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猪细小病毒7型PCR检测方法的建立及应用被引量：8: 2018年; 为评估猪细小病毒7型（porcine parvovirus 7,PPV7）在猪群中的流行,根据Gen Bank中PPV7全基因组序列设计1对扩增PPV7 NS1基因的特异性引物,并建立PCR方法。对该引物的退火温度进行优化,且分析其特异性和敏感性。结果显示,在52-72℃退火温度范围内该对引物均能特异性扩增出目的基因片段,最低检测限为3.6×10 2copies/L。对不同来源的282份组织样品和来自湖南省4个不同猪场的226份血清样品进行检测,结果,组织样品中PPV7检出率为55.0%（155/282）,血清中PPV7检出率为10.2%（23/226）。其中,屠宰猪组织样品中PPV7检出率最高（71.4%）,而PPV7感染对猪的健康是否存在影响还不能确定。本研究结果为PPV7流行病学的研究奠定了一定的基础。; 严美君杨涛涛李润成屈泰龙葛猛余兴龙; 关键词：聚合酶链式反应

生猪伪狂犬病毒gB抗体与中和抗体的相关性分析被引量：7: 2015年; 为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物统计学分析,gE抗体阴性血清的g B抗体平均S/P值和中和抗体效价(SN效价)倒数平均值的相关系数为0.926,说明g B免疫抗体S/P值与其中和抗体效价有很好的相关性。中和抗体水平的高低一般与免疫保护力呈正相关,研究结果表明gB–ELISA抗体水平可以用来评估生猪对当前流行PRV毒株的相对免疫保护力。; 杨涛涛刘崇灵刘晓波赵墩余兴龙; 关键词：伪狂犬病毒中和抗体酶联免疫吸附测定

湖南省4株伪狂犬病病毒的分离鉴定及其免疫与毒力相关基因的序列分析被引量：14: 2016年; 为了解湖南省近年来伪狂犬病病毒（PRV）的分子流行病学情况,更好地控制伪狂犬病,2012—2014年从湖南平江、汨罗、浏阳、长沙4地的4个规模化猪场送检的病料（脑组织）中检测到PRV野毒。将脑组织接种PK-15细胞,经PCR和动物接种鉴定为PRV。4个毒株分别命名为PRV-XiangA、PRV-GA、PRV-YY和PRV-LY。对这4株PRV的免疫（gB、gG、gH、gI、gL、gM）与毒力（gE、PK、TK）相关基因进行序列分析,结果显示这4株PRV的免疫与毒力相关基因核苷酸同源性为99.8%~100.0%,说明分离得到的4株PRV变异极小;将这4株PRV与国内外的主要毒株进行序列比对,结果表明这4株PRV与国内的分离毒株同源性很高,与BJ-YT株和TJ株的亲缘关系最近,核苷酸同源性为99.8%~100.0%,说明当前国内流行的PRV毒株变异较小。; 杨涛涛赵墩刘崇灵屈泰龙余兴龙; 关键词：伪狂犬病病毒同源性

BHK-21单细胞克隆敏感株筛选及日本脑炎病毒分离被引量：1: 2017年; 为筛选出日本脑炎病毒(JEV)敏感度高的BHK-21细胞株,采用终点稀释法从母代BHK-21混合细胞中分离单细胞克隆株,应用接种BHK-21克隆株方法,从JEV阳性蚊子样品研磨液中分离病毒,筛选出的3号单细胞克隆株经3次传代后细胞产生明显病变,分离到1株JEV,5号单克隆株培养物核酸检测呈阳性,但是不产生细胞病变,母代混合细胞没有病变,JEV核酸检测阴性。根据1、3型JEV的prM与E基因设计4对引物初步鉴定分离株基因型,鉴定分离株为1型JEV。综合以上结果,构建的BHK-21单细胞克隆株比BHK-21混合细胞对分离JEV株敏感,更适合JEV的分离与培养。; 向卫军杨涛涛李润成余兴龙; 关键词：病毒分离鉴定

湖南地区Ⅰ型乙型脑炎病毒的分离鉴定及E基因序列分析被引量：1: 2017年; 为探寻湖南汨罗地区猪场蚊子携带乙型脑炎病毒(JEV)的情况,对该地区3个猪场蚊子开展JEV的病原学调查研究。从该地区3个种猪场采集约3 900只蚊子,用RT–PCR方法扩增JEV NS5基因,结果从40份样品中检出17份样品呈阳性。将阳性样品研磨液接种BHK–21细胞分离病毒,经3次传代后获得了1株JEV,将新分离株命名为HNML1株。根据JEV的E基因序列设计1对引物,用RT–PCR方法扩增HNML1株的E基因,并进行序列测定和同源性分析,结果表明,该E基因的核苷酸序列与减毒活疫苗株SA14–14–2相应序列的同源性为86.9%;该E基因的氨基酸序列与减毒活疫苗株SA14–14–2相应序列的同源性为97.0%,二者存在15个氨基酸的差异(其中包括8个与关键毒力相关的氨基酸)。基因同源性分析结果表明,HNML1株为基因Ⅰ型JEV毒株。; 向卫军杨涛涛李润成余兴龙; 关键词：猪场蚊子乙型脑炎病毒

生猪乙型脑炎抗体消长规律及蚊子携带乙脑病毒调查被引量：2: 2017年; 为探寻猪场仔猪乙型脑炎抗体消长与蚊子携带乙型脑炎病毒的之间的关系,4月份选取一批约15日龄仔猪共24头,每隔20 d采血1次,至7月共采血6次,用间接ELISA方法检测血清乙型脑炎抗体,且不同时间在跟踪猪舍共捕获约3720只蚊子,用RT-PCR方法鉴定乙型脑炎病毒核酸;结果表明,该批猪乙型脑炎抗体阳性率总体呈现先下降后升高规律,阳性率先后为83.3%、66.7%、41.6%、25%、50%、91.6%,生猪体内母源抗体水平在75日龄(6月20日)达到最低,阳性率降至25%,然后呈现明显的上升趋势,115日龄(7月30日)检测阳性率高达91.6%;37份蚊子样品,JEV核酸阳性样品16份,阳性率高达43.2%,其中7月份所采集14份蚊子样品检出7份,乙型脑类病毒(JEV)阳性检出率最高达50%,表明在乙型脑炎流行季节,受蚊子携带病毒及其叮咬影响,当仔猪JEV抗体下降最低时JEV易感,后期感染抗体升高。; 向卫军杨涛涛刘浩罗季伟余兴龙; 关键词：乙型脑炎病毒蚊子

猪萨佩罗病毒间接免疫荧光方法的建立与初步应用被引量：3: 2017年; 以分离的猪萨佩罗病毒PSV Hu N1/2016株感染PK15细胞,制备抗原板,建立检测猪血清中PSV抗体的间接免疫荧光(IFA)方法。结果表明:一抗最佳稀释浓度为1∶300;FITC标记的羊抗猪荧光二抗最佳稀释浓度为1∶300。该方法特异性强,敏感度高,既能将PSV抗体与PRRSV、FMDV、PCV、CSFV抗体区分开,也可以检测到中和效价0.128的阳性血清。用该方法检测湖南省部分规模化猪场208份临床血清样品的总阳性率为68%,表明PSV在湖南省流行普遍,且其感染主要发生在保育阶段。; 彭旺唐小明葛猛杨涛涛屈泰龙余兴龙; 关键词：间接免疫荧光抗体检测

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杨涛涛