陈光明
- 作品数：19 被引量：69H指数：6
- 供职机构：解放军第458医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 治疗性双质粒HBV DNA疫苗的体外转染表达与鉴定
- 探讨治疗性双质粒HBV DNA疫苗转染COS-7细胞后目的基因的表达情况,为进一步研究HBV DNA疫苗的药效学机理提供依据。采用脂质体转染试剂LipofectarnineTM2000介导,将带有preS2+s的重组疫苗...
- 饶桂荣陈光明刘惠萍何晓嫱黄英杨富强莫国玉
- 关键词：COS-7细胞体外转染
- 文献传递
- 慢性乙型肝炎基因治疗若干进展被引量：1
- 2005年
- 基因治疗是极具潜力的慢性乙型肝炎治疗策略。具体包括:DNA疫苗、核酶、RNA干扰等。
- 邵亚明罗发兴田泽维陈光明杨富强
- 关键词：慢性乙型肝炎基因治疗
- 抗HBV的治疗性双质粒DNA疫苗的构建及初步药效学研究被引量：4
- 2008年
- 目的:构建抗乙型肝炎病毒(HBV)的治疗性DNA疫苗并进行体外、体内鉴定。方法:采用PCR技术扩增含有HBV包膜中蛋白(preS2.S)抗原基因和hIL-2/hIFN-γ融合蛋白的基因,将目的基因分别亚克隆于pVAX1真核表达载体,并进行酶切和测序分析;转染双质粒于COS-7细胞检测基因及蛋白表达情况;利用Combinatotial Extension(CE)软件模建分析佐剂质粒表达融合蛋白的空间结构;双质粒联合在体电脉冲技术(EP)注射BALB/c小鼠以检测特异性的体液和细胞免疫应答。结果:经酶谱和测序分析表明,构建的双质粒pVAX1/S2.S(pS2.S)和pVAX1/IL-2IFN-γ(pIIF)的基因片段的方向、序列完全正确;ELISA法定量检测双质粒转染COS-7细胞后48小时目的基因(preS2.S和hIL-2/hIFN-γ)的蛋白表达水平较高,HBsAg、IL-2、IFN-γ的含量分别为45.1、10.03、11.5ng/ml;模拟空间结构分析表明佐剂质粒的融合蛋白中两细胞因子的活性部位均裸露在外;小鼠免疫试验结果表明,疫苗pS2.S能诱导健康小鼠的保护性抗-HBs的抗体产生,且具有剂量相关性;佐剂pIIF可显著增强疫苗pS2.S质粒的免疫效果;在EP辅助作用下,质粒pS2.S和pIIF共肌注BALB/c小鼠,低剂量就能诱导较强特异性的细胞和体液免疫。结论:成功构建了抗HBV的DNA疫苗pS2.S及佐剂pIIF质粒,并具有较特异的体内外活性。
- 饶桂荣杨富强莫国玉陈光明
- 关键词：DNA疫苗转染
- 治疗性双质粒HBV DNA疫苗的纯化与检定被引量：1
- 2007年
- 目的研究双质粒HBVDNA疫苗(pS2.S和pFP)的纯化工艺,并建立质控标准。方法首先对两工程菌(DH5α/pS2.S和DH5α/pFP)的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;然后通过三步柱层析(依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析)进行质粒纯化,并检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定。结果质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量的RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,最后经阴离子柱层析有效去除内毒素,并浓缩了质粒,质粒得率为0.9～1.1mg/g菌,质粒总回收率达78%。三批终产品全面质量检定均符合规定。结论建立了稳定的双质粒HBVDNA疫苗(pS2.S和pFP)的纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定基础。
