骆旭东
- 作品数：46 被引量：172H指数：8
- 供职机构：遵义医学院第三附属医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠psIL-12质粒抗结核分枝杆菌感染的研究被引量：5
- 2004年
- 目的 观察、评价小鼠白细胞介素 12真核表达质粒psIL 12对结核分枝杆菌感染小鼠细胞因子水平的影响及疗效。方法 结核分枝杆菌H37Rv感染的C5 7BL J6小鼠随机分成生理盐水、pcDNA3.1对照组 ,psIL 12治疗组 ,每组各 6只。感染 4周后分别予以生理盐水、pcDNA3.1、psIL 12 ,第1次治疗后 8周处死检测器官活菌数 ,脏器重量指数 (WI) ,脾淋巴细胞特异性IFN γ、IL 4细胞因子分泌水平 ,并观察肺、脾组织病理改变情况。结果 psIL 12治疗组肺组织活菌数 (每mglog1 0 CFU ml)为7.4 1± 0 .5 0 ,与对照组 (8.15± 0 .37、8.19± 0 .2 9)比较显著降低 (P <0 .0 5 ) ;脾组织荷菌量 (每mglog1 0CFU ml)为 5 .31± 0 .2 1,与对照组 (5 .76± 0 16、5 .88± 0 .2 1)比较显著降低 (P <0 .0 5 )。psIL 12治疗组脾脏重量指数为 0 .5 8± 0 .0 5 ,与对照组 (1.0 2± 0 .0 8、1.10± 0 .0 2 )比较显著降低 (P <0 .0 5 )。脾淋巴细胞IFN γ(pg ml)为 4 78.0± 10 .1,与对照组 (134.5± 15 .7、12 5 .1± 8.2 )比较显著升高 (P <0 .0 5 )。各组间IL 4水平差异无显著性。对照组肺组织病理改变以变质、渗出为主 ,而psIL 12治疗组以增生改变为主。对照组与治疗组间比较脾脏病理改变不明显。结论 psIL 12真核表达质粒对小鼠结核?
- 江山朱道银蒋英骆旭东陈全
- 关键词：小鼠结核分枝杆菌白细胞介素12真核表达质粒
- 结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗的免疫效果观察被引量：9
- 2003年
- 目的:研究并比较结核分枝杆菌(H37Rv)Ag85B、MPT64DNA.以及两者的融合基因(AM)的免疫原性。方法:雌性C57BL/6小鼠25只,随机分为5组,即A组(PBS)、B组(peDNA3.1)、C组(pcDNA/Ag85B)、D组(pcDNA/MPT64)和E组(pcDNA/AM)。分别于胫前肌注射7.5 g/L利多卡因和质粒混合物(1:4,100μL,含质粒70μg/次),间隔2 wk免疫 1次,共3次。末次免疫后4 wk取血分离血清测定总IgG,同时分离脾淋巴细胞,用PPD刺激后分别做脾淋巴细胞增殖实验(MTT比色法)和测定脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ的水平。结果:Ag85B、MPT64和AM质粒DNA,均能诱导小鼠产生较高水平的PPD特异性IgG。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经PPD刺激后,能产生特异性淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ。peDNA/AM组IFN-γ的分泌水平明显高于pcDNA/Ag85B和pcDNA/MPT64免疫组(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗,能在小鼠体内诱导特异性细胞和体液免疫。
- 骆旭东朱道银陈全蒋英江山
- 关键词：结核分枝杆菌AG85BMPT64融合基因DNA疫苗
- MPT64 DNA疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用被引量：3
- 2004年
- 目的 :研究MPT6 4DNA疫苗对鼠结核杆菌感染的免疫保护效果 .方法 :C5 7BL/ 6小鼠 36只 ,随机分为 4组 .A组 (PBS)、B组 (pcDNA3.1)、C组 (BCG )、D组 (pcDNA/MPT6 4 ) ;分别于胫前肌注射质粒DNA免疫 ,70 μg/次 ,1次 /2wk ,共 3次 .末次免疫后 5wk用 10 6CFUH37Rv经尾静脉攻击 ,攻击后 6wk处死小鼠 ,测血清总IgG ,特异性脾淋巴细胞增殖实验、IFN γ 及IL 4分泌水平 .作脾、肺组织荷菌量和病理学检查以及观察小鼠存活时间 .结果 :MPT6 4基因疫苗诱导小鼠特异性IgG的产生、脾淋巴细胞增殖以及IFN γ 的分泌 .MPT6 4DNA免疫组肺、脾组织荷菌量 ,病理学改变和小鼠存活时间明显优于阴性对照组 .结论 :MPT6 4DNA疫苗在抗结核分枝杆菌 (Mtb)感染过程中具有一定免疫保护作用 .
