朱道银
- 作品数：145 被引量：486H指数：11
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- 小鼠巨噬细胞Ipr1基因真核表达载体的构建及表达
- 2008年
- 目的构建小鼠Ipr1(intracellular pathogen resistance 1)基因真核表达载体。方法从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pMD19-Tsimple载体中,转化大肠杆菌JM109,筛选的阳性克隆作PCR及酶切鉴定后测序分析。其中的突变碱基经点突变修复后将Ipr1基因亚克隆于原核真核双系统表达质粒pQE-TriSystem中得到pQE-TriSystem-Ipr1,用脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞,RT-PCR鉴定Ipr1基因的表达。结果从C57BL/6J小鼠胸腺组织内扩增出大小为1338bp片段。阳性克隆测序鉴定发现一个点突变,经点突变修复后与GenBank报道的Ipr1基因序列一致。亚克隆获得重组质粒pQE-TriSystem-Ipr1,转染RAW264.7细胞经RT-PCR扩增出Ipr1基因相应大小的DNA片段。结论成功调取小鼠Ipr1基因并成功构建含Ipr1基因的真核表达载体,为进一步研究Ipr1基因的功能奠定基础。
- 李娜朱道银何永林张黎
- 关键词：结核病真核表达载体
- 人颗粒溶素的生物学活性研究被引量：1
- 2007年
- 目的全面研究 Mr 9000人颗粒溶素(GLS)的生物学活性,为其作为生物治疗剂应用奠定基础。方法将含 Mr9000GLS 编码基因的 pZM03质粒转染肝癌细胞株 SMMC-7721,通过 MTT 实验、流式细胞仪、Hoechst 染色法检测 GLS 的致肿瘤细胞凋亡活性;将 pZM03转染已感染结核分枝杆菌毒力株 H37Rv 的 RAW264.7细胞,96 h 后裂解细胞作细菌培养及菌落计数,检测 GLS 的细胞内直接杀菌活性。结果将 pZM03质粒转染 SMMC-7721细胞后,从多个角度检测到了 GLS 的致肿瘤细胞凋亡活性;转染荷菌的 RAW264.7细胞96 h 后,菌落计数实验证明 GLS 具有一定的细胞内直接杀菌活性。结论 pZM03质粒编码的 Mrg000GLS 具有天然 GLS 的杀瘤活性和一定的细胞内直接杀菌活性。
- 张黎伊正君杨春何永林朱道银
- 关键词：颗粒溶素肿瘤分枝杆菌结核
- 抑制端粒保护蛋白TPP1表达诱导ATM依赖的DNA损伤反应被引量：1
- 2008年
- 目的:构建端粒保护蛋白TPP1短发夹RNA表达载体,探讨抑制TPP1表达后对端粒DNA损伤及细胞增殖的影响.方法:体外构建端粒保护蛋白TPP1shRNA逆转录病毒表达载体shTPP1-01,shTPP1-02,与表达外源性TPP1的TPP1-HA质粒共同转染293T细胞,Western Blot检测shTPP1抑制外源性TPP1蛋白表达;RT-PCR检测shTPP1抑制小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)内源性TPP1mRNA的表达.再用shTPP1分别感染ATM+/+MEF和ATM-/-MEF细胞后,分别采用细胞生长曲线和BrdU掺入法检测细胞增殖,免疫荧光/端粒肽核酸荧光原位杂交法(IF/PNA-FISH)检测端粒功能障碍诱导损伤灶(TIF)的形成.结果:shTPP1-01和shTPP1-02均能明显抑制外源性TPP1蛋白和内源性TPP1mRNA的表达,shTPP1-01和shTPP1-02作用于原代培养的MEFs后细胞生长缓慢,BrdU阳性细胞数量分别占8.0%和8.7%,显著低于对照细胞的29.3%(P<0.01,P<0.01);而细胞表现为体积变大,形态扁平等类似细胞衰老的形态学改变;IF/PNA-FISH法检测结果显示,shTPP1作用于ATM+/+MEF细胞后导致端粒DNA损伤标志物-磷酸化的H2AX(γ-H2AX)和53BP1损伤灶(TIF)的形成,定量结果显示约50%的ATM+/+细胞中出现至少5个TIF;而在shTPP1作用后的ATM-/-细胞中,端粒γ-H2AX和53BP1形成的TIF数量显著减少,出现5个TIF的细胞数量不足5%,与对照组细胞相比无显著性差异.结论:抑制TPP1表达后诱发端粒ATM依赖的DNA损伤反应,进而抑制细胞增殖,促进细胞衰老.
