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治疗性双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺研究被引量：5: 2007年; 目的研究双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法首先通过计算质粒拷贝数，检测工程菌DH5α/pS2．S和DH5α/pFP在传代过程中的遗传稳定性，通过摇瓶培养确定培养基组成，再在30L发酵罐内，通过改变培养基成分、培养时间、补料方式，确定最佳发酵参数。并将确定的最佳发酵参数应用于50L发酵罐连续3批中试规模的发酵，同时考察在发酵培养过程中质粒稳定性和超螺旋质粒DNA的比例。结果工程菌DH5α/pS2．S和DH5α/pFP在连续传代30次后，质粒拷贝数保持稳定。确定最佳发酵参数为以甘油为碳源的培养基培养，梯度恒速流加方式补料，培养时间为10h。通过3批稳定发酵，最终可获得湿菌58．0～71．8g／L，质粒含量可达到1．11～1．58mg／g菌，超螺旋质粒DNA的比例达93％以上。结论已建立了稳定的双质粒HBV DNA疫苗工程菌中试发酵工艺，为进一步规模化生产奠定了基础。; 饶桂荣黄英王鹏何晓嫱杨富强莫国玉陈光明; 关键词：DNA疫苗工程菌发酵

治疗型双质粒HBV DNA疫苗的构建及其鉴定被引量：16: 2003年; 为构建以人白细胞介素 2 /γ干扰素(hIL 2 /hIFN γ)融合基因为佐剂的治疗型HBVDNA疫苗 ,采用DNA重组技术分别构建含有HBV包膜中蛋白 (preS2 ·S)抗原和hIL 2 /hIFN γ融合蛋白的真核表达质粒即pcDNAS2 ·S和pcDNAIIF ,酶谱和测序分析表明克隆的preS2 ·S和hIL 2 /hIFN γ融合蛋白基因片段的方向、序列与预期相符。用脂质体转染试剂转染COS 7细胞 ,并用ELISA检测转染细胞培养上清中目的基因表达水平。结果显示 ,质粒转染后 4 8h达峰值 ,分别为HBsAg(P/N) =7.6 3、IL 2 =1 0 .35ng/ml、IFN γ =7.90ng/ml。以CTLL 2依赖细胞株/MTT比色法和微量细胞病变抑制法 (WISH VSV)检测pcDNAIIF转染后 4 8h培养上清中IL 2及IFN γ活性 ,结果分别为 998U/ml和 2 4 9U/ml。证明构建的重组质粒pcDNAS2 ·S和pcDNAIIF结构正确。; 何晓嫱陈光明黄英杨富强吴乐园莫国玉; 关键词：疫苗 DNA 肝炎病毒乙型治疗型

HBV DNA疫苗诱导健康及HBV转基因小鼠细胞免疫应答被引量：2: 2003年; 采用HBVCTL表位多肽体外刺激或冲击免疫效 (E)、靶(T)细胞 ,以观察DNA疫苗诱导健康及HBV转基因 (Tg)小鼠细胞免疫效果。结果发现 ,DNA疫苗能有效诱导健康BALB/c小鼠CTL活性 ,活性强弱与E/T比值及其上清液中IFN γ分泌水平有一定关系。HBsAg表位多肽(pp2 0 )体外刺激DNA疫苗免疫组效应细胞 ,培养上清IL 1 2释放水平 (2 1 1 3± 39 8pg/ml)明显较对照组 (86 7±2 7 1 pg/ml)高(P <0 0 5 ,t=4 4 82 )。DNA疫苗免疫HBVTg小鼠诱导CTL活性 (1 2 7%± 6 7% )较蛋白疫苗免疫对照组(1 7%±3 2 % )高(P <0 0 1 ,t=3 6 2 9) ;其效应细胞体外受 pp2 0刺激后分泌IL 1 2水平 (4 0 0± 30 1pg/ml)明显高于同期空载体免疫对照组 (3 8±3 0 pg/ml,P <0 0 5 ,t=2 376 )。采用在体电脉冲法DNA疫苗接种的 5只HBVTg小鼠中 ,于 4周时有 2只血清HBsAg阴转 ,并于 8周时出现抗 HBs阳性 ,而对照组中无一例血清HBsAg发生变化。表明HBVDNA疫苗能有效诱导健康及HBVTg小鼠细胞免疫应答。; 杨富强陈光明何晓嫱吴乐园莫国玉黄英; 关键词：肝炎乙型

