肖利军
- 作品数：8 被引量：17H指数：3
- 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>
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- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性分析
- 根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZBKM01000005,设计一对特异性引物,以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段.将其进行T-A克隆,构建pETD15质粒并进...
- 朱小宁余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军将大良
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白原核表达免疫原性
- 文献传递
- 鹌鹑和三黄鸡IFN-α cDNA的克隆及序列分析被引量：4
- 2008年
- 根据GenBank已登录的鸡和鹌鹑IFN-α基因序列,用Oligo6.0设计一对能同时扩增鸡和鹌鹑INF-α基因的共用引物,利用RT-PCR方法从经ConA诱导培养的三黄鸡、鹌鹑外周血淋巴细胞中分别扩增到IFN-α ORF全长cDNA,并克隆到pET-28a（＋）载体上。将测序结果分别与GenBank中已收录的家禽类IFN-α核苷酸序列进行同源性比较及遗传进化分析。结果发现鸡、鹌鹑IFN-α cDNA遗传进化稳定,与GenBank中收录的鸡、鹌鹑IFN-α核苷酸序列同源性为98.6%-99.8%、99.8%。鸡与其它家禽类的IFN-α核苷酸序列比较分析发现,与鹌鹑亲缘性较高,同源性达86.9%-87.1%,但与家水禽（鸭、鹅）差距较大,同源性最高也只有67.6%;鹌鹑IFN-α核苷酸序列与家水禽同源性在也只在62.7%-62.9%之间;基因遗传进化树分析可见家禽类IFN-α被分成两个大分枝,分别是由鸡和鹌鹑两个小分支组成的一个大分支与家水禽独立分支组成。
- 汪镇南苏丁丁刘为王亚肖利军李润成白霞余兴龙
- 关键词：鹌鹑IFN-Α基因克隆
- 副猪嗜血杆菌Neu基因的克隆表达及表达产物的免疫原性被引量：4
- 2010年
- 为研究副猪嗜血杆菌(HPS)基因工程疫苗,以HPS5型毒株为模板,通过PCR扩增获得副猪嗜血杆菌神经氨酸酶(Neu)全基因,将其克隆至pMD18-T载体并对其进行测定和分析。结果表明,Neu全基因含一个2187bp的开放阅读框,编码一含729个氨基酸的蛋白,与Neu基因参考序列(登录号:NZ-ABKM01000006)的同源性为99.0%。以pMD-Neu基因为模板,重新设计引物,扩增得到HPSNeu蛋白的部分编码区,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建得到重组原核表达质粒pET-Neu。将pET-Neu在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,经SDS-PAGE分析,重组蛋白Neu主要以包涵体形式表达,分子质量为52ku;Western-blot分析表明,重组蛋白Neu能与阳性血清发生特异性抗原反应。将纯化重组蛋白Neu试验性注射免疫昆明小鼠,攻毒试验结果显示,氢氧化铝佐剂组的保护性较低,仅有10%;而弗氏佐剂组具有较高的保护性,保护率高达60%。
- 刘俊琦余兴龙蒋大良朱小宁李润成肖利军刘春红罗维葛猛
- 关键词：副猪嗜血杆菌神经氨酸酶原核表达免疫原性
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的原核表达及其表达产物的免疫原性被引量：7
- 2010年
- 根据GenBank中登录的副猪嗜血杆菌(HPS)D15基因鸟枪序列(登录号:NZ_ABKM01000005)设计1对特异性引物,以HPS5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增了D15基因。将其进行T-A克隆,构建pMD18D15质粒并进行序列测定和分析。结果表明,D15基因含有一个2418bp的开放阅读框,编码805个氨基酸,与D15基因参考序列的同源性为99.9%。该HPSD15基因的推导氨基酸序列具有典型Omp85蛋白家族的拓扑结构特征。以pMD18D15质粒为模板,用PCR方法扩增HPSD15基因,并将其克隆到pET-28a(+)中,构建pETD15原核表达质粒,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG诱导重组菌,并用SDS-PAGE和Western-blot检测诱导物。结果表明,pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白的分子质量约为94ku,融合蛋白能被HPS阳性血清识别,提示该融合蛋白具有反应原性。昆明小鼠和豚鼠免疫试验结果表明,D15重组蛋白具有一定的诱导免疫保护反应的能力。
- 朱小宁余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军将大良
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白原核表达免疫原性
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒08HuN株基因组序列测定与分析
- 通过分段设计引物，应用RT-PCR方法分6段扩增出非高致病PRRSV08HuN变异株的全基因组，扩增后的产物分别克隆于pMD19-T Simple载体鉴定后测序，应用DNAStar软件按顺序将测序结果拼接得到该毒株全基因...
- 肖利军余兴龙肖博仁李润成杨兴东葛猛李杰
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组RT-PCR法
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒08HuN株全长cDNA克隆的构建
- 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状及死亡为主要特性的高...
- 肖利军
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组测序全长CDNA克隆
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5基因的表达及表达产物的免疫原性分析被引量：2
- 2010年
- 实验通过将副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白(Outer membrane protein,OMP)P5基因克隆至pET-28a(+)中,构建pET-OMP5原核表达质粒,再将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),通过IPTG诱导重组菌,SDS-PAGE显示pET-OMP5重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,Western-blot表明融合蛋白能被阳性血清识别。昆明小鼠试验结果表明OMP5重组蛋白具有一定的诱导免疫保护反应的能力。
- 刘俊琦余兴龙朱小宁蒋大良李润成肖利军刘春红
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白免疫原性
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性分析
- 根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZ_ABKM01000005，设计一对特异性引物，以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板，通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段。将其进行T-A克隆，构建pETD15质粒...
- 朱小宁将大良余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白免疫原性
- 文献传递