- 饶桂荣黄明杨富强莫国玉刘惠萍陈光明
- 关键词：DNA疫苗质粒纯化
- 治疗性双质粒HBV DNA疫苗的体外转染表达与鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的:探讨治疗性双质粒HBVDNA疫苗转染COS-7细胞后目的基因的表达情况。方法:以脂质体转染试剂LipofectamineTM2000介导,将带有preS2+S基因的重组疫苗质粒pS2.S和带有hIL2+hIFNγ融合基因的重组佐剂质粒pFP分别转染COS-7细胞,同时设立空质粒转染和未转染细胞为对照组,于转染后24,48,72,96h采用ELISA法检测细胞培养上清的HBsAg、融合蛋白白细胞介素(IL-2)及干扰素(IFN-γ)的表达,并测定融合蛋白的IL-2、IFN-γ活性,采用ECLWesternblotting分析和鉴定目的蛋白preS2+S、IL-2及IFN-γ的分子质量大小。结果:双质粒在转染COS-7细胞后不同时间均可进行分泌表达,且48h时目的蛋白的表达量达峰值,其中表达的融合蛋白具有较高的IL-2和IFN-γ的生物学活性,pS2.S和pFP的转染上清分别在30.6ku和110ku处有特异性阳性反应条带。结论:HBVDNA疫苗质粒pS2.S和佐剂质粒pFP在COS-7细胞的最佳表达时间是转染后48h,并鉴定双质粒表达产物的分子质量大小分别为30.6ku和110ku。
- 饶桂荣刘惠萍何晓嫱杨富强莫国玉陈光明
- 治疗性双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺研究被引量：5
- 2007年
- 目的研究双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法首先通过计算质粒拷贝数，检测工程菌DH5α/pS2．S和DH5α/pFP在传代过程中的遗传稳定性，通过摇瓶培养确定培养基组成，再在30L发酵罐内，通过改变培养基成分、培养时间、补料方式，确定最佳发酵参数。并将确定的最佳发酵参数应用于50L发酵罐连续3批中试规模的发酵，同时考察在发酵培养过程中质粒稳定性和超螺旋质粒DNA的比例。结果工程菌DH5α/pS2．S和DH5α/pFP在连续传代30次后，质粒拷贝数保持稳定。确定最佳发酵参数为以甘油为碳源的培养基培养，梯度恒速流加方式补料，培养时间为10h。通过3批稳定发酵，最终可获得湿菌58．0～71．8g／L，质粒含量可达到1．11～1．58mg／g菌，超螺旋质粒DNA的比例达93％以上。结论已建立了稳定的双质粒HBV DNA疫苗工程菌中试发酵工艺，为进一步规模化生产奠定了基础。
- 饶桂荣黄英王鹏何晓嫱杨富强莫国玉陈光明
- 关键词：DNA疫苗工程菌发酵
- 治疗型HBV DNA疫苗的研究与应用被引量：6
- 2003年
- 综述治疗型乙型肝炎病毒 (HBV)疫苗研究概况 ,重点阐述治疗型HBVDNA疫苗研究进展、治疗乙型肝炎的依据、作用机制和与传统疫苗的比较等。
- 陈光明杨富强
- 关键词：免疫疗法疫苗肝炎病毒乙型治疗型
- 治疗型双质粒HBV DNA疫苗的构建及其鉴定被引量：16
- 2003年
- 为构建以人白细胞介素 2 /γ干扰素(hIL 2 /hIFN γ)融合基因为佐剂的治疗型HBVDNA疫苗 ,采用DNA重组技术分别构建含有HBV包膜中蛋白 (preS2 ·S)抗原和hIL 2 /hIFN γ融合蛋白的真核表达质粒即pcDNAS2 ·S和pcDNAIIF ,酶谱和测序分析表明克隆的preS2 ·S和hIL 2 /hIFN γ融合蛋白基因片段的方向、序列与预期相符。用脂质体转染试剂转染COS 7细胞 ,并用ELISA检测转染细胞培养上清中目的基因表达水平。结果显示 ,质粒转染后 4 8h达峰值 ,分别为HBsAg(P/N) =7.6 3、IL 2 =1 0 .35ng/ml、IFN γ =7.90ng/ml。以CTLL 2依赖细胞株/MTT比色法和微量细胞病变抑制法 (WISH VSV)检测pcDNAIIF转染后 4 8h培养上清中IL 2及IFN γ活性 ,结果分别为 998U/ml和 2 4 9U/ml。证明构建的重组质粒pcDNAS2 ·S和pcDNAIIF结构正确 。
