田疆
- 作品数：6 被引量：23H指数：2
- 供职机构：中山大学中山医学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化分析被引量：10
- 2010年
- 【目的】了解季节性H1N1流感病毒与2009年新型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化关系,探讨甲型H1N1流感病毒的遗传变异规律。【方法】分别从2006年和2009年流感病人标本中分离并鉴定出季节性HIN1流感病毒和新型H1N1流感病毒,用RT-PCR技术扩增了病毒NA基因全序列,并对其分子进化和重要功能位点的遗传变异进行了分析。【结果】2009年新型H1N1流感病毒与2006年季节性HIN1流感病毒比较,NA基因的同源性较低(77.9%～78.8%),与世界各地不同年代代表株及WHO推荐的1979～2010年季节性流感疫苗株比较,NA基因的同源性也较低(78.1%～79.3%),但与WHO推荐的2009年新型H1N1流感疫苗株比较同源性则高达99%以上;系统进化分析结果表明,2009年新型H1N1流感病毒NA基因与欧亚猪流感病毒株A/swine/Belgium/1/1983的亲缘关系最近;并发现自2005年以来季节性H1N1流感病毒NA基因的某些抗原位点和神经氨酸酶活性位点已发生了变异。【结论】2009年新型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧亚猪流感病毒;接种季节性流感疫苗不能对本次流行的新型流感产生有效的免疫保护作用;季节性H1N1流感病毒在流行过程中NA基因已发生了一定的变异,有必要持续跟踪和监测病毒的变异情况。
- 田疆周经姣陈艺韵梁瑜晏辉钧周俊梅刘岩付春云高洪丽方丹云狄飚江丽芳
- 关键词：甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化
- 登革病毒非结构蛋白NS1群特异性单克隆抗体的制备及初步应用被引量：1
- 2011年
- 目的制备登革病毒NS1群特异性单克隆抗体,建立可检测登革病毒1～4型NS1抗原的ELISA检测法,为登革热的早期快速诊断奠定基础。方法应用毕赤酵母表达系统分泌表达登革病毒2型重组非结构蛋白NS1,以此为抗原免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经HAT选择培养、间接ELISA筛选和亚克隆,获得能稳定分泌登革病毒NS1群特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用所获得的单克隆抗体建立可检测1～4型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA法。结果从登革病毒2型NS1重组毕赤酵母(Pichia Pastoris-NS1)中获得了大量纯化的登革病毒重组NS1蛋白;经免疫小鼠、细胞融合、间接ELISA筛选及3次亚克隆后,最终获得2株能高效分泌抗登革病毒NS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D7B6B4和2D10E2F6,间接ELISA显示抗体效价高达1∶8000～1∶16000;ELISA及免疫荧光检测证实,其所分泌的抗体与1～4型登革病毒及其重组NS1蛋白均有特异性免疫反应,为登革病毒NS1群特异性单克隆抗体;两株单克隆抗体均为IgG2a亚类;初步建立了检测4个血清型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA法。结论成功研制出两株能高效分泌抗登革病毒NS1群特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。初步建立了可检测1～4型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA检测法。
- 高洪丽李兴华田疆方丹云付强刘岩周俊梅周经姣江丽芳
- 关键词：登革病毒单克隆抗体
- 登革病毒NS1蛋白的原核表达及其在登革热快速诊断中的应用被引量：9
- 2012年
