张雪莲
- 作品数：51 被引量：76H指数：5
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌外排泵及其抑制剂的研究进展被引量：3
- 2010年
- 结核病自古以来就威胁着人类的健康，每年导致约200万人死亡。特别是近年来，耐多药结核病、广泛耐药结核病以及结核分枝杆菌与人免疫缺陷病毒（HIV）共感染的出现，给结核病的临床治疗带来了新的困难。耐多药结核病是耐受2种抗结核病一线药物的结核病，广泛耐药结核病是在耐多药的基础上至少耐受3种二线药物的结核病。
- 胡志东张雪莲王洪海
- 关键词：结核结核分枝杆菌抗药性耐药结核病外排泵外排泵抑制剂
- 结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶基因的克隆表达及酶学性质研究被引量：5
- 2005年
- 目的获得具有生物学活性的结核分枝杆菌重组异柠檬酸裂解酶蛋白。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增该菌株的异柠檬酸裂解酶基因ic l,克隆入原核表达载体pET-28 a(+)中,通过在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,获得以镍离子螯合型琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白,并对其酶学性质进行测定分析。结果纯化出具有生物学活性的重组结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶。酶学性质测定分析表明,重组异柠檬酸裂解酶ICL的比活力为7.657×102μmol.mg-1.m in-1,反应最适pH值约为7.4。重组蛋白经高效液相色谱及质谱鉴定,测得相对分子质量为50 603.347。在5 mmol/L Tris-C l缓冲液、pH值7.8、25℃条件下,重组ICL的二级结构中相对有43.8%的α螺旋、31.9%的β折叠、3.4%β转角、20.9%无规则卷曲。结论本研究成功克隆表达结核分枝杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因,酶学性质鉴定获得了具有生物学活性的重组蛋白,为该酶免疫学研究及新型抗结核药物的筛选奠定了基础。
- 郝方裴秀英张雪莲张顺宝赖煦卉王洪海
- 关键词：基因表达
- 耻垢分枝杆菌ClpC和ClpX敲低表达菌株的构建及表型分析
- 2021年
- 蛋白质平衡稳定对细菌的生长繁殖以及应对宿主免疫压力十分重要。Clp蛋白酶复合体在结核分枝杆菌的蛋白质降解和平衡稳定中发挥重要作用。Clp蛋白酶中负责识别底物蛋白并将其解折叠的蛋白质有两种:ClpC和ClpX。为初步探究分枝杆菌中ClpC和ClpX各自的功能特点,运用CRISPRi的方法成功构建了耻垢分枝杆菌的ClpC和ClpX诱导型敲低表达菌株,并对其生长相关表型进行分析。结果显示:与野生菌株相比,ClpC和ClpX的低表达均能严重影响耻垢分枝杆菌的生长。ClpC低表达可导致菌株丧失生物膜的形成能力,而ClpX低表达则导致菌株无法维持正常细胞形态,电镜显示细胞壁不完整且细胞呈丝状化,提示ClpC和ClpX可能在分枝杆菌中具有不同的生理功能。可为后期深入开展ClpC和ClpX对分枝杆菌生理调控功能研究及新型抗结核药物筛选提供基础。
- 白嘉诚迟明哲胡亚文郝梦张雪莲
- 关键词：耻垢分枝杆菌
- 结核分枝杆菌硫醇乙酰基转移酶基因敲除株的构建及其生物学特性分析被引量：1
- 2019年
- 为探索硫醇乙酰基转移酶(mycothiol acetyltransferase,MshD)在结核分枝杆菌中的生物学特性,本实验利用噬菌体为载体的同源重组技术,构建结核分枝杆菌mshD基因敲除株、mshD基因回补株,用实时定量聚合酶链反应(real time-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)对所构建的菌株进行验证。分别收集H37Ra野生株、mshD基因敲除株、mshD基因回补株对数生长期菌液各5 mL,离心收集菌体并培养,以观察菌落形态、生物膜形成及生长曲线测定;用5 mmol/L H 2O 2、0.05%SDS,50℃热激及低氧条件下分别处理基因敲出菌株和野生菌株,将菌液进行10倍梯度稀释,培养4~6周后检测抗胁迫能力并计算存活率。结果显示,与野生株H37Ra相比,mshD基因敲除株菌落褶皱减少且菌落偏小,生长趋势较为缓慢;生物膜形成所需时间增长且褶皱明显减少;抗逆能力下降,存活率略低于野生株和回补株。揭示了mshD基因对结核分枝杆菌的生长具有重要作用,为进一步揭示该基因的功能和作用机制奠定了基础。
- 葛文雪陈润白嘉诚狄玉昌张雪莲
- 关键词：结核分枝杆菌基因敲除
- 结核分支杆菌H_(37)Rv莽草酸脱氢酶基因的克隆、表达及酶学性质的研究被引量：3
- 2004年
- 以结核分支杆菌H3 7Rv基因组为模板 ,扩增了该菌株的莽草酸脱氢酶基因aroE ,通过在大肠杆菌BL2 1(DE3) pLYS中表达 ,纯化出可溶性的重组结核分支杆菌莽草酸脱氢酶 (SD) .对其酶学性质测定分析表明 :在辅酶NADPH作用下该酶可催化还原 3 脱氢莽草酸生成莽草酸 ,最适pH值为 11,最适温度为 6 3℃ ,比活性 8.2 6× 10 4U/mg .Mg2 + ,Ni2 + ,Zn2 + 等金属离子及NP4 0、TritonX 10 0等变性剂对其酶活有一定的促进作用 ,而SDS则强烈抑制该酶活性 .应用圆二色仪初步测定了重组蛋白的二级结构 ,重组SD的二级结构中大约有 2 9.2 %的α螺旋 ,9.3% β折叠 ,32 .7% β转角 ,2 8.8%无规卷曲 .结核分支杆菌H3 7Rv莽草酸脱氢酶基因的克隆 ,为该酶的晶体结构分析、免疫学研究及抗结核药物靶点的筛选奠定基础 .