- 郭晓兰袁国华周京国唐中刘宁涛杨明辉青玉凤吴凤霞朱道银
- 关键词：端粒短发夹RNADNA
- 10-23脱氧核酶对结核分枝杆菌异柠檬酸裂合酶表达的影响及其抗菌作用被引量：4
- 2006年
- 目的探讨10-23脱氧核酶(deoxyribozyme,DRZ)抑制结核分枝杆菌异柠檬酸裂合酶(isocitrate lyase,ICL)的表达及其在抗结核分枝杆菌感染中的作用。方法根据计算机模拟的结核分枝杆菌ICL mRNA的二级结构设计合成5条ICL特异的10-23 DRZ(DZ1～DZ5),在无细胞反应体系中鉴定其对结核分枝杆菌ICL mRNA的切割活性后,在不同条件下用DZ4对结核分枝杆菌进行处理,于处理后不同时间检测ICL酶活性变化,间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测ICL的表达。用异烟肼单独处理及DZ4与异烟肼联合处理后的结核分枝杆菌感染人巨噬细胞系THP-1细胞,于感染后不同时间用Ziehl-Heelson染色法和结核分枝杆菌培养计数的方法,观察10-23DRZ对结核分枝杆菌感染巨噬细胞的影响,同时取经异烟肼单独处理及DZA与异烟肼联合处理后的结核分枝杆菌接种于Middle Brook 7H10(M7H10)培养基,观察10-23DRZ对在巨噬细胞外生长的结核分枝杆菌的影响。结果DZ1、DZ3、DZ4和DZ5在无细胞反应体系中可对ICL mRNA进行有效切割,且其活性具有高度特异性。5μmol／L DZ4与异烟肼联合应用时可显著抑制结核分枝杆菌ICL的表达,与单用相应浓度的异烟肼比较,处理1、2、3周后结核分枝杆菌ICL酶活性分别下降34．9％、46．6％、46．7％(异烟肼10μg／L)或21．9％、33．48、36．9％(异烟肼5μg/L)。DZ4与异烟肼联合处理后的结核分枝杆菌在巨噬细胞内存活的能力显著下降,在感染后4 d和7 d时,THP-1细胞内的荷菌量分别由单用相应浓度异烟肼处理对照组的126．5×104 CFU、307．5×104 CFU(异烟肼10μg／L)和133．0×104 CFU、325．4×104 CFU(异烟肼5μg／L)下降至54．6×104 CFU、114．3×104 CFU和71．7×104 CFU、174．4×104 CFU。10-23DRZ对结核分枝杆菌在M7H10培养基中生长无明显影响。结论异烟肼可有效促进10-23DRZ进入结核分枝杆菌;10-23DRZ与亚抑菌浓度的异烟肼联用可有效抑制结核分枝杆�
- 李俊明李娜朱道银伊正君刘晔华杨春何永林
- 关键词：分枝杆菌结核基因表达
- 几种主要STD实验诊断方法的应用评价
- 1993年
- 在评价某试验方法的准确性时,常用敏感性和特异性这两个指标。若某法敏感性高而特异性低,则假阳性率高;敏感性低而特异性高则假阴性率高。一、梅毒本病由梅毒螺旋体引起,表现为皮肤粘膜及内脏的病变。 (一)使用非螺旋体抗原的非特异试验这些试验用从牛心肌中提取的脂质作为抗原,检测血清中的心脂质抗体。
- 朱道银周永华
- 关键词：梅毒淋病尿道炎艾滋病
- 重组BCG联合抗痨药物对小鼠结核病治疗作用的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨携带编码人天然颗粒溶素(Granulysin,GLS)和小鼠IL-12基因的重组BCG与抗痨药物对结核分枝杆菌感染的协同治疗效果。方法:将结核分枝杆菌H37Rv感染的BALB/c小鼠40只随机分成4组。感染4周后分别用生理盐水、重组卡介苗(BCG)、INH+PZA和重组BCG联合INH+PZA治疗,于第一次治疗后3个月,处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的分泌水平、血清IL-12和IFN-γ、肺、脾组织中GLS表达,同时观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果:重组BCG联合INH+PZA治疗组肺、脾组织荷菌量(logCFU/g)比重组BCG和INH+PZA治疗组显著降低;重组BCG和INH+PZA治疗组肺、脾组织荷菌量比生理盐水组显著降低。重组BCG组经PPD刺激后IFN-γ和TNF-α分泌水平明显高于其它组。重组BCG联合INH+PZA治疗组和重组BCG组血清IL-12和IFN-γ水平明显高于生理盐水组。重组BCG组用免疫组化检测到小鼠肺及脾组织中GLS的表达。重组BCG和INH+PZA组病变轻且局限,生理盐水组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛。重组BCG联合INH+PZA治疗组肺组织病变最轻。结论:GLS/IL-12重组BCG对小鼠结核病有一定免疫治疗作用;重组BCG联合临床常用的抗痨药可增强抗结核病的疗效。
