陈全
- 作品数：74 被引量：203H指数：7
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学一般工业技术更多>>
- 小鼠psIL-12质粒抗结核分枝杆菌感染的研究被引量：5
- 2004年
- 目的 观察、评价小鼠白细胞介素 12真核表达质粒psIL 12对结核分枝杆菌感染小鼠细胞因子水平的影响及疗效。方法 结核分枝杆菌H37Rv感染的C5 7BL J6小鼠随机分成生理盐水、pcDNA3.1对照组 ,psIL 12治疗组 ,每组各 6只。感染 4周后分别予以生理盐水、pcDNA3.1、psIL 12 ,第1次治疗后 8周处死检测器官活菌数 ,脏器重量指数 (WI) ,脾淋巴细胞特异性IFN γ、IL 4细胞因子分泌水平 ,并观察肺、脾组织病理改变情况。结果 psIL 12治疗组肺组织活菌数 (每mglog1 0 CFU ml)为7.4 1± 0 .5 0 ,与对照组 (8.15± 0 .37、8.19± 0 .2 9)比较显著降低 (P <0 .0 5 ) ;脾组织荷菌量 (每mglog1 0CFU ml)为 5 .31± 0 .2 1,与对照组 (5 .76± 0 16、5 .88± 0 .2 1)比较显著降低 (P <0 .0 5 )。psIL 12治疗组脾脏重量指数为 0 .5 8± 0 .0 5 ,与对照组 (1.0 2± 0 .0 8、1.10± 0 .0 2 )比较显著降低 (P <0 .0 5 )。脾淋巴细胞IFN γ(pg ml)为 4 78.0± 10 .1,与对照组 (134.5± 15 .7、12 5 .1± 8.2 )比较显著升高 (P <0 .0 5 )。各组间IL 4水平差异无显著性。对照组肺组织病理改变以变质、渗出为主 ,而psIL 12治疗组以增生改变为主。对照组与治疗组间比较脾脏病理改变不明显。结论 psIL 12真核表达质粒对小鼠结核?
- 江山朱道银蒋英骆旭东陈全
- 关键词：小鼠结核分枝杆菌白细胞介素12真核表达质粒
- 结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗的免疫效果观察被引量：9
- 2003年
- 目的:研究并比较结核分枝杆菌(H37Rv)Ag85B、MPT64DNA.以及两者的融合基因(AM)的免疫原性。方法:雌性C57BL/6小鼠25只,随机分为5组,即A组(PBS)、B组(peDNA3.1)、C组(pcDNA/Ag85B)、D组(pcDNA/MPT64)和E组(pcDNA/AM)。分别于胫前肌注射7.5 g/L利多卡因和质粒混合物(1:4,100μL,含质粒70μg/次),间隔2 wk免疫 1次,共3次。末次免疫后4 wk取血分离血清测定总IgG,同时分离脾淋巴细胞,用PPD刺激后分别做脾淋巴细胞增殖实验(MTT比色法)和测定脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ的水平。结果:Ag85B、MPT64和AM质粒DNA,均能诱导小鼠产生较高水平的PPD特异性IgG。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经PPD刺激后,能产生特异性淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ。peDNA/AM组IFN-γ的分泌水平明显高于pcDNA/Ag85B和pcDNA/MPT64免疫组(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗,能在小鼠体内诱导特异性细胞和体液免疫。
- 骆旭东朱道银陈全蒋英江山
- 关键词：结核分枝杆菌AG85BMPT64融合基因DNA疫苗
- 结核分枝杆菌lhp基因原核表达载体的构建和表达被引量：5
- 2003年
- 目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。 结果 :以重组体分别转化DH5α和BL2 1(DE3)菌后 ,经IPTG诱导 ,pQE30 CFP10未表达目的蛋白 ;而 pET32a(+) CFP10则表达出Mr 为 2 0 0 0 0左右重组蛋白。SDS PAGE分析显示 ,IPTG诱导 4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞质中 ,表达量占全菌蛋白质的 38% ,用Westernblot证实其具有良好的抗原性。经Ni NTA柱纯化 ,获得纯度为 93%的重组蛋白。结论 :成功地构建原核表达载体 pET32a(+) CFP10 ,并获得重组CFP10蛋白 ,为MTB重组抗原的应用奠定了基础。
- 陈全骆旭东蒋英江山朱道银
- 关键词：结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌DNA疫苗对小鼠结核病免疫治疗作用的实验研究被引量：19
- 2005年
- 目的探讨结核分枝杆菌DNA疫苗pcD85B、pcDMPT64以及小鼠白细胞介素12(IL-12)真核表达质粒psIL12对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法将结核分枝杆菌H37Rv感染的C57BL/J6小鼠100只随机分成生理盐水对照组、pcDNA3.1对照组,psIL12治疗组,pcD85B、pcDMPT64、pcD85B+pcDMPT64、pcD85B+psIL12DNA疫苗治疗组。感染4周后分别给予生理盐水、空质粒、psIL-12及DNA疫苗,第1次治疗后2个月处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞特异性γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平,并于第1次治疗后2个月、5个月观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果pcD85B治疗组肺组织荷菌量(lg-1CFU/g)为6.99±0.40,比生理盐水对照组(8.15±0.37)、pCDNA3.1对照组(8.19±0.29)显著降低(P<0.01);脾组织荷菌量(lg-1CFU/g,x±s)为5.17±0.33,比生理盐水对照组(5.76±0.16)及空质粒对照组(5.88±0.21)显著降低(P<0.05)。psIL12治疗组的肺(7.41±0.50)、脾(5.31±0.21)荷菌量比对照组显著降低(P<0.05);pcD85B+psIL12治疗组肺、脾荷菌量与pcD85B组比较差别无统计学意义。pcD85B组脾淋巴细胞IFN-γ、TNFα水平比对照组显著升高(P<0.05),各组间IL4水平差异无统计学意义。生理盐水对照组、pCDNA3.1对照组肺组织?
