熊兰
- 作品数：4 被引量：20H指数：2
- 供职机构：湖北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省教育厅自然科学基金国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 嗜热古菌高温酸性淀粉酶基因合成和大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2008年
- BD5088是来源于1种嗜热球菌Thermococcus sp.的高温酸性α-淀粉酶的人工突变体,研究中根据BD5088基因的氨基酸序列,经密码子优化,用2步PCR法合成去信号肽后的成熟肽基因。该基因全长1311bp,由436个氨基酸组成。现将其克隆到大肠杆菌的表达载体pET30a上,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达出的目的蛋白分子量约为48ku,大小与理论值一致,经过Ni+树脂纯化,得到纯化后的重组酶BD5088。重组α-淀粉酶BD5088具有α-淀粉酶的活性,最适反应温度范围为70～85°C,最适反应pH值为5.6～6.0,在100℃下酶活性半衰期约30min。活性不依赖于Ca2+。本研究为该基因在毕赤酵母中的表达和基因的定向进化改造打下了基础。
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- 关键词：基因合成酶学性质
- 一株产环糊精葡萄糖基转移酶的短小芽孢杆菌的选育,产酶条件及酶学特性研究
- 从土壤分离物中筛选到一株环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glucanotransferase, CGTase)产生菌CGT01。16SrDNA序列分析表明该菌与短小芽孢杆菌(Bacillus pumill...
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- 文献传递
- 一种鉴定多糖水解酶类及其产生菌的新方法被引量：17
- 2007年
- 利用曲里苯蓝能与多糖形成复合物的原理，建立起一种简便、快捷、灵敏的筛选多糖水解酶类及其产生菌的平板鉴定方法。曲里苯蓝对供试微生物无毒害作用，不影响酶的活性，并可高温灭菌。其最适浓度在0．005％～0．01％（W／V）之间。可用于纤维素水解酶类、淀粉水解酶类、甘露聚糖酶、普鲁兰酶等多糖水解酶，与传统方法相比，该方法不仅有着同样高的灵敏度，而且能够提高筛选效率，避免污染问题，同时适合于多种多糖底物。但不能用于木聚糖酶和菊粉酶的检测。
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- 短小芽孢杆菌热稳定环糊精葡萄糖基转移酶粗酶酶学特性研究
- 2008年
- 从土壤分离物中筛选到一株环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glucanotransferase,CGTase)产生菌CGT01。16SrDNA序列分析表明该菌与短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的同源性为99%。同时根据其生理生化特征,该菌株被鉴定为短小芽孢杆菌(B.pumilus)。命名为B.pumilus.CGT01菌株。产生CGTase的最适初始pH为6.5,最适培养温度为37℃。菌株所产CGTase的最适pH值和最适反应温度分别为pH6.5和60℃,并有较高的热稳定性。60℃条件下保温,酶活基本稳定,半衰期为35 min。酶液中添加1 mmol/L Ca2+能明显提高CGTase的稳定性,60℃保温1 h后,剩余酶活仍达80%以上。SDS-PAGE检测表明酶的分子量约为78 ku左右。经高效液相色谱分析表明,CGTase作用于可溶性淀粉后的主要产物为葡萄糖、麦芽糖和β-环糊精,没有检出α和γ型环糊精产物,因此所产环糊精为单一类型,不同于同种属的其他菌株所产CG-Tase。
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- 关键词：短小芽孢杆菌Β-环糊精环糊精葡萄糖基转移酶酶学特性
