刘崇灵
- 作品数：7 被引量：33H指数：4
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- 猪细小病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测不同接毒条件对病毒增殖效果的影响被引量：1
- 2014年
- 为提高细小病毒(PPV)细胞培养的滴度,本试验通过对猪细小病毒(PPV)感染ST细胞接毒工艺各步骤的比较研究,从不同接毒方式、细胞接种量、病毒感作时间以及接种浓度等方面进行分析,利用猪细小病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法对病毒滴度进行检测。结果表明:ST细胞覆盖率接近单层时接毒,采用分步法接毒,以103倍稀释病毒接种,接种病毒后感作2h,将接毒后细胞维持液中血清浓度设为2%这5个方面的接毒工艺可提高PPV细胞培养的病毒滴度。
- 刘崇灵刘晓波胡呈才吴海超李润成
- 关键词：猪细小病毒病毒增殖
- 生猪伪狂犬病毒gB抗体与中和抗体的相关性分析被引量：6
- 2015年
- 为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物统计学分析,gE抗体阴性血清的g B抗体平均S/P值和中和抗体效价(SN效价)倒数平均值的相关系数为0.926,说明g B免疫抗体S/P值与其中和抗体效价有很好的相关性。中和抗体水平的高低一般与免疫保护力呈正相关,研究结果表明gB–ELISA抗体水平可以用来评估生猪对当前流行PRV毒株的相对免疫保护力。
- 杨涛涛刘崇灵刘晓波赵墩余兴龙
- 关键词：伪狂犬病毒中和抗体酶联免疫吸附测定
- 长沙9个犬细小病毒毒株的分离与鉴定被引量：5
- 2012年
- 从感染犬细小病毒(CPV)的长沙病犬粪便中分离CPV,采用同步接毒方式,将病毒悬液接种到猫肾细胞(F81),经PCR鉴定,从10份阳性样品中分离到9株CPV,血凝试验显示9株CPV均能凝集猪红细胞,血凝价均超过了27。为进一步分析CPV长沙毒株的VP2分子生物学特征及抗原变异规律,对9个CPV毒株的VP2基因进行克隆、测序及序列分析,结果表明:CPV长沙毒株与全国及世界各地CPV毒株相比,其VP2基因序列同源性超过97%,其VP2基因推导的氨基酸序列同源性超过94%;其VP2基因推导的氨基酸序列有独特的变异,且有独特变异的毒株在基因进化树上处于同一个分支。
- 肖博仁罗维刘崇灵李润成余兴龙
- 关键词：犬细小病毒
- 湖南省4株伪狂犬病病毒的分离鉴定及其免疫与毒力相关基因的序列分析被引量：13
- 2016年
- 为了解湖南省近年来伪狂犬病病毒（PRV）的分子流行病学情况,更好地控制伪狂犬病,2012—2014年从湖南平江、汨罗、浏阳、长沙4地的4个规模化猪场送检的病料（脑组织）中检测到PRV野毒。将脑组织接种PK-15细胞,经PCR和动物接种鉴定为PRV。4个毒株分别命名为PRV-XiangA、PRV-GA、PRV-YY和PRV-LY。对这4株PRV的免疫（gB、gG、gH、gI、gL、gM）与毒力（gE、PK、TK）相关基因进行序列分析,结果显示这4株PRV的免疫与毒力相关基因核苷酸同源性为99.8%~100.0%,说明分离得到的4株PRV变异极小;将这4株PRV与国内外的主要毒株进行序列比对,结果表明这4株PRV与国内的分离毒株同源性很高,与BJ-YT株和TJ株的亲缘关系最近,核苷酸同源性为99.8%~100.0%,说明当前国内流行的PRV毒株变异较小。
- 杨涛涛赵墩刘崇灵屈泰龙余兴龙
- 关键词：伪狂犬病病毒同源性
- 猪多杀性巴氏杆菌PlpP基因的原核表达及其免疫保护性的研究被引量：6
- 2015年
- 为研究猪多杀性巴氏杆菌PlpP基因的免疫保护性,根据GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌全基因组中的PlpP基因序列,对目的基因进行PCR扩增,并将PCR片段克隆至载体pET-28a(+)中,再将重组表达质粒pETPlpP转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导。序列分析表明,得到了1条大小为945bp的基因片段,与预期大小相符。SDS-PAGE检测结果证实,该基因可以在BL21(DE3)中表达,表达产物为分子质量约45ku的融合蛋白。将纯化的重组蛋白pETPlpP制备成亚单位疫苗,并经皮下途径免疫小鼠,二免后第2周均以5LD50的A、B和D这3种荚膜抗原血清型的多杀性巴氏杆菌分别对小鼠进行攻毒,结果显示,A、B和D这3种血清型的保护率分别是16.67%、33.33%和66.67%。上述结果说明PlpP蛋白具有一定的免疫保护性。
- 郝杰赵墩刘崇灵黄婕峰余兴龙
- 关键词：多杀性巴氏杆菌原核表达
- 育肥猪血清中猪细小病毒16WS株的分离与鉴定被引量：2
- 2014年
- 从一育肥猪早、中期生产状况差的猪场收集猪血清214份,采用猪细小病毒（PPV）特异性检测引物进行PCR检测,选取1份阳性血清接种猪睾丸细胞（ST）进行PPV分离、部分生物学特性研究,以及PPV部分基因序列分析。结果表明：在15、16、17、18、22周龄猪血清中均检测到PPV,检测阳性率分别为10%、40%、20%、15.4%、9%,而从2~14及24周龄的猪血清中没有检测到PPV;病毒分离和部分生物学特性研究结果表明,从血清中分离的PPV在ST细胞上传到第5代能够出现较稳定的细胞病变（CPE）,病毒血凝效价为28;PPV部分基因序列与GenBank收录的PPV毒株序列同源性在98%以上,其中与2012年西北农林科技大学时乐[1]分离的YL毒株同源性高达99.1%。以上结果证实本研究分离到PPV,且说明PPV在采样猪场的保育后期和育肥前、中期猪血清中具有较高的阳性率。
- 吴海超胡呈才刘崇灵李润成余兴龙
- 关键词：育肥猪猪细小病毒
- 某规模猪场猪伪狂犬病的诊断被引量：1
- 2013年
- 本文针对一规模猪场哺乳仔猪发病死亡情况,根据该场发病仔猪的临床表现、解剖病变,结合PCR诊断、家兔接种实验以及病毒分离,诊断为伪狂犬病毒野毒感染,最后对该猪场发病的原因以及防控对策进行了讨论分析。
- 汤起武蒋大良刘崇灵王淑琴李润成余兴龙
- 关键词：猪伪狂犬病PCR动物接种试验病毒分离
