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嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株的构建及鉴定被引量：2: 2014年; 为深入研究smp基因的功能,需构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株。首先,PCR扩增D2株smp基因上游、下游片段作为上下游同源臂,同时扩增获得氯霉素抗性(cat)基因,采用SOE-PCR方法将各片段连接,然后双酶切后克隆入自杀质粒pEX18Tc,构建获得重组自杀质粒pEX18Tc-Δsmp/cat,并转化入大肠埃希菌SM10λpir。通过接合将重组自杀质粒转入嗜麦芽寡养单胞菌D2野生株,经同源重组以cat基因替换野生株的smp基因,链霉素和氯霉素双抗培养基筛选接合子,15%蔗糖选择培养基筛选smp基因缺失株。PCR、酶切和测序验证重组自杀质粒pEX18Tc-Δsmp/cat构建正确,缺失株的分泌蛋白经12%SDS-PAGE证实嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株失去表达SMP蛋白的能力。结果显示成功获得smp基因缺失的嗜麦芽寡养单胞菌D2株,为进一步研究其功能和胞外分泌途径奠定基础。; 秦江楠毕春霞陈秀琴罗玮张卫任莹王斌闫志勇; 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌同源重组基因敲除

调控子fur影响霍乱弧菌生物膜的形成(英文)被引量：2: 2013年; 目的:铁摄取调节蛋白Fur,其在细菌体内维持铁代谢稳态中担任着抑制剂和激活剂的双重角色,已有研究证实Fur还是霍乱弧菌的毒力调控子。研究证实生物膜的形成和游动性与霍乱弧菌的毒力相关,因此我们通过一系列表型实验分析Fur蛋白对霍乱弧菌生物膜形成影响,并预测依赖Fur与霍乱弧菌致病相关的基因,为后续研究做准备。方法:基于自杀质粒缺失霍乱弧菌的Fur基因,并构建相应回补株及蛋白表达株;通过表型实验,比较霍乱弧菌野生株和fur突变株在细菌运动能力、生物膜形成。结果:成功构建霍乱弧菌fur缺失株,回补株和蛋白表达株,His-Fur蛋白在上清液表达。表型实验表明fur突变株的菌株游动性降低,生物膜形成能力增强。结论:因此我们得出Fur可能与其它调控子一起,调控霍乱弧菌的表多糖,TCP和鞭毛蛋白的合成,从而抑制霍乱弧菌生物膜的合成。转录调控子Fur直接或间接调控一些与环境生存和致病相关的基因,对霍乱弧菌的传播、侵染、定殖等过程发挥作用奠定了基础。; 陈秀琴蔡红艳张卫闫梅英高鹤段国贤闫志勇; 关键词：霍乱弧菌 FUR 生物膜形成

嗜麦芽寡养单胞菌D2株2套Ⅱ型分泌系统的全基因簇序列测定及分析被引量：1: 2013年; 嗜麦芽寡养单胞菌D2株经前期研究发现有2套Ⅱ型分泌系统（T2SS），根据嗜麦芽寡养单胞菌K279a、R551—3、JV3、D457的T2SS基因簇序列，以及D2株的部分测序结果设计引物，采用基因移步法逐一扩增2套T2SS基因序列，产物连接至T载体，经酶切鉴定后测序、拼接。发现有22个完整的开放多码框架（ORF），比对分析后发现T2SSl的基因簇与同种属细菌相应基因簇序列同源性均在80％以上，对应氨基酸序列同源性均能达到97％以上，而T2SS2基因簇与K279a、R551—3对应基因序列和氨基酸序列的同源性均不及T2SS1高。2套T2SS的GspE、F、I基因同源性在50％以上，其他对应基因同源性在35％～68％之间不等，氨基酸序列同源性则为15％～61％。2套他ss与铜绿假单胞菌PA01的同源性高于不同科的小肠结肠炎耶尔森菌。T2SS的序列测定及同源性分析为进一步研究细菌蛋白分泌机制奠定基础。; 张卫毕春霞罗玮秦江楠陈豪王斌闫志勇; 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌同源性

嗜麦芽寡养单胞菌D2株第2套Ⅱ型分泌系统全基因簇序列测定分析及其E基因部分敲除: 目的本实验室自2003年从沙蚕消化道分离出一株嗜麦芽寡养单胞菌D2株，研究发现该菌可胞外大量分泌有碱性磷酸酶活性的D2蛋白。根据已测定出的部分基因组序列，发现编码D2蛋白的基因与Ⅱ型蛋白分泌系统基因成簇排列，故推测嗜麦芽...; 张卫; 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌基因敲除; 文献传递

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张卫