曹娟
- 作品数：19 被引量：77H指数：6
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市应用基础研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 纤维连接蛋白在小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞中的作用(英文)
- 2003年
- 目的:观察采用ITSF和N2无血清培养方法诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法:小鼠胚胎干细胞的培养和N2无血清条件培养基诱导为神经前体细胞,细菌培养皿法或悬滴法制备胚体,小鼠胚胎干细胞采用NBT/BCIP染色,神经前体细胞的nestin免疫组化染色采用ABC法。结果:细菌培养皿法或悬滴法培养胚体、ITSF或N2无血清培养基均能将小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞。纤维连接蛋白预处理培养表面,对胚体的贴壁情况影响不大,但能使无血清培养后存活的神经前体细胞明显增多。结论:小鼠胚胎干细胞在ITSF和N2培养基均能分化为神经前体细胞,在N2培养基中加入纤维连接蛋白能使存活的神经前体细胞数量增多。
- 徐海伟吴旋黎海蒂范晓棠曹娟唐军
- 关键词：纤维连接蛋白小鼠胚胎干细胞神经前体细胞免疫组化
- 帕金森病大鼠模型的改进及神经前体细胞移植治疗的行为学研究被引量：7
- 2004年
- 目的探讨提高 6 羟多巴胺 (6 OHDA )帕金森病大鼠模型成功率的技术改进方法 ,并对改进模型进行行为学评价。观察神经前体细胞定点移植对改进型PD大鼠模型行为学的影响。方法 6 O HDA双点微量注射于大鼠左侧大脑制备PD大鼠模型并观察其行为学变化。小鼠胚胎干细胞的培养和无血清神经诱导 ,神经前体细胞脑内移植 ,移植后PD大鼠行为变化。结果改进注射方法后PD大鼠模型制备成功率为 73 .3 %,较常规制备方法明显提高 ;神经前体细胞脑内移植后的PD大鼠的旋转次数明显减少 ;结论使用 6 OHDA双点注射选择性破坏大鼠多巴胺能神经元 ,可建立较稳定的且成功率较高的PD模型。小鼠ES细胞诱导的神经前体细胞脑内移植后PD大鼠旋转次数明显减少。
- 唐军徐海伟吴旋曹娟黎海蒂
- 关键词：帕金森病神经前体细胞细胞移植行为学多巴胺能神经元
- 几种培养方法对ES/GFP小鼠胚胎干细胞系增殖和分化能力作用比较被引量：2
- 2004年
- 目的 观察采用不同的饲养层和培养基对永久表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞系ES/GFP的增殖、分化和绿色荧光蛋白表达的影响。方法 分别采用小鼠胚胎成纤维细胞和人胚胎成纤维细胞为饲养层 ,采用含重组人白血病抑制因子的DMEM/FCS培养基和Buffalo条件培养基培养ES/GFP细胞系。N2 无血清培养基诱导ES/GFP小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞 ,Nestin免疫组化染色。结果 小鼠胚胎成纤维细胞和人胚胎成纤维细胞为饲养层 ,常规LIF培养液和Buffalo条件培养基均能较好维持ES/GFP细胞的高增殖能力和全能分化能力 ,对绿色荧光蛋白的表达和胚体形成、神经前体细胞的分化无明显差异。结论 人胚胎成纤维细胞可替代小鼠胚胎成纤维细胞作为ES/GFP饲养层 ,减少饲养层制备的工作量和污染的机会。Buffalo条件培养基可完全替代LIF培养基 ,降低细胞培养的成本。
- 曹娟徐海伟唐军范晓棠吴旋
- 关键词：干细胞ES饲养层小鼠胚胎GFP条件培养基
