严红
- 作品数：10 被引量：48H指数：4
- 供职机构：湖北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学更多>>
- 一种快捷、简便、高通量克隆载体的构建
- 利用T7内切核酸酶Ⅰ能识别并切割不完美匹配的DNA、十字形DNA结构、Holliday 结构以及带有切刻位点的双链DNA的特性,将T7内切核酸酶基因(T7Fndo)插入到载体pEd上的阿拉伯糖诱导启动子pBAD后面,得到...
- 严红马立新
- 文献传递
- 构建定向T载体用于基因克隆和表达被引量：10
- 2013年
- 传统的T载体克隆方法需要烦琐的后续步骤来筛选和鉴定重组子,并且无法实现目的基因的定向克隆。为了克服这些问题,本研究在pET-23a(+)的基础上构建了定向T载体pETG,首先通过定点诱变消除pET-23a(+)上的两个BfuⅠ位点得到PET-23aM;设计一对引物在5端各引入一个BfuⅠ位点,下游引物紧邻BfuⅠ位点引入13 bp的部分LacO序列,用该引物从pHBM2002上扩增Prrn-gfp表达盒,插入PET-23aM的NdeⅠ和XhoⅠ位点,得到定向T载体pETG。PCR扩增的目的基因通过下游引物引入7 bp剩余的LacO序列,该基因片段与BfuⅠ酶切制备的定向T载体连接、转化大肠杆菌DH10β感受态细胞,通过补加了X-gal的平板筛选蓝色重组子。质粒酶切和PCR鉴定表明蓝色菌落全部为定向插入的重组子,重组效率100%,利用本方法成功地定向克隆了103个人类肝蛋白编码基因cDNA,克隆过程无需复杂的步骤筛选鉴定重组子。随机选择了其中的8个基因的克隆进行表达,结果显示8个克隆均在大肠杆菌中获得成功表达。该结果表明定向T载体构建成功,并且该载体非常适合基因的克隆和表达。
- 钟星翟超陈亮余晓岚蒋思婧严红杨登想马立新
- 关键词：TA克隆PCR克隆蛋白质表达
- 优化合成有机磷水解酶opd p基因在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2018年
- 拟验证通过密码子优化有机磷水解酶(opd)基因,和生物砖方法构建opd多拷贝载体,以提高在毕赤酵母中的表达量.将原始的opd基因依照毕赤酵母偏爱密码子设计合成新的有机磷水解酶基因,并在C端添加了6个His-Tag融合蛋白标签.所合成的opd p基因全长1 149 bp(base pair).基因克隆入p HBM905BDM毕赤酵母表达型质粒,成功构建重组表达质粒p HBM905BDM-opd p,以及多拷贝表达质粒p HBM905BDM-opd p-2C,p HBM905BDM-opd p-3C,p HBM905BDMopd p-4C,转化毕赤酵母感受态细胞GS115.实验结果表明,经甲醇诱导后,在AOX1(乙醇氧化酶基因)启动子调控下,获得OPD P蛋白分泌表达,Western Blot检测4个转化的菌株中都表达了目的蛋白,且两拷贝表达量较一拷贝有提高,达到0.2 U/m L.但是随着拷贝数的进一步增加表达量呈现下降的趋势.
- 王颖黄灿孙其濛马立新严红
- 关键词：毕赤酵母有机磷水解酶分泌表达
- T7核酸内切酶Ⅰ的基因合成、克隆与表达
- 根据已报道的T7核酸内切酶Ⅰ序列设计引物,利用PCR合成与DpnⅠ点突变较正的方法,获得全长450bp的T7核酸内切酶Ⅰ基因。将该基因克隆到pBAD载体上,转化E.coli XL10-GOLD菌株,以L-阿拉伯糖为诱导物...