- 于海东张雪莲王宝林雷建强曹健淳于利娟许云敏王洪海
- 中草药与新药发现及其推广探讨被引量：3
- 2005年
- 郝方闵彦张雪莲裴秀英
- 关键词：中草药药学知识产权
- 一种改良的分枝菌酸提取及其非放射性TLC检测方法被引量：1
- 2023年
- 分枝菌酸(mycolic acid,MA)是存在于分枝杆菌细胞壁中的独特长链脂肪酸,与分枝杆菌(mycobacterium)抵御不利环境、耐受抗生素和逃避宿主免疫密切相关,是较热门的抗结核药物筛选的靶点。MA的检测方法主要有放射性薄层层析(thin-layer chromatography,TLC)和液相色谱-质谱(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS),受放射性元素使用资质和标准品等的限制,MA分析是分枝杆菌相关研究的一个难点。本研究采用一种普通薄层层析技术,并对使用四丁基氢氧化铵溶液水解酯化的分枝菌酸,将其甲酯化后再用无水乙醚萃取分枝菌酸甲酯的操作步骤进行改良,使分枝杆菌的MA提取及分析可在常规生物实验室中开展。研究通过比较不同分枝杆菌及不同生长时期的MA成分与亚型特征、检测靶向分枝菌酸合成通路的抗结核药物对细菌MA合成影响以及分枝杆菌突变株对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)H37Ra分枝菌酸合成影响等基础和应用研究的3个方面,进一步验证该方法在分枝杆菌MA分析中的实用性。结果表明该方法在不使用放射性元素和缺少标准品情况下可简便快速地分析MA及亚型特征,可广泛用于新型抗分枝杆菌药物筛选靶向分枝菌酸合成通路机制及基础研究中MA相关的分析和应用。
- 徐思悦狄玉昌迟明哲胡酉炜张潇张雪莲
- 关键词：分枝杆菌分枝菌酸薄层层析
- 结核分枝杆菌生物膜形成相关基因的筛选与鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的:通过菌落表型变化并结合生物膜生长缺陷筛选并鉴定可能与生物膜形成相关基因。方法:利用带有Himar1转座子的MycoMarT7转座子系统建立结核分枝杆菌H37Ra随机插入突变库;筛选细菌表面结构发生变化和生物膜形成有变化的突变菌株;运用T-A克隆法并结合抗性标记挽救法获得突变菌株的随机插入基因侧翼序列从而鉴定突变基因,并运用生物信息学方法分析预测突变基因的功能。结果:通过菌落形态变化及生物膜缺陷表型筛选出39株突变株,成功鉴定其中16株突变株,涉及16个基因发生突变,其中5个与脂质代谢相关,4个与细胞壁合成相关、2个与中间代谢和呼吸作用相关、1个调节蛋白相关基因,1个毒力相关基因,1个PE/PPE家族基因,还有2个功能未知基因。结合生物膜形成缺陷分析,其中8个基因可能与H37Ra体外生物膜的形成相关。结论:成功构建库容量约为1×104结核分枝杆菌转座子随机插入突变文库,筛选获得生物膜生长受损突变株及可能与结核分枝杆菌生物膜形成相关的基因信息,为后续深入开展生物膜形成机制研究奠定基础。
- 刘霞郭庆龙王若珺王洪海裴秀英张雪莲
- 关键词：结核分枝杆菌菌落形态生物膜
- 乙酰化修饰调控结核杆菌异柠檬酸裂合酶的研究
- 2015年
- 目的:探索结核杆菌异柠檬酸裂合酶(ICL)蛋白322位点赖氨酸(Lys322)的乙酰化修饰对蛋白功能的调控作用。方法:构建结核杆菌ICL蛋白原核表达载体p ET28a-icl,并对Lys322位点进行定点突变为精氨酸(Arg,R)和谷氨酰胺(Glu,Q),体外表达纯化获得重组蛋白ICLWT、ICL322R和ICL322Q。通过Western blotting和酶活性测定来揭示Lys322位点突变前后对蛋白的乙酰化修饰水平及蛋白功能的影响。结果:Western blotting检测发现大肠杆菌表达体系获得的ICLWT、ICL322R和ICL322Q蛋白均有较高水平的蛋白赖氨酸乙酰化修饰信号,较ICLWT,ICL322R和ICL322Q突变蛋白的酶活性分别下降了大约50%和70%。结论:在大肠杆菌的表达体系中,ICL蛋白可以获得乙酰化修饰。ICL322Q突变蛋白酶活性的显著下降,揭示Lys322位点乙酰化修饰对ICL蛋白的功能存在负向调控。为未来深入探索赖氨酸乙酰化修饰对结核杆菌代谢,潜伏感染的调控作用奠定了基础。
- 李瑶瑶毕静王艺红秦云贺张雪莲
- 关键词：乙酰化修饰定点突变
- 抗结核一线药物及其主要作用靶点的突变被引量：10
- 2005年
- 张顺宝张雪莲郝方王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌一线药物