- 长期注射叠氮钠对大鼠学习记忆和海马内褪黑素受体表达的作用被引量：1
- 2003年
- 目的 观察长期皮下注射叠氮钠所致的AD大鼠氧化应激模型学习记忆和海马内褪黑素受体表达的变化。方法 采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆。原位杂交技术检测大鼠海马内褪黑素受体Mel 1a和Mel 1b的表达。结果 皮下间断注射NaN3后 1～ 4周 ,大鼠Morris水迷宫测试潜伏期延长 ,以注射叠氮钠 4周组大鼠的潜伏期升高最为明显。大鼠海马Mel 1a受体表达在注射叠氮钠后 1周上调 ,在 2周和 3周组仍过度表达 ,在 4周组达峰值。而Mel 1b受体表达无明显变化。结论 大鼠长期皮下注射叠氮钠导致学习记忆障碍 ,可作为AD模型。AD大鼠海马内褪黑素受体Mel 1a的过表达可能是对MT水平下降和氧化应激的代偿反应。
- 徐海伟黎海蒂范晓棠吴旋曹娟唐军
- 关键词：褪黑素学习记忆海马
- 纤维连接蛋白在小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞中的作用被引量：5
- 2003年
- 目的 观察采用ITSF和N2 无血清培养基诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法 小鼠胚胎干细胞的培养和无血清诱导为神经前体细胞 ,NBT BCIP染色 ,Nestin免疫组化染色。结果 细菌培养皿法或悬滴法培养胚体、ITSF或N2 无血清培养基均能将小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞。纤维连接蛋白预处理培养皿表面 ,对胚体的贴壁情况影响不大 ,但能使无血清培养后存活的细胞增多。结论 小鼠胚胎干细胞在ITSF和N2 培养基均能分化为神经前体细胞 ,在N2
- 徐海伟吴旋黎海蒂范晓棠曹娟唐军
- 关键词：胚胎干细胞神经前体细胞细胞分化纤维连接蛋白小鼠
- AANAT基因工程化ES细胞减少APP高表达PC12细胞Aβ的分泌被引量：5
- 2003年
- 目的 构建AANAT基因工程化的胚胎干细胞 ,并探讨其在阿尔茨海默氏病治疗中的可能作用。方法 将外源性neo基因转染人胚胎成纤维细胞 ,作为饲养层细胞用于ES细胞转基因后筛选及增殖过程的培养。将pBK CMV AANAT真核表达质粒转染小鼠胚胎干细胞 ,用RT PCR方法筛选阳性细胞克隆 ,用此工程细胞的条件培养液培养APP过量表达的PC12细胞 ,观察 β淀粉样蛋白分泌情况。 结果 ①转入neo基因的人胚胎成纤维细胞能很好维持ES细胞的未分化状态。②AANAT基因工程细胞培养液能减少 β淀粉样蛋白的分泌。③褪黑素能使PC12 APP细胞Aβ分泌明显减少。 结论 首次构建AANAT基因工程化的胚胎干细胞 。
- 吴旋徐海伟黎海蒂范晓棠曹娟唐军
- 关键词：褪黑素胚胎干细胞
- 微机控制的大鼠四路穿梭箱主动回避反应实验系统被引量：8
- 2004年
- 目的:研制微机控制的四路穿梭箱主动回避反应实验系统,应用于认知神经科学、神经生理学、神经药理学等实验研究。方法:该系统由传感器、穿梭箱、刺激器、I/O接口、计算机及系统软件构成。以Windows操作系统作为研发平台,利用功能强大的可视化开发软件VisualC++.NET作为本系统开发工具。在硬件设计中,引进电磁兼容技术,使系统性能更加稳定。结果:本系统可同时精确地自动控制4只大鼠完成穿梭箱主动回避反应行为训练实验的全过程,从行为训练的自动控制到实验数据的实时采集、显示、实验结果打印及保存,实现了多路大鼠穿梭箱主动回避反应行为训练的自动化,无需实验者直接操作,节省了科研经费和人力,提高了工作效率。结论:该系统性能稳定、可靠,人机界面友好,操作简便;利用传感器检测动物行为活动,判断准确,定时精确。
