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吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂在毕赤酵母中的表达及纯化研究: 本文对吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂在毕赤酵母中的表达及纯化进行了研究。文章在体外人工合成吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂 Bat-PA (H) 的全长基因，并在基因序列5’和3’端分别引入His6，再将其克隆到表达载体pPIC9...; 苏畅; 关键词：吸血蝙蝠蛋白表达; 文献传递

表达食血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂的毕赤酵母菌株的构建被引量：3: 2009年; 食血蝙蝠(Desmodus rotundus)在吸食大型动物血液时能保持创口处血流的畅通。本研究根据食血蝙蝠唾液中发现的纤溶酶原激活剂(Bat-PA,另称DSPAα1)的全长基因序列(GenBank Accession No.J05082),首次在体外人工合成Bat-PA全长基因并亚克隆到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K上;转化毕赤酵母菌株GS115后,经甲醇诱导获得DSPAα1的分泌型表达,表达条带为47kD;通过抗G418浓度梯度筛选、毕赤酵母中小量表达后SDS-PAGE电泳检测以及纤维平板法测活,筛选出高表达的DSPAα1稳定菌株,对电泳中的目的蛋白条带进行密度扫描测定,产量达到约30mg/L。目前,DSPAα1主要来自哺乳动物细胞,如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、胚胎卵巢肾细胞(BHK)、非洲绿猴肾细胞(COS),代价高昂。在毕赤酵母中生产DSPAα1可以降低成本,增加产率,为探索Bat-PA作为新一代溶栓剂奠定基础。; 刘堰苏畅宋小双汤雅岚包振鸿; 关键词：纤溶酶原激活剂毕赤酵母

食血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂高效表达毕赤酵母菌株的构建: 蝙蝠(Desmodus rotundus)在吸食大型动物血液时能保持创口处血流的畅通。本课题根据食血蝙蝠唾液中发现的纤溶酶原激活剂(Bat-PA)的全长基因序列(Genbank登录号105082)，首次在体外人工合成Ba...; 刘堰苏畅易巧汤雅岚包振鸿华子春; 关键词：纤溶酶原激活剂毕赤酵母

食血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂在毕赤酵母中的表达方法: 一种食血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂在毕赤酵母中的表达方法，通过在体外人工合成吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂(Bat-PA)的全长基因，再将其克隆到表达载体pPIC9K上，然后通过电穿孔的方法将线性化的重组质粒转化进入酵母细胞，进...; 刘堰苏畅石小花宋小双聂盼肖明春; 文献传递

DSPAα1缺失突变体在毕赤酵母中的表达及活性研究: 2016年; 吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂(Desmodus salivary plasminogen activators,DSPAs)共有4种:DSPAα1、α2、β及γ。其中,DSPAα含有指形区(F)、表皮生长因子区(E)、kringle区(K)和丝氨酸蛋白酶区(P),DSPAβ含E、K、P区,DSPAγ含K和P区。以DSPAα1为基础,研究其结构对纤溶活性的影响。采用重叠延伸PCR技术(splicing overlap extension PCR,SOE-PCR)获得缺失E区的DSPAα1突变体(m DSPAα1),分别构建m DSPAα1/p PIC9K、DSPAβ/p PIC9K和DSPAγ/p PIC9K重组质粒并转化到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株GS115中表达,纤维平板法测活。结果显示未检测到DSPAγ的表达,DSPAα1活性为2.64×105 U/mg,DSPAβ的活性为1.32×104 U/mg,m DSPAα1活性为151.52 U/mg;同时使用DSPAα1、m DSPAα1、DSPAβ时,总活性几乎不受影响,单独使用任意两者时,发现活性均降低2-3倍。m DSPAα1纤溶活性几乎没有,同时DSPAβ与野生型DSPAα1相比保留了相当的催化活性。DSPAα1的N端区域可以影响其溶栓活性,而缺失E区后几乎丧失活性,说明E区在DSPAα1溶栓过程中起着至关重要的作用。; 陈韵牛纯青宋小双苏畅华子春刘堰; 关键词：SOE-PCR 缺失突变体毕赤酵母

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苏畅