- 【目的】重组表达1型登革病毒(DENV-1)和3型登革病毒(DENV-3)NS1蛋白,制备多克隆抗体,建立特异、敏感的登革病毒NS1抗原ELISA检测法。【方法】RT-PCR扩增DENV-1和DENV-3 NS1全长基因,经T-A克隆后,将目的基因分别与质粒PET30a(+)连接构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。阳性克隆经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化。用纯化的NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗NS1多克隆抗体。应用NS1多克隆抗体建立登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法。【结果】成功构建了高效表达DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,获得纯化的NS1蛋白;用重组NS1蛋白免疫BALB/c小鼠后获得高效价(>1:30 000)的抗DENV-1和DENV-3 NS1的特异性抗体;用NS1多克隆抗体建立了登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法,该法可特异性检出登革病毒NS1抗原,敏感性达到1 ng/mL,与黄病毒的其它成员无交叉反应,表明具有良好的特异性。【结论】本研究成功构建了DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,高效表达了具有良好免疫原性及免疫反应性的DENV-1和DENV-3重组NS1蛋白;建立了检测登革病毒NS1抗原的双抗体夹心法,并证明该检测法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景。
- 傅强田疆方丹云周俊梅庞贤武李兴华江丽芳
- 关键词：登革病毒NS1蛋白原核表达多克隆抗体
- 登革病毒感染对T细胞和NK细胞表达细胞因子的影响被引量：2
- 2012年
- 【目的】本文探讨登革病毒体外感染人外周血单个核细胞后对T细胞和NK细胞表达细胞因子的影响,并初步探讨登革病毒感染引起的免疫效应。【方法】用登革2型病毒(DEN-2)感染健康人外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测登革2型病毒后T细胞和NK细胞的表型及细胞因子的表达水平。【结果】DEN-2感染18 h后,T细胞明显表达CD69、IFN-γ、TNF-α和perforin,NK细胞表达CD69、IFN-γ和perforin;随着感染复数(MOI)增加,表达perforin和IFN-γ的T细胞数及表达perforin的NK细胞数上升;随着感染时间的延长,表达perforin和IL-4的T细胞数及表达perforin的NK细胞数逐渐上升,而表达IFN-γ的T细胞数及表达IFN-γ的NK细胞数逐渐下降;表达perforin的T细胞亚型主要为CD8+T细胞。【结论】发现登革病毒在体外能够诱导T细胞表达CD69、IFN-γ、TNF-α、perforin和IL-4,及NK细胞表达CD69、IFN-γ和perforin,提示T细胞、NK细胞可能在抗登革病毒感染或免疫损伤中起着重要的作用。
- 庞贤武田疆曾谷城刘岩方丹云晏辉钧江丽芳
- 关键词：登革病毒细胞因子T细胞
- 广州市A型流感病毒的遗传进化研究
- 研究背景和目的
流行性感冒(Influenza)简称流感，是由人流感病毒引起的危害人类健康的常见急性传染病。在每年流感的季节性流行期内，流感病毒可以在短时间内在全球范围内传播，可造成世界上10％～20％的人口受...
- 田疆
- 关键词：流感监测HA基因NA基因遗传进化分析
- 文献传递
- 广州市A型流感病毒血凝素基因的遗传变异研究被引量：1
- 2009年
- 【目的】了解2006-2007年广州地区流感的病原学分布,掌握H1N1亚型流感病毒血凝素基因(HA)的遗传和进化特征。【方法】选取2006-2007年广州市19个流感监测点的流感病毒代表株共45株,应用病原学、血清学和分子生物学方法对病毒的型别进行了鉴定;选取24株H1N1亚型流感病毒进行全长HA基因的扩增、克隆与分子进化分析。【结果】A型流感病毒H1N1和B型流感病毒交替成为广州地区2006年流感的优势流行株;2006-2007年广州地区H1N1亚型流感病毒流行株在HA蛋白的抗原区、受体结合位点和潜在糖基化位点均发生了点突变;遗传进化分析结果表明,24株H1N1亚型毒株间基因同源性的平均值为98.4%;与WHO推荐的疫苗株(New Caledonia/20/1999和Solomon Islands/3/2006)相比,同源性高达96.6%和97.8%。【结论】2006年,广州地区流感的病原体为H1N1亚型流感病毒和B型流感病毒;2006-2007年广州市H1N1亚型流感病毒HA基因发生了一定程度的变异,有必要对毒株的变异加强监测;WHO推荐的2006-2007年H1N1亚型流感病毒疫苗株适用于我国人群的免疫预防。
- 方丹云田疆周经姣周红何丽娟陈艺韵狄彪江丽芳
- 关键词：流感病毒H1N1亚型HA基因遗传变异分析