- 孙平骆旭东朱道银唐国建
- 关键词：MPT64DNA疫苗结核分枝杆菌感染脾淋巴细胞增殖分泌水平免疫保护效果
- 结核分枝杆菌lhp基因原核表达载体的构建和表达被引量：5
- 2003年
- 目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。 结果 :以重组体分别转化DH5α和BL2 1(DE3)菌后 ,经IPTG诱导 ,pQE30 CFP10未表达目的蛋白 ;而 pET32a(+) CFP10则表达出Mr 为 2 0 0 0 0左右重组蛋白。SDS PAGE分析显示 ,IPTG诱导 4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞质中 ,表达量占全菌蛋白质的 38% ,用Westernblot证实其具有良好的抗原性。经Ni NTA柱纯化 ,获得纯度为 93%的重组蛋白。结论 :成功地构建原核表达载体 pET32a(+) CFP10 ,并获得重组CFP10蛋白 ,为MTB重组抗原的应用奠定了基础。
- 陈全骆旭东蒋英江山朱道银
- 关键词：结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌DNA疫苗对小鼠结核病免疫治疗作用的实验研究被引量：19
- 2005年
- 目的探讨结核分枝杆菌DNA疫苗pcD85B、pcDMPT64以及小鼠白细胞介素12(IL-12)真核表达质粒psIL12对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法将结核分枝杆菌H37Rv感染的C57BL/J6小鼠100只随机分成生理盐水对照组、pcDNA3.1对照组,psIL12治疗组,pcD85B、pcDMPT64、pcD85B+pcDMPT64、pcD85B+psIL12DNA疫苗治疗组。感染4周后分别给予生理盐水、空质粒、psIL-12及DNA疫苗,第1次治疗后2个月处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞特异性γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平,并于第1次治疗后2个月、5个月观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果pcD85B治疗组肺组织荷菌量(lg-1CFU/g)为6.99±0.40,比生理盐水对照组(8.15±0.37)、pCDNA3.1对照组(8.19±0.29)显著降低(P<0.01);脾组织荷菌量(lg-1CFU/g,x±s)为5.17±0.33,比生理盐水对照组(5.76±0.16)及空质粒对照组(5.88±0.21)显著降低(P<0.05)。psIL12治疗组的肺(7.41±0.50)、脾(5.31±0.21)荷菌量比对照组显著降低(P<0.05);pcD85B+psIL12治疗组肺、脾荷菌量与pcD85B组比较差别无统计学意义。pcD85B组脾淋巴细胞IFN-γ、TNFα水平比对照组显著升高(P<0.05),各组间IL4水平差异无统计学意义。生理盐水对照组、pCDNA3.1对照组肺组织?
- 江山朱道银骆旭东蒋英陈全
- 关键词：免疫治疗作用DNA疫苗小鼠PCDNA3.1PCDNA3.1AG85B肺组织病理改变
- 结核分枝杆菌Ag85B与MPT64真核共表达质粒的构建及表达
- 2004年
- 目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和MPT6 4编码基因的共表达载体 pBud85B -MPT。 方法 :将结核分枝杆菌Ag85B、MPT6 4基因同时克隆进多启动子共表达载体pBudCE4 .1中 ,得到真核共表达质粒 pBud85B -MPT ;将 pBud85B -MPT转染COS - 7细胞 ,通过RT -PCR方法检测目的基因的表达。结果 :在COS - 7细胞中同时检测到Ag85B、MPT6 4的表达。 结论 :pBud85B -MPT共表达质粒构建成功 ,为进一步研究新型结核病疫苗奠定基础。
- 江山朱道银骆旭东陈全蒋英
- 关键词：结核分枝杆菌AG85B
- 结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗对鼠结核杆菌感染的保护作用
- 目的：
本研究拟从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ag85b、mpt64以及引入甘氨酸接头连接的Ag85B-MPT64融合基因（AM），构建DNA疫苗并探讨其在小鼠体内诱导的免疫应答和在小鼠结核感...
- 骆旭东
- 关键词：结核分枝杆菌DNA疫苗MPT64AG85B融合基因
- 文献传递
- 结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL的表达及鉴定被引量：6
- 2005年
- 目的 表达结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL ,鉴定其生物学活性并制备其多克隆抗体。方法 采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出icl基因片段 ,将其插入原核表达质粒pQE30 ,构建重组质粒 pQE30 icl。将pQE30 icl转化大肠杆菌 ,用IPTG诱导目的基因表达。Western blot免疫印迹法鉴定后纯化该表达产物 ,测定其酶活性并用此纯化蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果 序列分析发现PCR扩得的icl有两个核苷酸突变 ,但均为无义突变。在大肠杆菌中表达的目的产物经SDS PAGE分析约为 4 7kDa。免疫印迹分析证实目的蛋白与阳性结核病患者抗血清产生特异性反应。纯化的目的蛋白异柠檬酸裂解酶的酶活性为 16 .7u/mg。双向免疫扩散法测定目的蛋白免疫兔血清的抗体效价为 1 32。结论 研制出的结核分枝杆菌重组ICL具有异柠檬酸裂解酶活性和抗原性 ,重组ICL和抗ICL免疫血清的制备为抗结核分枝杆菌潜伏感染的研究奠定了必要的物质基础。
- 李俊明朱道银伊正君骆旭东江山
- 关键词：结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因的构建表达被引量：6
- 2003年
- 目的 :构建结核分枝杆菌 (H37Rv)Ag85B MPT6 4融合基因并在真核细胞中表达 .方法 :采用序贯PCR(geneSOEing)法将Ag85B和MPT6 4编码基因用疏水甘氨酸接头(Gly4Ser) 3经PCR扩增融合 ,定向克隆入 pcDNA3.1(+)中 .采用脂质体转染法将pcDNA/Ag85B MPT6 4 (pcDNA/AM )转染COS 7细胞 ,用RT PCR、ELISA和斑点印迹法检测其表达 .结果 :Ag85B MPT6 4融合基因经双向DNA序列测定 ,碱基突变率为 0 .11%(2 /170 7) ,突变为无意义突变 ;重组质粒转染COS 7细胞后经检测证实 ,该融合基因能在真核细胞中表达 .结论 :成功地构建了Ag85B MPT6 4融合基因并在真核细胞中表达 。
- 骆旭东陈全蒋英江山朱道银
- 关键词：分枝杆菌结核AG85BMPT64重组融合蛋白质类
- 急性中央颈脊髓损伤综合征9例报告
- 1999年
- 骆旭东涂仁隆尹培荣
- 关键词：颈椎
