徐劲
- 作品数：164 被引量：384H指数：11
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- 虫源性IgE依赖组胺释放因子诱导致敏肥大细胞释放组胺的研究
- 2007年
- 目的制备日本血吸虫和华支睾吸虫IgE依赖组胺释放因子重组蛋白rSjHRF和rCsHRF,并观察两者诱导大鼠致敏肥大细胞释放组胺的功能。方法分别克隆SjHRF和CsHRF基因完整编码序列,将重组质粒分别转化大肠埃希菌BL21并诱导表达,亲和层析纯化可溶性表达的重组蛋白,将纯化的rSjHRF和rCsHRF分别与卵清蛋白变应原致敏的大鼠肺肥大细胞一起孵育,利用荧光分光光度法测定肥大细胞组胺释放量,并制备2种重组蛋白诱导肥大细胞释放组胺的剂量依赖曲线和动力学曲线。结果成功构建重组质粒pET-30-rSjHRF和pET-30-rCsHRF,并获得纯化的可溶性重组蛋白rSjHRF和rCsHRF;2种重组蛋白诱导大鼠致敏肥大细胞释放组胺均具有剂量依赖性,当浓度为150mg/L时,rSjHRF和rCsHRF诱导致敏肥大细胞组胺平均释放率为49.78%和32.63%;2种重组蛋白诱导致敏肥大细胞组胺释放率随时间延长而增加,在反应开始后约35min,组胺释放率达到最高。结论重组虫源性IgE依赖组胺释放因子可诱导大鼠致敏肥大细胞释放组胺,提示该蛋白可能与寄生性蠕虫感染诱导机体Ⅰ型超敏反应的发生相关。
- 陈晓湘胡旭初徐劲余新炳
- 关键词：日本血吸虫华支睾吸虫肥大细胞组胺
- 华支睾吸虫微粒体GST－1，其编码核酸及其应用
- 本发明公开了一种编码华支睾吸虫微粒体GST－1的新的基因，基因编码的多肽，多肽的抗体。本发明还公开了此多肽用于筛选华支睾吸虫微粒体GST－1的抑制剂，多核苷酸作为引物或者作为探针的应用，尤其公开了此多肽与多核苷酸作为诊断...
- 余新炳吴忠道徐劲陈守义吴德
- 文献传递
- 牛带绦虫亚洲亚种乳酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫原性分析被引量：5
- 2008年
- 目的对牛带绦虫亚洲亚种成虫乳酸脱氢酶基因(LDH)进行克隆、表达和免疫原性分析。方法将牛带绦虫亚洲亚种成虫TaLDH克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白pET-30a(+)-TaLDH用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均显示重组质粒pET-30a(+)-TaLDH构建成功。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白,浓度为0.9mg/ml。Western blotting分析结果显示,重组蛋白pET-30a(+)-TaLDH能识别感染牛带绦虫亚洲亚种的猪血清和患者血清,在相对分子质量(Mr)35000处有一清晰条带,表明其具有免疫反应性。结论牛带绦虫亚洲亚种成虫乳酸脱氢酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达。
- 黄江胡旭初吴璇徐劲余新炳包怀恩郎书源廖兴江
- 关键词：牛带绦虫亚洲亚种克隆原核表达
- 华支睾吸虫表膜相关抗原重组表达载体的构建被引量：4
- 2004年
- 目的 通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因 ,并构建 2 0 8kDa华支睾吸虫表膜相关抗原(CSTA2 0 8)重组表达载体 ,为进一步研究其功能及其应用奠定基础。方法 对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选 ,通过NCBI和ExPasy网站的Blast程序进行序列比对 ,识别华支睾吸虫新基因 ,并应用Motifscan、NCBIConservedDo mainSearch等程序对其进行结构域分析。将所发现的华支睾吸虫表膜相关抗原基因编码区定向克隆到原核及真核表达载体PGEX - 4T - 1和PcDNA3上 ,构建的PGEX - 4T - 1-CSTA2 0 8、PcDNA3-CSTA2 0 8重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实。结果 发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因 ,完整阅读框含 5 5 5个碱基 ,编码 184个氨基酸 ,理论分子量为 2 0 8kDa ,理论pI为 4 33。序列分析表明 ,华支睾吸虫CSTA2 0 8编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性 ,CSTA2 0 8具有完整的钙结合蛋白保守功能域。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。结论 发现华支睾吸虫表膜相关抗原基因 。
- 何东苟余新炳吴忠道徐劲吴德胡旭初陈守义
- 关键词：华支睾吸虫克隆
- 华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因的克隆表达和重组蛋白的免疫学分析被引量：3
- 2008年
- 目的对新发现的华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因进行克隆、表达和免疫学初步研究。方法将华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因(去除了信号肽编码序列)克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白免疫SD大鼠制备抗血清。用蛋白印迹(Western blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能识别感染了华支睾吸虫的SD大鼠血清,表明具有免疫反应性。结论华支睾吸虫组织蛋白酶D样天冬氨酸蛋白酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫原性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