- 何晓嫱陈光明黄英杨富强吴乐园莫国玉
- 关键词：疫苗DNA肝炎病毒乙型治疗型
- 电脉冲肌注法增强治疗型HBV DNA疫苗免疫效果的实验研究被引量：6
- 2003年
- 为提高细胞内质粒DNA的导入率并增强DNA疫苗诱导的免疫效果 ,采用在体电脉冲肌注法接种治疗型HBVDNA疫苗。结果接受电脉冲(2 0 0V/cm)肌注的 8只BALB/c小鼠局部肌肉组织荧光素酶活性为 1 6 1 70± 1 2 5 33RLU ,未加电脉冲对照组为 8 0 2±8 0 0RLU ,相差 4个数量级 ,差异具非常显著性 (P <0 0 0 5 ,t=3 6 74 )。新西兰兔电脉冲肌注法接种后第 2、4周 ,双质粒 (pS2 ·S +pFP)大剂量组 (5 0 +5 0 μg/只 )血清抗 HBs阳性动物数明显较同期未加电脉冲对照组 (大剂量 :1 0 0 0 +1 0 0 0 μg/只 )高 ,差异具显著性意义 (P <0 0 5 ) ;第 1 3周时 ,电脉冲免疫大 (5 0 +5 0 μg/只 )、中 (2 5 +2 5 μg/只 )、小 (5 +5 μg/只 )剂量组均有血清抗 HBs阳性鼠出现 ,分别为 5、4和 4 只 ,组间阳性动物数并无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,但均较同期的对照组高 ,并具有显著性意义 (P <0 0 5 )。恒河猴电脉冲肌注法接种后 8周血清抗 HBs阳性动物数为大剂量 (1 0 0 0 +1 0 0 0 μg/只)组 3/ 3只 ,中剂量 (5 0 0 +5 0 0 μg/只 )组 2 / 3只 ,小剂量 (1 0 0 +1 0 0 μg/只 )组 0 / 3只 ,大剂量组与小剂量组及非电脉冲对照组之间比较差异具有显著性意义 (P <0 0 5 ) ;至免疫第 1 3周时 ,电脉冲免疫的大、中、小
- 杨富强赵勇刚陈光明何晓嫱吴乐园莫国玉
- 关键词：乙型疫苗EP
- HBV DNA疫苗诱导健康及HBV转基因小鼠细胞免疫应答被引量：2
- 2003年
- 采用HBVCTL表位多肽体外刺激或冲击免疫效 (E)、靶(T)细胞 ,以观察DNA疫苗诱导健康及HBV转基因 (Tg)小鼠细胞免疫效果。结果发现 ,DNA疫苗能有效诱导健康BALB/c小鼠CTL活性 ,活性强弱与E/T比值及其上清液中IFN γ分泌水平有一定关系。HBsAg表位多肽(pp2 0 )体外刺激DNA疫苗免疫组效应细胞 ,培养上清IL 1 2释放水平 (2 1 1 3± 39 8pg/ml)明显较对照组 (86 7±2 7 1 pg/ml)高(P <0 0 5 ,t=4 4 82 )。DNA疫苗免疫HBVTg小鼠诱导CTL活性 (1 2 7%± 6 7% )较蛋白疫苗免疫对照组(1 7%±3 2 % )高(P <0 0 1 ,t=3 6 2 9) ;其效应细胞体外受 pp2 0刺激后分泌IL 1 2水平 (4 0 0± 30 1pg/ml)明显高于同期空载体免疫对照组 (3 8±3 0 pg/ml,P <0 0 5 ,t=2 376 )。采用在体电脉冲法DNA疫苗接种的 5只HBVTg小鼠中 ,于 4周时有 2只血清HBsAg阴转 ,并于 8周时出现抗 HBs阳性 ,而对照组中无一例血清HBsAg发生变化。表明HBVDNA疫苗能有效诱导健康及HBVTg小鼠细胞免疫应答 。
- 杨富强陈光明何晓嫱吴乐园莫国玉黄英
- 关键词：肝炎乙型
