陈秀琴
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：青岛大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国疾病预防控制中心青年科研基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株的构建及鉴定被引量：2
- 2014年
- 为深入研究smp基因的功能,需构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株。首先,PCR扩增D2株smp基因上游、下游片段作为上下游同源臂,同时扩增获得氯霉素抗性(cat)基因,采用SOE-PCR方法将各片段连接,然后双酶切后克隆入自杀质粒pEX18Tc,构建获得重组自杀质粒pEX18Tc-Δsmp/cat,并转化入大肠埃希菌SM10λpir。通过接合将重组自杀质粒转入嗜麦芽寡养单胞菌D2野生株,经同源重组以cat基因替换野生株的smp基因,链霉素和氯霉素双抗培养基筛选接合子,15%蔗糖选择培养基筛选smp基因缺失株。PCR、酶切和测序验证重组自杀质粒pEX18Tc-Δsmp/cat构建正确,缺失株的分泌蛋白经12%SDS-PAGE证实嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株失去表达SMP蛋白的能力。结果显示成功获得smp基因缺失的嗜麦芽寡养单胞菌D2株,为进一步研究其功能和胞外分泌途径奠定基础。
- 秦江楠毕春霞陈秀琴罗玮张卫任莹王斌闫志勇
- 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌同源重组基因敲除
- 调控子fur影响霍乱弧菌生物膜的形成(英文)被引量：2
- 2013年
- 目的:铁摄取调节蛋白Fur,其在细菌体内维持铁代谢稳态中担任着抑制剂和激活剂的双重角色,已有研究证实Fur还是霍乱弧菌的毒力调控子。研究证实生物膜的形成和游动性与霍乱弧菌的毒力相关,因此我们通过一系列表型实验分析Fur蛋白对霍乱弧菌生物膜形成影响,并预测依赖Fur与霍乱弧菌致病相关的基因,为后续研究做准备。方法:基于自杀质粒缺失霍乱弧菌的Fur基因,并构建相应回补株及蛋白表达株;通过表型实验,比较霍乱弧菌野生株和fur突变株在细菌运动能力、生物膜形成。结果:成功构建霍乱弧菌fur缺失株,回补株和蛋白表达株,His-Fur蛋白在上清液表达。表型实验表明fur突变株的菌株游动性降低,生物膜形成能力增强。结论:因此我们得出Fur可能与其它调控子一起,调控霍乱弧菌的表多糖,TCP和鞭毛蛋白的合成,从而抑制霍乱弧菌生物膜的合成。转录调控子Fur直接或间接调控一些与环境生存和致病相关的基因,对霍乱弧菌的传播、侵染、定殖等过程发挥作用奠定了基础。
- 陈秀琴蔡红艳张卫闫梅英高鹤段国贤闫志勇
- 关键词：霍乱弧菌FUR生物膜形成
- Hfq对霍乱弧菌环境适应能力的影响及相关基因的转录调控被引量：2
- 2013年
- 目的通过表型实验分析Hfq蛋白对霍乱弧菌环境适应能力的影响，并通过分子实验验证Hfq对环境生存及致病相关基因转录的调控。方法基于自杀质粒缺失霍乱弧菌的hfq基因，并构建相应回补株；通过表型实验，比较霍乱弧菌野生株和hfq突变株在细菌运动能力、生物膜形成、外膜抗性和氧化应激能力上的差异；应用逆转录荧光定量PCR（RT-qPCR）技术对Hfq可能调控的相关基因的转录水平进行比较。结果成功构建霍乱弧菌hfq缺失株及回补株，表型实验表明hfq突变株的菌株游动性降低，生物膜形成能力增强，对十二烷基磺酸钠（SDS）和庆大霉素的耐受性显著下降，并且与野生株相比，hfq突变株对H2O2刺激更为敏感。RT-qPCR实验证明Hfq对霍乱弧菌鞭毛合成、胞外多糖合成、外膜蛋白以及氧化应激相关基因的转录有调控作用。结论Hfq蛋白作为RNA伴侣分子，能够通过调控一些生存及致病相关基因的转录进而影响霍乱弧菌的生物膜形成、氧化应激反应、抗生素抗性等能力，表明Hfq可能与其他调控子一起，在霍乱弧菌的生存、代谢以及致病因子转录的协调控制上起关键作用。
- 陈秀琴闫志勇李杰王瑞白闫梅英阚飙高鹤
- 关键词：霍乱弧菌HFQ环境适应转录调控
- Hfq对霍乱弧菌环境适应能力的影响及相关基因的转录调控
- 目的：构建霍乱弧菌C7258菌株的hfq基因的缺失株和缺失回补株，分析Hfq蛋白对霍乱弧菌环境适应能力的影响，验证Hfq对环境生存及致病相关基因转录的调控。
方法：1.PCR方法扩增霍乱弧菌C7258菌株hfq基因...
- 陈秀琴
- 关键词：霍乱弧菌同源重组环境适应能力转录调控
- 文献传递