- 赵俊红胡旭初徐劲胡凤玉周红娟胡慧霞郑小凌李艳文余新炳
- 关键词：华支睾吸虫组织蛋白酶D天冬氨酸蛋白酶免疫原性
- 华支睾吸虫CsSCCRO基因的表达和鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的将目的基因CsSCCRO转染Hela细胞,检测转染效率和表达水平,为进一步在细胞学水平研究编码蛋白的功能提供依据。方法将目的基因CsSCCRO克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,通过脂质体方法转入Hela细胞,RT-PCR和荧光观察来鉴定转录和表达水平。结果真核重组质粒pEGFP-N1-CsSCCRO转入Hela细胞后稳定表达荧光蛋白;RT-PCR鉴定转染的Hela细胞,扩增产物约为780 bp,与预期值相符。结论CsSCCRO基因能够转染到Hela细胞中,并且能与GFP高效转录和翻译成融合蛋白。
- 赵玉利胡旭初马长玲徐劲胡凤玉余新炳
- 关键词：华支睾吸虫
- Echinococcus granulosus钙结合蛋白基因的克隆和序列分析被引量：7
- 2002年
- 目的 获得细粒棘球蚴Calcium bindingprotein(CaBPs)基因序列资料 ,进行序列分析 ,为包虫病免疫预防研究奠定基础。方法 从包囊内获取细粒棘球蚴原头蚴 (protoscolices) ,提取RNA ,逆转录成cDNA ,用特异引物扩增CaBPs基因 ;并将其克隆到T载体后进行序列测定和分析。然后登录Gene/Bank数据库。结果 以cDNA为模板获得 3个核苷酸长度不同的基因 ,分别是CaBP1为 914bp ,CaBP2为 10 95bp ,CaBP3为 10 39bp。同源性比较结果表明 :来自新疆羊源CaBPs基因序列和巴西 (Brazil)羊源基因CaBPs同源性为 90 %以上 ;从cDNA获得的 3个CaBPs基因序列的比较分析说明钙结合蛋白可能存在一个家族 ,有不同的成员组成。结论 CaBPs在E .granulosus虫体发育过程中具有十分重要的功能 ,到目前为止其机理尚不完全明了 ,CaBPs基因的获得为进一步研究其结构和功能 ,以及对包虫病的防治具有重要意义。
- 郭中敏徐劲陆家海单志新陈慧红余新炳
- 关键词：细粒棘球蚴钙结合蛋白克隆
- 华支睾吸虫一个谷胱甘肽转移酶新基因的克隆与表达被引量：1
- 2004年
- 目的 克隆华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)谷胱甘肽转移酶(glutathione transferase,GST)的一个新基因,并在大肠杆菌中表达。方法 用PCR方法从华支睾吸虫成虫cDNA(质粒)文库中扩增新基因CsGST1,对DNA及其推导的氨基酸进行序列分析。将CsGST1克隆到原核表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21/DE3表达,用SDS-PAGE鉴定重组蛋白。结果 从华支睾吸虫成虫cDNA(质粒)文库扩增出642 bp的CsGSTl,序列分析显示它所编码的氨基酸序列与麝猫后睾吸虫GST的同源性最高(88％),并具有GST N-末端和C-末端的保守功能域。构建了重组质粒pET-30a(+)-CsGST1,SDS-PAGE显示CsGST1在大肠杆菌中得到了高效表达,pET-30a(+)-CsGST1的蛋白条带的分子量约为30 kDa。结论成功构建了CsGST1的原核表达载体,并在大肠杆菌中得到了高效表达,为进一步研究该基因的功能打下了基础。
- 伍忠銮余新炳吴德徐劲吴忠道胡旭初
- 关键词：华支睾吸虫谷胱甘肽转移酶克隆
- 日本血吸虫p50亲免素基因克隆、表达及纯化被引量：1
- 2005年
- 目的扩增、原核克隆和表达日本血吸虫(Sj)p50亲免素基因全长cDNA,并进行表达产物的纯化。方法从成虫RNA中RT-PCR扩增Sjp50亲免素基因完整的编码阅读框后,将其克隆入pET 30 a(+)原核表达载体中,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导高表达后用亲和层析柱对表达产物进行纯化。结果将Sjp50亲免素基因成功克隆入pET 30 a(+)表达载体中;诱导表达并成功纯化出重组Sjp50亲免素蛋白。结论成功克隆Sjp50亲免素基因,并表达和纯化得到了p50亲免素蛋白,为研究Sjp50亲免素的功能及其进行疫苗等研究奠定了基础。
- 李孜余新炳吴忠道徐劲胡旭初
- 关键词：日本血吸虫中国大陆株克隆表达纯化
- 华支睾吸虫cDNA表达文库的构建及初步筛选被引量：11
- 2003年
- 目的 构建华支睾吸虫cDNA表达文库 ,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。 方法 提取华支睾吸虫总RNA ;用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒操作方法 ,进行反转录合成双链cDNA ;PCR产物纯化后 ,进行SfiI酶切 ;用ChromaSpin 40 0柱将酶切产物进行分级分离 ,回收 0 .4～ 4kb的组分 ,并与λTriplEx2载体连接、体外蛋白包装 ,产生未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库的扩增 ,并测定扩增文库的滴度及鉴定。 结果 未扩增文库滴度达 7.5× 10 7pfu/ml ,扩增文库滴度达 2 .7× 10 8pfu/ml ;用载体两端的引物进行PCR鉴定 ,显示 :所选噬菌体中均含有重组的cDNA ,大小在 5 0 0bp以上。 结论 已成功地获得一高质量的华支睾吸虫cD
- 陈守义余新炳徐劲蒋忠军吴德何东苟林睿
- 关键词：华支睾吸虫CDNA表达文库