- 康立新严红张桂敏马向东马立新
- 文献传递
- 水稻质体多顺反子表达载体的构建及其对烟草质体的转化被引量：5
- 2006年
- 目的尝试水稻质体多顺反子定点整合表达载体转化到烟草质体中表达。方法根据已发表的相关序列,分别设计引物,通过PCR技术克隆了一系列构建水稻质体多顺反子定点整合表达载体所需的元件:质体核糖体(16S)RNA操纵元启动子(Prrn)、质体psbA基因3′端终止子(psbA3′)、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因(aadA)、水稻质体基因组高频同源重组片段(psbC/trnG,大小3362bp),命名为crDNA、甘露聚糖酶基因(man)、绿荧光蛋白基因(gfp)。构建了水稻质体多顺反子定点整合表达载体pLM21(-psbC-Prrn-RBS-man-RBS-gfp-RBS-aadA-psbA3′-trnG-)。将该载体用基因枪轰击烟草叶片5枪,用添加了壮观霉素的选择分化培养基筛选。结果获得质体转基因烟草4株。用PCR、激光扫描和Westernblot等方法检测都证实man、gfp、aadA三个基因且均得到表达,用RFLP证实表达盒整合到烟草质体基因组中。结论水稻质体多顺反子定点整合表达载体已整合到烟草质体基因组中,并得到表达。
- 陆云华马立新严红
- 关键词：水稻多顺反子基因枪转化
- 基于疫情防控常态下分子生物学实验“线上集中、线下分散”教学模式的应用与分析
- 2021年
- 在疫情防控成为一种常态的大背景下,为了更好地开展本科实验教学,本研究以分子生物学实验为例,开展了“线上集中、线下分散”教学模式应用的探究。结果表明该教学模式能缩短学生实验操作时间,提高整体的实验教学效果,增加学生的积极性。该模式的探究是在线上、线下混合教学模式这种大趋势下的一种尝试,同时也为公共卫生安全问题背景下的实验教学提供一定参考。
- 杨升李洋严红
- 关键词：疫情防控分子生物学实验
- gfp融合的甲基对硫磷水解酶基因mph在E. coli中的表达被引量：1
- 2019年
- 依照大肠杆菌密码子的偏爱性将来源于Pseudomonas sp. M6的有机磷水解酶基因mph设计合成了新的有机磷水解酶基因,然后将其与GFP融合进行表达,构建一株具有全细胞催化活性的大肠杆菌工程菌.设计优化后所合成的mph-r基因全长927 bp,然后将基因克隆到p ET23a-gfp大肠杆菌表达型质粒上,成功构建了重组表达质粒p ET23a-gfpmph-r,转化大肠杆菌感受态Rosetta blue.经过诱导剂IPTG的低温诱导24 h后,收集细胞,通过SDS-PAGE和Western Blot检测融合蛋白的表达.实验结果显示,融合蛋白的表达量大大提高,且通过酶活分析测定,全细胞酶活达到了11. 2 U/m L.
- 黄灿程杨马立新严红
- 关键词：甲基对硫磷水解酶GFP融合蛋白
- 一种载体构建的新方法:一步克隆法被引量：14
- 2007年
- 报道一种载体构建的新方法,在PCR引物设计时,相连片断设计15 bp同源序列,PCR克隆目的片段后,产生多个首尾具同源末端的片段,然后进行多片段定向连接、转化和重组子鉴定.以4片段拼接的叶绿体单交换质体载体pSMGA(pBluescriptⅡSK(+)-man-gfp-aadA)的构建为例,应用上述方法构建仅需做一次连接、转化即可.该方法设计操作相对简便,无需中间载体的构建,减少连接和转化次数.利用该法构建了10多个6 kb以内的载体,证明这是一种简便、通用、高效并值得推广的构建小载体的方法.
- 欧阳平李玉严红马立新
- 关键词：水稻
- 一种快速、简便、经济的基因合成方法
- 基因的合成和表达是分子生物学操作过程中的重要技术。化学合成DNA序列为优化基因密码子、研究未知基因的功能以及蛋白质结构与功能之间的关系提供了一个强有力的手段。然而,高的碱基合成费用和高碱基出错率是基因合成过程中的两个最大...
- 李玉严红马立新
- 文献传递
- 一种鉴定多糖水解酶类及其产生菌的新方法被引量：17
- 2007年
- 利用曲里苯蓝能与多糖形成复合物的原理，建立起一种简便、快捷、灵敏的筛选多糖水解酶类及其产生菌的平板鉴定方法。曲里苯蓝对供试微生物无毒害作用，不影响酶的活性，并可高温灭菌。其最适浓度在0．005％～0．01％（W／V）之间。可用于纤维素水解酶类、淀粉水解酶类、甘露聚糖酶、普鲁兰酶等多糖水解酶，与传统方法相比，该方法不仅有着同样高的灵敏度，而且能够提高筛选效率，避免污染问题，同时适合于多种多糖底物。但不能用于木聚糖酶和菊粉酶的检测。
- 马向东柯涛熊兰严红马立新