- 江山朱道银骆旭东蒋英陈全
- 关键词：免疫治疗作用DNA疫苗小鼠PCDNA3.1PCDNA3.1AG85B肺组织病理改变
- 结核分枝杆菌Ag85B与MPT64真核共表达质粒的构建及表达
- 2004年
- 目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和MPT6 4编码基因的共表达载体 pBud85B -MPT。 方法 :将结核分枝杆菌Ag85B、MPT6 4基因同时克隆进多启动子共表达载体pBudCE4 .1中 ,得到真核共表达质粒 pBud85B -MPT ;将 pBud85B -MPT转染COS - 7细胞 ,通过RT -PCR方法检测目的基因的表达。结果 :在COS - 7细胞中同时检测到Ag85B、MPT6 4的表达。 结论 :pBud85B -MPT共表达质粒构建成功 ,为进一步研究新型结核病疫苗奠定基础。
- 江山朱道银骆旭东陈全蒋英
- 关键词：结核分枝杆菌AG85B
- 树突状细胞疫苗的制备及其体外诱导细胞毒性T淋巴细胞对宫颈癌CaSki细胞的杀伤作用被引量：8
- 2011年
- 目的:制备树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗并观察其在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应。方法:分离培养小鼠未成熟DCs,FCM检测小鼠未成熟DCs表面标志物CD40、CD86、主要组织相容性复合体-Ⅱ(major histocompatibility complex-Ⅱ,MHC-Ⅱ)和CD11c;将已成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16E6E7基因的重组腺病毒pAd-E6E7感染体外培养的小鼠未成熟DCs,提取CaSki细胞裂解物负载DCs,制备DC疫苗,激光共聚焦显微镜下观察pAd-E6E7感染的小鼠未成熟DCs绿色荧光蛋白表达,Western印迹法检测E6蛋白的表达;DCs疫苗诱导产生CTLs后与CaSki细胞共培养,CCK8(cell countingkit8)法检测其对CaSki细胞的杀伤效应。结果:成功分离培养了小鼠未成熟DCs,并制备获得了HPV16E6E7特异性DCs疫苗。DCs疫苗诱导产生的CTLs对CaSki细胞具有杀伤作用,pAd-E6E7感染组对CaSki的杀伤效应明显高于CaSki细胞裂解物负载组及未处理DCs组(P<0.05)。结论:以携带HPV16E6E7基因的重组腺病毒感染DCs制备基因修饰的DCs疫苗,具有诱导CTLs体外杀伤子宫颈癌CaSki细胞的作用。
- 焦庆昉易发平陈全兰欢艾青符少月俞垚宋方洲
- 关键词：宫颈癌人乳头瘤病毒树突状细胞CASKI细胞
- 重组结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6融合蛋白的制备及应用研究被引量：21
- 2004年
- 目的 制备重组培养滤液蛋白 10和 6 0 0 0早期分泌性抗原靶的融合蛋白 (rCFP10 ESAT 6 ) ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 用基因拼接 (GeneSOEing)法扩增lhp ESAT 6融合基因、并克隆入pQE30质粒 ,表达、纯化rCFP10 ESAT 6蛋白 ,通过Westernblot分析其抗原性。建立豚鼠BCG免疫模型和结核分枝杆菌强毒株 (H3 7Rv)感染模型 ,建立以融合蛋白为抗原的酶联免疫吸附测定 (ELISA)法 ,检测豚鼠血清中的抗结核分枝杆菌抗体 ,并与以纯化蛋白衍生物 (PPD)为抗原的ELISA法比较。结果 重组质粒pQE30 CFP10 ESAT 6靶基因的测序结果与预计序列 (lhp linker ESAT 6 )完全一致。融合蛋白在DH5α菌中以可溶性非包涵体形式存在 ,表达量占菌体总蛋白的 4 0 % ,分子质量为 2 6 0 0 0 ,纯化后的蛋白纯度为 98% ,浓度为 1 2 g/L。Westernblot分析表明 ,融合蛋白与活动性肺结核患者血清、兔抗CFP10血清和兔抗ESAT 6血清都能发生特异性免疫反应。以 10只生理盐水处理豚鼠血清的平均吸光度 (A)值 + 2s为正常界限值 ,以融合蛋白为抗原 ,11份H3 7Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应 ,11份BCG免疫豚鼠血清仅 1份呈阳性反应 ;以PPD为抗原 ,11份H3 7Rv感染豚鼠血清全部呈阳性反应 ,11份BCG免疫豚鼠血清也?
