张立树 作品数:73 被引量:138 H指数:6 供职机构: 军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家杰出青年科学基金 吉林省科技发展计划基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 理学 更多>>
抗HIV-1 gp41单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控表达及活性检测 被引量:1 2004年 目的 获得抗HIV 1gp4 1单链抗体与葡萄球菌外毒素A融合表达的重组导向毒素蛋白。方法 人工合成能广泛识别HIV 1gp4 1的单链抗体 (ScFv4 1)基因和金黄色葡萄球菌外毒素A(SEA)基因 ,将SEA基因第 2 2 7位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT ,并对两基因进行密码子优化。以大肠杆菌温控型表达质粒pBV2 2 0为载体 ,分别构建单表达ScFv4 1的质粒pBV 4 1和SEA与ScFv4 1融合表达的质粒pBV SL4 1,转化大肠杆菌感受态细胞 ,通过提高温度诱导表达 ,表达产物经分子筛层析折叠复性后 ,检测单链抗体结合活性及重组导向毒素介导的细胞毒淋巴细胞 (CTL)杀伤活性。结果 表达质粒pBV 4 1和pBV SL4 1分别在E .coliBL2 1(DE3)plys中 4 4℃诱导 6h、4 2℃诱导 7h得到较高表达 ,经SDS PAGE、薄层扫描分析表明 ,目的蛋白分别占菌体总蛋白的14 .35 9%和 2 3.4 82 % ,目的蛋白经复性后可与HIV 1抗原条发生良好的结合反应 ,并且SL4 1可激活外周血淋巴细胞 (PBMC)并介导其杀伤稳定表达HIV 1gp16 0蛋白的靶细胞。结论 成功得到ScFv4 1与SEA融合表达蛋白SL4 1,为研制抗HIV 1重组导向毒素奠定基础。 王宏 金宁一 徐一鸣 金洪涛 张立树 江文正关键词:活性检测 淋巴细胞 人工设计的HIV-1重组鸡痘病毒诱导恒河猴产生免疫应答的研究 2007年 将人工设计的HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒rFPV-MEGp24大量制备并纯化后,分别在0周、8周、18周肌肉注射至实验恒河猴中,在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞(PBMC),ELISA法检测血清HIV-1抗体和PBMC培养上清Th1类细胞因子的含量,MTT法测定PBMC的增殖能力,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测PBMC特异性CTL杀伤活性。结果表明:HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒可刺激恒河猴产生HIV-1特异性抗体;免疫猴的PBMC在HIV-1抗原肽刺激下细胞增殖能力加强,针对HIV-1靶细胞的特异性CTL杀伤活性产生,分泌Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2的水平升高。研究提示,HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒能诱导恒河猴产生特异性细胞和体液免疫应答。 张立树 金宁一 宋英 洪宝庆 马鹤雯 尚玉璞 王宏 孙岩松 金洪涛 战大伟 李昌关键词:人免疫缺陷病毒I型 重组鸡痘病毒 恒河猴 免疫应答 桔皮素乙酰酯对动物螨病的治疗及安全性试验 被引量:3 2002年 将桔皮素乙酰酯制成1%、2%的擦剂和0.1%的乳剂,间隔1周2次用药,进行了鼠、犬、兔、鹿螨病的治疗试验。结果发现:患病动物痒感减轻,消失,患部皮肤变软,增重迅速,镜检未见活螨。用5%的桔皮素乙酰酯浇泼剂,间隔1周3次用药治疗梅花鹿掉毛病,结果3~4d后皮肤开始变软,2周后长出新毛,2个月后无1头鹿再发病。用不同浓度的桔皮素乙酰酯浸泡小鼠1min,进行安全性试验,体积分数为0.1%时无任何异常反应;体积分数为1%时对眼睛有轻度刺激作用,个别小鼠出现轻度中毒症状;体积分数为4%时,小鼠出现中毒症状,5h后死亡1只,存活小鼠24h后恢复正常。试验证明:桔皮素乙酰酯对动物螨病具有良好的治疗作用,在治疗剂量范围内用药是安全可靠的。 张祚新 吴永魁 祁超 闫章年 张立树 蔡辉关键词:安全性试验 螨病 动物 疗效 苯噁唑与狄普诺啡合剂对眠乃宁麻醉大鼠催醒剂量的确定 被引量:1 2002年 以大鼠为试验动物 ,腹腔内注射二甲苯胺噻嗪与双氢埃托啡合剂 (xylazine +DHE)麻醉 3 0min时 ,再以腹腔内注射苯唑与狄普诺啡合剂 (Rx7810 94+M5 0 5 0 ) ,通过序贯法测定Rx7810 94+M5 0 5 0对xylazine +DHE麻醉大鼠的催醒半数有效量 (ED50 )值 ,根据ED50 值确定Rx7810 94+M5 0 5 0对大鼠的催醒剂量 ,以此剂量测定大鼠给药后的翻正反射恢复阳性率和痛阈。结果 ,Rx7810 94+M5 0 5 0对xylazine +DHE麻醉大鼠的催醒ED50 值为 9.93 5mg/kg ,催醒剂量为 15 .0 0 0mg/kg ,翻正反射恢复阳性率为 94.74% ;Rx7810 94+M5 0 5 0组在 5min与生理盐水组比较差异显著 (P <0 .0 5 ) ,10~ 60min与Rx7810 94、M5 0 5 0和生理盐水组有显著差异 (P <0 .0 5 )。 冯海华 阎章年 刘国文 吴永魁 张立树关键词:半数有效量 催醒 眠乃宁 合剂 人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)gag基因疫苗的免疫原性 被引量:1 2004年 目的 :检测人免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)gag基因疫苗的免疫原性。