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结核分支杆菌异柠檬酸酶的克隆表达及蛋白组学研究: 结核病是全球范围内死亡率最高的传染病,据估计,世界上已有三分之一的人口感染了结核分支杆菌。这些潜在的病菌携带者其一生中有2-23%的风险发生结核病,近年来,由于HIV的传播和流行,使得这些潜在的病菌携带者以每年10%的发...; 裴秀英郝方; 文献传递

重组结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶表达特性的研究: 2009年; 目的通过对所构建的重组结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶表达特性的研究,获取最佳可溶性表达。方法以IPTG诱导重组质粒pET28a(+)-icl和pET28a(+)-aceA在大肠杆菌BL21(DE3)和BL21(DE3)plysS细胞表达,筛选最佳诱导浓度、时间和温度。结果以0.25mmol/L和0.1mmol/L的IPTG在25℃诱导8h和6h后可溶性重组ICL蛋白和AceA蛋白的最高含量。结论本研究构建的结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶重组表达质粒,可获得可溶性表达蛋白,为抗结核药物的筛选奠定了基础。; 李岩裴秀英杨华郝方高玉婧董晓薇; 关键词：结核分枝杆菌

结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶基因的克隆表达及酶学性质研究被引量：5: 2005年; 目的获得具有生物学活性的结核分枝杆菌重组异柠檬酸裂解酶蛋白。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增该菌株的异柠檬酸裂解酶基因ic l,克隆入原核表达载体pET-28 a(+)中,通过在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,获得以镍离子螯合型琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白,并对其酶学性质进行测定分析。结果纯化出具有生物学活性的重组结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶。酶学性质测定分析表明,重组异柠檬酸裂解酶ICL的比活力为7.657×102μmol.mg-1.m in-1,反应最适pH值约为7.4。重组蛋白经高效液相色谱及质谱鉴定,测得相对分子质量为50 603.347。在5 mmol/L Tris-C l缓冲液、pH值7.8、25℃条件下,重组ICL的二级结构中相对有43.8%的α螺旋、31.9%的β折叠、3.4%β转角、20.9%无规则卷曲。结论本研究成功克隆表达结核分枝杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因,酶学性质鉴定获得了具有生物学活性的重组蛋白,为该酶免疫学研究及新型抗结核药物的筛选奠定了基础。; 郝方裴秀英张雪莲张顺宝赖煦卉王洪海; 关键词：基因表达

结核分枝杆菌的aceA基因的克隆、序列测定及生物信息学分析: 2005年; 目的　克隆编码结核分枝杆菌异柠檬酸裂合酶的基因aceA (1915 ,1916 ) ,对其全序列进行测定,并以生物信息学方法和软件分析其生物学特性,为进一步研究该酶的功能提供信息资料。方法　用PCR系统扩增出异柠檬酸裂合酶基因片段,将其插入载体pET2 8a,对其全序列进行测定;利用序列对比分析、蛋白氨基酸序列分析及结构预测软件进行生物信息学分析和模拟。结果　克隆的基因序列与报道的序列完全一致,aceA与icl及其他编码异柠檬酸裂合酶基因同源性很高,具有保守氨基酸共有序列;初步模拟出了该蛋白的三级结构。结论　本研究通过对aceA基因序列和氨基酸进行生物信息学分析,获取了该酶的信息特征,并与现有的报道结果进行对比分析,为分子生物学诊断、治疗和药靶筛选提供理论依据。; 郝方张雪莲王洪海裴秀英; 关键词：生物信息学

结核分支杆菌icl基因克隆策略及表达研究被引量：1: 2004年; 目的　研究克隆并表达结核分支杆菌H3 7Rv结构基因icl的最佳策略 ,并获得纯化蛋白。方法　以M .tbH3 7Rv基因组为模板 ,扩增该菌株的异柠檬酸酶基因icl,并重组入pUC18质粒进行克隆 ,克隆基因进而重组入原核表达质粒pET2 8-a(+)中 ,在不同的条件下进行诱导表达。重组蛋白以Ni -NTAagarose亲和层析柱纯化。结果　在 2 5℃ ,0 2 5mMIPTG诱导表达 8h可获得最佳表达量的可溶性重组蛋白 ,经HPLC和质谱检测分子质量为目标蛋白。; 裴秀英郝方张雪莲; 关键词：结核分支杆菌克隆基因 ICL

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郝方