赵墩
- 作品数：19 被引量：56H指数：5
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪圆环病毒3型抗体ELISA检测方法建立及其应用
- 2021年
- 本研究将猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白截去核定位序列(NLS)后对应的dCap基因克隆至pET28a(+)并转入大肠杆菌BL21(DE3),得到重组菌后进行蛋白表达。采用镍离子亲和层析纯化dCap蛋白。将纯化的dCap蛋白作为抗原进行包被,建立检测PCV3抗体的间接ELISA方法,并对湖南省1175份临床血清进行检测。结果显示:dCap蛋白主要以包涵体形式表达,当以pH为10.83的碳酸盐缓冲液将纯化的dCap蛋白稀释到0.2μg/mL并进行包被,且血清50倍稀释,酶标二抗1∶8000稀释时,ELISA的反应条件最佳,确定S/P临界值为0.270,批内及批间差异均小于10%,本方法与PCV2、CSFV、PRV和PRRSV阳性血清无交叉反应。对湖南省11个地级市的29个猪场的血清流行病学调查结果表明:PCV3抗体猪场阳性率为100%(29/29),样品总阳性率为58.64%(689/1175),但阳性样品主要集中在肥猪和母猪,且阳性率在肥猪阶段明显上升,说明猪群感染PCV3主要是在育肥阶段。
- 谢怡灵李润成赵墩杜丽飞熊梦霞宁柯铭李双寅黎满香黎满香
- 关键词：CAP蛋白间接ELISA
- 生猪伪狂犬病毒gB抗体与中和抗体的相关性分析被引量：6
- 2015年
- 为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物统计学分析,gE抗体阴性血清的g B抗体平均S/P值和中和抗体效价(SN效价)倒数平均值的相关系数为0.926,说明g B免疫抗体S/P值与其中和抗体效价有很好的相关性。中和抗体水平的高低一般与免疫保护力呈正相关,研究结果表明gB–ELISA抗体水平可以用来评估生猪对当前流行PRV毒株的相对免疫保护力。
- 杨涛涛刘崇灵刘晓波赵墩余兴龙
- 关键词：伪狂犬病毒中和抗体酶联免疫吸附测定
- 猪瘟病毒NS5A多克隆抗体的制备及鉴定
- 本实验采用原核表达方式表达CSFV NS5A重组蛋白(rp-NSSA)，以纯化获取的rp—NS5A免疫小鼠制备多克隆抗体。采用PCR方法从携带猪瘟病毒兔化弱毒(Hog CholeraLapinized Virus HCL...
- 蒋大良胡云霏王淑琴屈泰龙赵墩钱幸田世成喻凯余兴龙
- 关键词：猪瘟病毒基因克隆原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 鹅出血性多瘤病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立
- 2022年
- 为了建立一种能快速、灵敏且准确检测鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)的诊断方法,将GHPV的VP1基因构建到载体pClone007 Blunt Simple Vector上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,以建立GHPV VP1基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性和在临床检测中的应用进行验证。结果显示,所建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的标准曲线呈良好的线性关系,其线性相关系数R^(2)=0.975,其扩增效率E=86.731%,熔解曲线呈现单峰;检测鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅副黏病毒、鸭坦布苏病毒、鹅星状病毒时呈阴性,具有较好的特异性;最低检出浓度为(1.16×10^(1)copies/μL),比普通PCR方法灵敏100倍;其中组内变异系数在0.10%~1.48%之间,组间变异系数在1.07%~2.24%之间,具有较好的重复性和稳定性;对20份临床组织样品检测结果进行分析发现,与普通PCR检测结果相比阳性率高出20%,其中阳性符合率为100%,总符合率为80%。上述结果表明,本研究建立的检测GHPV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,对GHPV的快速诊断和监测具有重要意义。
- 罗灵芝杨鹏江丁彦彬勾明郗赵墩余兴龙杨磊
- 关键词：荧光定量PCR
- 湖南省4株伪狂犬病病毒的分离鉴定及其免疫与毒力相关基因的序列分析被引量：13
- 2016年
- 为了解湖南省近年来伪狂犬病病毒（PRV）的分子流行病学情况,更好地控制伪狂犬病,2012—2014年从湖南平江、汨罗、浏阳、长沙4地的4个规模化猪场送检的病料（脑组织）中检测到PRV野毒。将脑组织接种PK-15细胞,经PCR和动物接种鉴定为PRV。4个毒株分别命名为PRV-XiangA、PRV-GA、PRV-YY和PRV-LY。对这4株PRV的免疫（gB、gG、gH、gI、gL、gM）与毒力（gE、PK、TK）相关基因进行序列分析,结果显示这4株PRV的免疫与毒力相关基因核苷酸同源性为99.8%~100.0%,说明分离得到的4株PRV变异极小;将这4株PRV与国内外的主要毒株进行序列比对,结果表明这4株PRV与国内的分离毒株同源性很高,与BJ-YT株和TJ株的亲缘关系最近,核苷酸同源性为99.8%~100.0%,说明当前国内流行的PRV毒株变异较小。