方法 :分别以ELISA、荧光抗体染色和乳酸脱氢酶释放法 ,检测免疫小鼠血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量和淋巴细胞杀伤效应。结果 :血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量及淋巴细胞杀伤效应 ,重组质粒pVAXGAG免疫组与空载体pVAX1对照组相比较差异显著(分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1)。结论 :HIV 1DNA疫苗质粒pVAXGAG在BALB/c小鼠中不仅可诱导特异性体液免疫 ,而且可诱导特异性细胞免疫。 江文正 金宁一 李子健 张立树关键词:人免疫缺陷病毒1型 GAG 核酸疫苗 免疫原性 蜘蛛牵引丝蛋白cDNA的扩增、克隆与序列分析 被引量:6 2002年 Spider dragline silk is synthesized in special gland named major ampulate (MA) gland. The MA glands were dissected from the abdomen of the spiders Nephila clavata and the total RNA was extracted by the TRIZOL. The cDNA of dragline silk was amplificated by RT-PCR (reverse transcription polymerase chain reaction), multiplex PCR and cloned. PCR identification, restriction analysis and DNA sequence analysis were carried out to verify the recombinant plasmids. The codon usage frequencies of the cloned cDNA were added up, and the predicted amino acid sequence was compared with Spidroin2 of Nephila clavipes. Predicted secondary structure of the predicted amino-acid sequence was analysized by DNAStar software. All results showed that the cloned cDNA we got (GenBank Accession No. AF441245) was the very fragment of spider dragline silk Spidroin2 cDNA. 张立树 马鹤雯 陆一鸣 张玉静关键词:CDNA 扩增 克隆 蜘蛛丝 人喉癌细胞端粒酶催化亚基cDNA片段的扩增与克隆 被引量:2 2001年 目的 :测定人喉鳞状上皮癌 hep- 2细胞的端粒酶活性水平并获得 hep- 2细胞中 h TERT c DNA片段的克隆。方法 :采用 TRAP- ELISA法测定酶活性水平 ,RT- PCR技术扩增获得目的片段。利用酶切法、PCR法和序列分析法对所获克隆进行检测。结果 :hep- 2细胞具有较高的端粒酶活性水平 ,获得含h TERT c DNA片段的克隆。结论 :利用 RT- PCR法能够从具有较高端粒酶活性水平的 hep- 2细胞中扩增获得 h TERT c 马鹤雯 张玉静 阮承迈 陈守义 张立树 马永红关键词:端粒酶 端粒酶催化亚基 喉癌 鳞状上皮癌 基因扩增 克隆 抗HIV-1 gp120单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控型表达载体构建及表达 被引量:2 2004年 人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因,将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT,并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—SL120,经条件优化,pBV—120和pBV—SL120分别在E.coli BL21(DE3)plys中44℃诱导6h、42℃诱导7h获得最佳表达,表达量分别占菌体总蛋白的27.673%和32.519%。目的蛋白经包涵体洗脱、分子筛层析折叠复性后可与HIV—1抗原条发生良好的结合反应。 王宏 金宁一 金洪涛 张立树 江文正 徐一鸣 连海关键词:GP120 原核 抗HIV-1 BV 密码子 表达载体构建 苯噁唑和狄普诺啡对大鼠血浆、垂体和下丘脑β-内啡肽含量的影响 被引量:1 2002年 采用放射免疫分析法测定在苯噁唑(Rx781094)+狄普诺啡(M5050)作用下,不同时间大鼠血浆、垂体和下丘脑中β-内啡肽(β-EP)的含量。结果显示:Rx781094+M5050可降低大鼠血浆、垂体和下丘脑β-EP含量,5min开始显著降低,10min时都降到最低点,分别是8.92ng/mL、131.43ng/mg和9.32ng/mg,60min时β-EP亦低于正常值,至120min时逐渐恢复正常。垂体β-EP含量在10min时与对照组比较有显著差异。提示:Rx781094+M5050能降低大鼠血浆、垂体、下丘脑中β-EP含量,可能是发挥催醒作用的机制之一。 冯海华 闫章年 刘国文 吴永魁 张立树 张祚新 张锦霞关键词:垂体 下丘脑 Β-内啡肽含量 兽药 NO在生物医学中的研究进展 被引量:12 2001年 吴永魁 张立树 朱平关键词:一氧化氮 生物化学 生理作用 毒理学