞仪分析肿瘤细胞EGFP阳性率和平均荧光强度，Western blotting检测EGFP蛋白表达，RT—PCR和实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞内EGFP的mRNA表达量和DNA拷贝数。结果：不同剂量的依托泊苷可不同程度地提高Ad5-CMV-EGFP在7种肿瘤细胞内的表达水平，但对EGFP阳性率无明显提高。10 MOI的Ad5-CMV-EGFP联合40μg／ml依托泊苷分别感染肿瘤细胞NCI-H446、NCI-H460、A549、SMMC-7721、SGC7901、SKBR-3和BTT 24h后，细胞内EGFP的荧光强度分别是单独感染的3．3、3．5、3．1、6．2、7．0、5．4和3．4倍。Ad5-CMV-EGFP联合应用依托泊苷后肿瘤细胞内EGFP蛋白表达增加2～5倍，EGFP mRNA表达量提高，但DNA拷贝数未见明显改变。结论：依托泊苷可提高腺病毒载体介导的外源基因在肿瘤细胞内的表达水平，该作用可能是在转录水平上发挥作用的。
- 张圣海吴继红刘新建陈霞芳田毓华谢匡成于慧潘虹黄倩
- 关键词：复制缺陷型腺病毒依托泊苷肿瘤基因表达