- 杨春张黎何永林徐蕾伊正君李娜王渝伟朱道银
- 关键词：颗粒溶素IL-12重组BCG结核病抗痨药
- 重组结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6融合蛋白的制备及应用研究被引量：21
- 2004年
- 目的 制备重组培养滤液蛋白 10和 6 0 0 0早期分泌性抗原靶的融合蛋白 (rCFP10 ESAT 6 ) ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 用基因拼接 (GeneSOEing)法扩增lhp ESAT 6融合基因、并克隆入pQE30质粒 ,表达、纯化rCFP10 ESAT 6蛋白 ,通过Westernblot分析其抗原性。建立豚鼠BCG免疫模型和结核分枝杆菌强毒株 (H3 7Rv)感染模型 ,建立以融合蛋白为抗原的酶联免疫吸附测定 (ELISA)法 ,检测豚鼠血清中的抗结核分枝杆菌抗体 ,并与以纯化蛋白衍生物 (PPD)为抗原的ELISA法比较。结果 重组质粒pQE30 CFP10 ESAT 6靶基因的测序结果与预计序列 (lhp linker ESAT 6 )完全一致。融合蛋白在DH5α菌中以可溶性非包涵体形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 4 0 % ,分子质量为 2 6 0 0 0 ,纯化后的蛋白纯度为 98% ,浓度为 1 2 g/L。Westernblot分析表明 ,融合蛋白与活动性肺结核患者血清、兔抗CFP10血清和兔抗ESAT 6血清都能发生特异性免疫反应。以 10只生理盐水处理豚鼠血清的平均吸光度 (A)值 + 2s为正常界限值 ,以融合蛋白为抗原 ,11份H3 7Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应 ,11份BCG免疫豚鼠血清仅 1份呈阳性反应 ;以PPD为抗原 ,11份H3 7Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应 ,11份BCG免疫豚鼠血清也?
- 陈全朱道银骆旭东蒋英江山
- 关键词：重组结核分枝杆菌
- 腺病毒载体的研究进展被引量：4
- 2005年
- 陈竞朱道银唐恩洁
- 关键词：腺病毒载体基因治疗疫苗研究
- 颗粒溶素的应用研究进展
- 2005年
- 颗粒溶素是人类自然杀伤细胞和细胞毒性T淋巴细胞胞质颗粒中的可溶性分子,是一种天然的抗菌肽,具有抗病原微生物、抗肿瘤等多种生物活性.本文就颗粒溶素的溶菌机制,抗微生物、抗肿瘤作用及评估细胞免疫等方面的研究进展及其应用作一综述.
- 杨春朱道银
- 关键词：颗粒溶素细胞毒性T淋巴细胞自然杀伤细胞抗病原微生物抗微生物细胞免疫
- Ag85B-MPT64融合基因疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用被引量：6
- 2004年
- 目的 研究Ag85B MPT6 4 (AM)融合基因疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护效果。方法 C5 7BL/ 6小鼠 6 3只 ,随机分为磷酸盐缓冲液 (PBS)、空质粒、卡介苗 (BCG)、pcDNA/Ag85B、pcDNA/MPT6 4、pcDNA/Ag85B +pcDNA/MPT6 4、pcDNA/AM组 ,采用肌肉注射法免疫小鼠 ,0、3、6周各 1次 ,BCG组只在 0周予皮内注射卡介苗 1次。末次免疫后第 5周用H37Rv经尾静脉注射实施攻击 ,攻击后 6周处死部分小鼠 ,测血清总IgG ,特异性脾淋巴细胞增殖、IFN γ及IL 4分泌水平 ;观测脾、肺组织荷菌量和病理学检查以及剩余小鼠的存活时间。结果 AM基因疫苗组诱导的特异性的IgG、脾淋巴细胞增殖和IFN γ的分泌以及肺、脾组织荷菌量、病理学改变和小鼠存活时间明显优于其他DNA疫苗单独免疫组。结论 AMDNA疫苗在抗结核分枝杆菌感染过程中具有明显的免疫保护作用。
- 骆旭东朱道银江山陈全蒋英
- 关键词：DNA疫苗结核分枝杆菌免疫疗法