- 陈全朱道银骆旭东蒋英江山
- 关键词：重组结核分枝杆菌
- 肺腺癌A549细胞中TNIK通过Rho/ROCK/LIMK1调控微丝骨架形态
- 2023年
- 目的探讨肺腺癌A549细胞中TNIK调节微丝骨架形态的分子机制及其联合靶向有丝分裂化疗药物处理对癌细胞增殖与凋亡的影响。方法利用RNA-seq筛选稳定敲减TNIK表达后A549细胞差异表达基因,并分析微丝骨架组装相关基因的表达情况;通过RT-PCR、免疫印迹和双重免疫荧光染色分析TNIK调控微丝-微管骨架系统组装的分子机制,并联用靶向有丝分裂化疗药物紫杉醇处理癌细胞后,检测癌细胞的生长及凋亡情况。结果RNA-seq结果显示,敲减TNIK表达后的差异表达基因与有丝分裂进程密切相关;进一步分析发现TNIK表达可在转录水平显著抑制Rho通路相关基因RhoA/B、ROCK1/2和LIMK1表达(P<0.01),但对Rac与CDC42通路相关基因表达无显著影响。免疫荧光检测发现,敲减TNIK表达导致微丝骨架系统形态紊乱及有丝分裂异常。与对照细胞相比,联合紫杉醇处理的TNIK敲减组细胞增殖下调(P<0.01),而凋亡率显著增加(P<0.01)。结论肺腺癌A549细胞中TNIK通过Rho/ROCK/LIMK1调控细胞微丝-微管骨架系统形态,敲减TNIK可增强化疗药物对癌细胞增殖的抑制作用。
- 孙雪花张莲张莲张春冬
- 关键词：肺腺癌细胞微丝骨架微管骨架
- Ag85B-MPT64融合基因疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用被引量：6
- 2004年
- 目的 研究Ag85B MPT6 4 (AM)融合基因疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护效果。方法 C5 7BL/ 6小鼠 6 3只 ,随机分为磷酸盐缓冲液 (PBS)、空质粒、卡介苗 (BCG)、pcDNA/Ag85B、pcDNA/MPT6 4、pcDNA/Ag85B +pcDNA/MPT6 4、pcDNA/AM组 ,采用肌肉注射法免疫小鼠 ,0、3、6周各 1次 ,BCG组只在 0周予皮内注射卡介苗 1次。末次免疫后第 5周用H37Rv经尾静脉注射实施攻击 ,攻击后 6周处死部分小鼠 ,测血清总IgG ,特异性脾淋巴细胞增殖、IFN γ及IL 4分泌水平 ;观测脾、肺组织荷菌量和病理学检查以及剩余小鼠的存活时间。结果 AM基因疫苗组诱导的特异性的IgG、脾淋巴细胞增殖和IFN γ的分泌以及肺、脾组织荷菌量、病理学改变和小鼠存活时间明显优于其他DNA疫苗单独免疫组。结论 AMDNA疫苗在抗结核分枝杆菌感染过程中具有明显的免疫保护作用。
- 骆旭东朱道银江山陈全蒋英
- 关键词：DNA疫苗结核分枝杆菌免疫疗法
- 结核分枝杆菌Ag85B与IL-12基因真核共表达质粒的构建及表达被引量：4
- 2004年
- 目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL 12基因的共表达载体pBud85B IL12。方法 :将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL 12基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4 .1中 ,构建真核共表达质粒pBud85B IL12。以pBud85B IL12转染COS 7细胞 ,通过RT PCR及ELISA方法检测目的基因的表达。结果 :在COS 7细胞中同时可检测到Ag85B和IL12的表达。结论 :pBud85B IL12共表达质粒的成功构建 ,为对其免疫原性。
- 江山朱道银骆旭东陈全蒋英
- 关键词：结核分枝杆菌AG85BIL-12