治疗型HBV基因疫苗免疫效果的研究被引量：9: 2002年; 为探索治疗型HBV基因疫苗治疗慢性乙型肝炎的可行性 ,自行构建了HBV包膜蛋白前S2 ·S基因及人IL 2和IFN γ融合蛋白基因真核表达质粒 ,并将双质粒融合蛋白作为佐剂组合成治疗型HBV基因疫苗 ,在健康小鼠、HBV转基因 (Tg)小鼠、新西兰兔和恒河猴体内进行了免疫效果试验。结果发现 :①特异性CTL活性提高 ;②对HBsAg特异性T细胞增殖能力提高 ,HBsAg 3 0 μg /ml对pcS2 ·S免疫的小鼠脾细胞的刺激指数 (SI =5 6± 0 9)明显较空白质粒pcDNA3 1组 (SI =2 0± 0 5 )为高 (P <0 0 1) ,免疫组的IL 2 /IFN γ分泌水平为 (2 2 6 3± 41 0 5pg/ml) /(5 1 1± 7 7pg/ml) ,明显较空白组的 (69 0± 2 2 1pg/ml) /(0 9± 0 7pg/ml)为高 (P <0 0 1) ;③HBV基因疫苗免疫健康小鼠局部引流淋巴结中DCs的诱导HBsAg致敏T细胞增殖指数 (4 2 0 )较pcDNA3 1组 (2 5 5 )为高 ;⑤用在体电脉冲法注射治疗型HBV基因疫苗后 ,检测血清抗 HBs水平 ,无论是小鼠、兔还是猴均有明显提高。提示该治疗型HBV基因疫苗能较好地诱导体液和细胞免疫。; 陈光明杨富强何晓嫱李治刚吴乐园莫国玉黄英谢宗法; 关键词：免疫疗法免疫应答动物实验乙型肝炎

治疗型HBV DNA疫苗在小鼠组织中的分布和长期毒性研究被引量：10: 2003年; 为研究治疗型HBVDNA疫苗使用的安全性 ,观察质粒在小鼠组织中的分布和其长期毒性 ,采取给小鼠肌注电转染治疗型HBVDNA疫苗 1 0 μg和 5 0 μg后 ,用PCR法检测外源基因在小鼠组织的分布和存留时间 ;另用小鼠肌注电转染治疗型HBVDNA疫苗30、6 0和 1 2 0 μg,每周 2次 ,连续 4周 ,共 8次 ,于末次给药后 4 8h,各组活杀 1 / 2 ,留下 1 / 2继续观察 4周 ,进行血液学、血生化、病理组织学及抗核抗体检查。结果单次肌注电转染疫苗后 ,质粒DNA主要分布于注射部位肌肉组织 ,可存留 8周 ,其他组织也有散在低水平分布 ,但持续时间较短 ;未发现动物有异常表现 ,血液学、血生化和病理组织学检查未见异常 ;未观察到抗核抗体的产生和自身免疫病理损害。上述结果表明。; 莫国玉陈光明黄芝瑛何晓嫱黄英杨富强; 关键词：乙型毒性试验

治疗型HBV DNA疫苗肌注电转染法免疫恒河猴的效果及安全性观察被引量：6: 2003年; 为观察肌注电转染法接种治疗型HBVDNA疫苗对恒河猴的免疫效果 ,对健康恒河猴采用肌注电转染法接种治疗型HBVDNA疫苗 ,剂量分别为 0 2mg/只、1mg/只和 2mg/只 ;前 3次给药时间间隔 1个月 ,主要观察免疫效果 ;此后 6次给药为每天 1次 ,观察重复给药的安全性。结果显示肌注电转染法接种疫苗后 ,不同剂量组均可有效诱导恒河猴产生HBsAg特异性抗体 (抗 HBs) ;重复给药未见明显的各系统毒副反应及血液学和血生化异常 ,血清抗核抗体 (ANA)阴性。表明治疗型HBVDNA疫苗用肌注电转染法免疫可显著增强恒河猴的免疫效果 ;多次重复接种该疫苗未见恒河猴的毒性反应。; 莫国玉陈光明杨富强何晓嫱黄英杨若才; 关键词：疫苗免疫法

欣洛维对实验性胃溃疡的治疗效果观察被引量：8: 1997年; 欣洛维对实验性胃溃疡的治疗效果观察５１０６０２广州解放军第４５８医院杨富强陈光明吴乐园黄英王东晓关键词胃溃疡；治疗学中国图书资料分类号Ｒ６５６．６２欣洛维（ＴＰ）由健康乳猪新鲜胸腺提取，是具有较强促细胞增殖活性的蛋白类口服制剂，临床治疗胃、十二指肠溃...; 杨富强陈光明吴乐园黄英王东晓; 关键词：胃溃疡欣洛维药物疗法

治疗性双质粒HBV DNA疫苗的体外转染表达与鉴定: 探讨治疗性双质粒HBV DNA疫苗转染COS-7细胞后目的基因的表达情况,为进一步研究HBV DNA疫苗的药效学机理提供依据。采用脂质体转染试剂LipofectarnineTM2000介导,将带有preS2+s的重组疫苗...; 饶桂荣陈光明刘惠萍何晓嫱黄英杨富强莫国玉; 关键词：COS-7细胞体外转染; 文献传递

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黄英