- 杨涛涛赵墩刘崇灵屈泰龙余兴龙
- 关键词：伪狂犬病病毒同源性
- 一起引起母猪流产死亡猪丹毒疫情的诊断被引量：3
- 2018年
- 2017年9月,湖南省郴州市某猪场的怀孕母猪突然发生流产、死亡。为确诊病因,对该猪场病死猪脏器进行了细菌分离和PCR检测,结合临床症状最终确诊病原为猪丹毒丝菌。为了解整个猪场猪群的感染情况,随机抽取流产母猪和同栏舍健康母猪进行猪丹毒丝菌IgG抗体ELISA检测,发现流产母猪阳性率为90%,远高于同栏舍健康母猪(10%)。本次疫情共导致该猪场104头母猪死亡和94头母猪流产。本案例表明,猪丹毒不仅可以引起母猪死亡,也可引起母猪流产,应引起养殖场高度重视,建议把猪丹毒列入免疫计划。
- 刘洋胡辉灿姚清赵墩余兴龙
- 关键词：母猪流产IGGELISA
- 猪圆环病毒2型基因1群B亚簇的体外培养特征被引量：1
- 2013年
- 为探寻猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中的复制特征,将PCV2基因1群B亚簇(PCV2–1B)病毒感染PK15均质细胞A10,待感染细胞层长满,对其进行连续传代;对第5、6代细胞进行维持培养,即在细胞长满后隔天更换培养基,以维持细胞良好的生长;用第10代带毒细胞的培养液接种A10细胞,并进行换液维持培养。PCR与定量PCR检测结果表明,PCV2–1B病毒感染A10细胞后,其病毒基因组的含量在感染细胞长满之前(约96 h)随着细胞的增多而上升,同时也随着传代次数的增多而上升;换液维持培养的细胞,在维持10 d后PCV2–1B病毒基因组的含量能维持在107～108拷贝/mL,而第10代带毒细胞的培养液接毒A10之后,病毒基因组含量随细胞增多而上升,在达到约108拷贝/mL后,病毒基因组含量维持在107～108拷贝/mL。
- 罗维赵墩吴海超蒋大良余兴龙
- 关键词：猪圆环病毒2型PK15细胞毒株
- 一株猪丹毒杆菌的分离鉴定及其致病性实验被引量：6
- 2015年
- 从湖南邵阳某猪场的急性发病育肥猪体内分离到一株革兰氏阳性小杆菌,通过对其形态特征、PCR检测、生化反应、动物回归等试验,确定其为猪丹毒杆菌.通过对小鼠和猪的攻毒试验表明：该菌对ICR小鼠的LD50为1.75CFU,11×10^7CFU能使8～10周龄的阴性猪致死,且攻毒死亡猪呈典型的猪丹毒临床症状.说明所分离到的猪丹毒杆菌对小鼠和猪致病性极高,为强毒株.
- 赵墩魏榕刘晓波胡玉立吴海超屈泰龙李润成余兴龙
- 关键词：猪丹毒杆菌小鼠
- 转移因子对猪丹毒杆菌SpaA抗原免疫效果的影响被引量：1
- 2019年
- 为了探寻转移因子(Transfer factor,TF)对猪丹毒杆菌SpaA(Surface protective antigen A)蛋白抗原免疫效果的影响,将重组SpaA蛋白与双相佐剂乳化后(称SpaA抗原)免疫小鼠,取免疫小鼠和未免疫小鼠脾脏,以超滤法分别制备特异性TF和普通TF,并利用BCA法测定所得TF的质量分数,经过无菌及安全性检测后,将2种TF分别腹腔接种至小鼠体内,24 h后,对2组TF处理后的小鼠均免疫SpaA抗原,并以未接种TF的免疫小鼠作为对照(仅免疫组)。分别于免疫后12 d、21 d和30 d对小鼠进行采血,用间接ELISA法对小鼠血清进行抗体检测。结果表明,利用原核表达系统表达的重组SpaA蛋白分子质量60 ku且具有可溶性;以超滤法制备的特异性TF质量浓度为2.56 mg/mL,普通TF质量浓度为2.40 mg/mL,且2种TF安全无毒;抗体检测数据显示,2种TF处理组在免疫后21、30 d的抗体水平均高于仅免疫组,且差异显著,而2种TF处理组之间抗体水平差异不显著。因此,TF能诱导SpaA抗原快速产生抗体,提高SpaA抗原的免疫效果,但与TF的特异性关系不大,表明TF可作为猪丹毒杆菌基因工程亚单位疫苗的免疫增效剂,提高免疫动物的抗体水平。
- 胡辉灿刘洋姚清赵墩余兴龙
- 关键词：特异性猪丹毒杆菌抗体水平
- 适合猪圆环病毒2生长的PK15均质细胞株的构建被引量：5
- 2013年
- 为筛选出PCV2培养滴度最高的PK15细胞克隆株,采用稀释法从PK15混合细胞中分离单细胞克隆株,获得的细胞克隆用于接毒试验,即用同步接种法将猪圆环病毒2(PCV2)病毒细胞混合液以1∶100的比例接种单克隆细胞,接毒后经PCR与定量PCR检测得出A10细胞克隆培养PCV2,获得的病毒含量最高。将A10细胞进行第2轮细胞克隆,之后用同步接种法和异步接种法将PCV2感染A10细胞,并检测A10细胞接毒后的PCV2 DNA含量,2种接毒方法获得的最高PCV2基因组的拷贝数分别为3.0×109、6.2×109/mL,高于用PK15混合细胞培养PCV2所获得的最高PCV2基因组拷贝数(107/mL)。综合以上结果,构建的PK15均质细胞克隆株比PK15混合细胞更适合PCV2的培养。
- 罗维赵墩蒋大良余兴龙
- 关键词：PK15细胞细胞克隆定量PCR
