汤雅岚
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 表达食血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂的毕赤酵母菌株的构建被引量：3
- 2009年
- 食血蝙蝠(Desmodus rotundus)在吸食大型动物血液时能保持创口处血流的畅通。本研究根据食血蝙蝠唾液中发现的纤溶酶原激活剂(Bat-PA,另称DSPAα1)的全长基因序列(GenBank Accession No.J05082),首次在体外人工合成Bat-PA全长基因并亚克隆到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K上;转化毕赤酵母菌株GS115后,经甲醇诱导获得DSPAα1的分泌型表达,表达条带为47kD;通过抗G418浓度梯度筛选、毕赤酵母中小量表达后SDS-PAGE电泳检测以及纤维平板法测活,筛选出高表达的DSPAα1稳定菌株,对电泳中的目的蛋白条带进行密度扫描测定,产量达到约30mg/L。目前,DSPAα1主要来自哺乳动物细胞,如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、胚胎卵巢肾细胞(BHK)、非洲绿猴肾细胞(COS),代价高昂。在毕赤酵母中生产DSPAα1可以降低成本,增加产率,为探索Bat-PA作为新一代溶栓剂奠定基础。
- 刘堰苏畅宋小双汤雅岚包振鸿
- 关键词：纤溶酶原激活剂毕赤酵母
- 重组抗血红素ScFv包涵体蛋白的复性及纯化研究被引量：3
- 2005年
- 抗血红素多二硫键ScFv在大肠杆菌中绝大多数表达产物为包涵体,为了获得可溶性的具有生物活性的ScFv,摸索了不同的复性条件,包括透析法、稀释和层析相结合的方法。研究发现,先对溶解的变性ScFv溶液稀释,进行初步的蛋白质复性,再利用Sephadex G-25凝胶层析进一步复性、降低变性剂浓度和纯化,至少可以得到95％纯度,产率为150mg／L的目标蛋白,通过一次凝胶过滤层析,达到了去除变性剂、复性及纯化ScFv蛋白三种目的,为多二硫键ScFv在大肠杆菌中的表达和纯化提供了一种经济可行的方法。
- 徐寒梅汤雅岚戴俊姚震声华子春
- 关键词：蛋白质复性复性血红素包涵体变性剂凝胶过滤层析