- 赵邦云黎海蒂高恩泉曹娟
- 关键词：微机控制主动回避反应动物实验神经科学
- 神经前体细胞纹状体注入对帕金森病模型大鼠行为的影响(英文)
- 2006年
- 背景:胚胎干细胞经诱导产生神经前体细胞,再进行脑内移植,依旧具备增殖与分化的潜能,与宿主神经组织整合,使其有强的可塑性,这将有助于帕金森病的治疗效果观察。目的:观察小鼠胚胎干细胞分化为神经前体细胞,以及定点移植对改进型帕金森病大鼠模型行为学的影响。设计:随机对照动物实验。单位:解放军第三军医大学基础医学部生理学教研室和神经生物学教研室。材料:健康成年Wistar大鼠50只,随机分为实验组45只,对照组5只。方法:①实验组大鼠黑质致密部与中脑腹侧背盖区两点各注射6-羟基多巴5μL(2g/L)制备帕金森病大鼠模型,对照组注射生理盐水5μL/点,术后1周开始行为学检测,测定模型成功率,1次/周,连续7周。②选取成功帕金森病模型大鼠20只实施纹状体神经前体细胞移植,剂量为2μL[细胞悬液记数为(5～8)×106个/μL]。另取5只模型大鼠纹状体注射生理盐水2μL为生理盐水对照组。主要观察指标:①帕金森病模型成功率。②神经前体细胞移植对帕金森病模型大鼠旋转次数的影响。③移植的神经前体细胞在体分布,存活与分化情况。结果:①6周后实验组45只大鼠中共有33只(73%)达到成功帕金森病模型标准。②细菌培养皿上用无血清培养基培养形成胚胎体5d后,约85%胚胎干细胞分化为Nestin阳性的神经前体细胞。③神经前体细胞脑内移植后的帕金森病大鼠的旋转次数明显少于生理盐水对照组。多数移植的神经前体细胞存活,部分分化为TH阳性神经元。结论:小鼠胚胎干细胞诱导的神经前体细胞脑内移植后,分化为TH阳性神经元,帕金森病大鼠旋转次数明显减少。
- 唐军徐海伟范晓棠吴旋曹娟高恩泉
- 关键词：帕金森病疾病模型干细胞移植
- 小鼠胚胎干细胞诱导的神经前体细胞大脑皮层移植对AD大鼠的治疗作用被引量：6
- 2005年
- 目的与方法 :将小鼠胚胎干细胞无血清诱导为神经前体细胞后移植到叠氮钠所致的阿尔茨海默氏病 (AD)大鼠额叶皮层 ,采用免疫组化观察移植细胞的存活、分化以及细胞移植对AD大鼠Morris水迷宫记忆功能的作用。结果 :胚胎干细胞形成的胚胎样体经N2选择性培养基选择生长 5d后 ,85 %以上的小鼠胚胎干细胞分化为nestin阳性的神经前体细胞。移植到AD大鼠额叶皮层后 4 - 6周 ,神经前体细胞存活良好 ,大部分移植细胞保持为未分化的nestin阳性的神经前体细胞并呈克隆生长 ,部分细胞发出类似于神经元的长突起。移植后 4周 ,AD大鼠的空间记忆能力明显提高。结论 :胚胎干细胞来源的神经前体细胞移植到AD大鼠额叶皮层后能存活并分化为神经元 ,能改善AD大鼠的记忆功能障碍。
- 徐海伟范晓棠吴旋唐军曹娟黎海蒂
- 关键词：阿尔茨海默病胚胎干细胞
- 褪黑素在叠氮钠所致的海马锥体细胞钙超载中的神经保护作用被引量：9
- 2003年
- 目的 观察叠氮钠对急性分离的大鼠海马锥体神经元胞内游离钙的作用以及不同浓度的褪黑素 (Melatonin ,MT)的影响。方法 海马锥体细胞的急性分离、新型游离钙荧光探针Fluo 4AM负载海马锥体细胞 ,激光共聚焦动态检测胞内游离钙的变化及叠氮钠、褪黑素和荷包牡丹碱的作用。结果 在孵育液中加入叠氮钠 (0 8mg ml)能使急性分离的海马锥体细胞胞内游离钙在 2 0 0s内急剧升高并维持在高水平 ,处于钙超载状态。褪黑素能使NaN3所致的海马锥体细胞内处于超载状态的游离钙显著下降 ,并有量效关系。结论 叠氮钠导致海马神经细胞损伤的早期原因可能是钙超载 。
- 徐海伟黎海蒂范晓棠吴旋曹娟唐军
- 关键词：褪黑素钙超载激光共聚焦
