吴玮
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：上海生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 人血浆载脂蛋白AⅠ冻干品干热法灭活病毒的效果验证
- 2014年
- 目的采用干热法对纯化的人血浆载脂蛋白AⅠ(apolipoprotein AⅠ,ApoAⅠ)冻干品进行病毒灭活处理,并对灭活效果进行验证。方法将脂包膜病毒伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯(Sindbis)病毒及非脂包膜病毒脑心肌炎(encephalomyocarditis,EMC)病毒按1∶9(v∶v)的比例分别加至3批ApoAⅠ样品中,冻干后于水浴中(100±1)℃加热30 min灭活,分别于加热后5、10、20、30 min取样,检测病毒滴度,绘制病毒灭活动力学曲线,并检测干热法灭活病毒对目的蛋白理化性质及生物活性的影响。结果干热法对ApoAⅠ样品中的脂包膜和非脂包膜病毒均可有效灭活,灭活20 min后,3种指示病毒的滴度均迅速下降;干热法灭活后,冻干品的外观、复溶时间、复溶后澄明度、目的蛋白的平均回收率(95.44%)均符合要求,样品的SDS-PAGE、Western blot图谱、免疫电泳行为、二级结构和生物活性均无显著变化。结论干热法能有效灭活脂包膜和非脂包膜病毒;在ApoAⅠ纯化工艺中采用S/D法和干热法两步病毒灭活步骤,可保证制品的安全性。
- 卞炯何毅明吴玮刁武平朱威
- 关键词：载脂蛋白A冻干品灭活
- 重组人载脂蛋白AⅠ的原核表达及活性检测初探被引量：1
- 2010年
- 目的原核表达人载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ),对其表达进行优化,同时对ApoAⅠ活性检测方法进行初步研究。方法通过构建3种不同的重组质粒来研究以组氨酸(His)6融合蛋白表达、(His)6-pro(前肽)融合蛋白与单目的基因表达之间的差别,其中(His)6-pro-ApoAⅠ质粒中目的基因第3、4、7位密码子进行无义突变。随后采用镍离子柱纯化重组蛋白,间接法测定ApoAⅠ对被内毒素(LPS)攻击的细胞的保护效果来检测其生物活性。结果单目的基因(pET28a-ApoAⅠ)、组氨酸标记的融合蛋白(pET28a-(His)6-ApoAⅠ)以及(His)6-pro(前肽)融合蛋白(pET28a-(His)6-pro-ApoAⅠ)表达量分别为17、40、95mg/L,经镍柱纯化后的重组蛋白经Western blot、分子筛层析以及生物活性检测,表明原核表达的ApoAⅠ为单体蛋白且具有相应的生物学活性。结论原核表达的ApoAⅠ与人血浆提纯的天然ApoAⅠ分子生物性状无明显差异。
- 卞炯何毅明祝慈芳王黎吴玮朱威
- 关键词：原核表达蛋白纯化生物活性
- 静脉注射人免疫球蛋白工艺中的病毒灭活方法初探被引量：2
- 2015年
- 目的 研究静脉注射人免疫球蛋白（intravenous immunoglobulin,IVIG）工艺中辛酸处理联合20 nm膜过滤的病毒灭活/去除方法.方法 分别将脂包膜Sindbis病毒和伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）加入pH（4.6±0.1）和pH（5.3±0.1）IVIG中间品（辛酸沉淀后上清液）,在（7.47±0.39）、（14.47±0.39）和（22.47±0.39） mmol/L辛酸条件下维持（25±1）℃处理120min;将非脂包膜猪细小病毒（porcine parovirus,PPV）加入pH（6.0±0.2）MG中间品（层析流穿液）,用20 nm膜过滤.检测所有样品处理前后的病毒滴度.结果 （25±1）℃处理120m in后,pH（4.6±0.1）IVIG中间品分别经（7.47±0.39）和（14.47±0.39） mmol/L辛酸钠处理后的残余病毒滴度均≤0.501g,pH（5.3±0.1）IVIG中间品分别经（14.47±0.39）和（22.47±0.39） mmol/L辛酸处理后的残余病毒滴度均≤0.50lg;20 nm膜过滤可使MG中间品的PPV滴度下降≥4.00lg.2种处理方法的结果均符合相关规定的要求.结论 在一定条件下,辛酸处理联合20 nm膜过滤可有效灭活/去除MG生产过程的相关病毒.
- 吴玮段星宇金晶郑炎
- 关键词：病毒灭活
- α_1-抗胰蛋白酶制剂的制备及其病毒灭活被引量：7
- 2001年
- 目的 从Ｃｏｈｎ ＦⅣ中提纯α１－抗胰蛋白酶（α１－Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ α１－ＡＴ，制备较高纯度α１－ＡＴ制剂。方法 对Ｃｏｈｎ ＦⅣ抽提液经沉淀、超滤、离子交换及凝胶过滤，提纯 α１－ＡＴ用巴氏法（液态，６０℃，１０ｈ加热）作病毒灭活， 并考察其效果。用免疫单扩散、双向交叉免疫电泳、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及合成基质法检测α１－ＡＴ蛋白及生物活性。用区带 扫描法测定α１－ＡＴ制剂的纯度。结果３批试制的α１－ＡＴ制剂的纯度为９１．３±１．５２％，比活０．４９±０．０８μ／ｍｇ，比活性 比抽提液提高了２７．４倍。巴氏法处理可使ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ、Ｐｏｌｉｏ Ｉ型疫苗病毒分别降低１０．０±０．３，１０．０±０．３１及７．１１ ±０．３ｌｇＴＣＩＤ５０／ｍｌ，但仍能检出Ｐｏｌｉｏ型疫苗病毒。结论 可从 Ｃｏｈｎ ＦⅣ中制得较高纯度的 α１－ＡＴ制剂，巴氏法能对 α１－ＡＴ制剂作有效的病毒灭活处理。
- 朱威祝慈芳刁武萍周继东吴玮
- 关键词：Α1-抗胰蛋白酶病毒灭活
- 优化的α1-抗胰蛋白酶生物活性测定方法的验证
- 2013年
- 目的 验证优化的α1-抗胰蛋白酶（α1-antitrypsin,α1-AT）生物活性测定方法.方法 用发色底物法测定α1-AT活性,以牛胰蛋白酶替换冻干正常人血清来优化先前建立的方法,验证优化方法的准确性、重复性,并观察不同物质对优化方法的影响.结果 优化方法在胰蛋白酶质量浓度为0.01～0.05 g/L时线性关系良好,相关系数＞0.99.优化方法具有良好的准确性和重复性,当采用优化方法测定质量浓度为0.01、0.03、0.05 g/L胰蛋白酶时,胰蛋白酶的回收率分别为99.33％、94.44％和92.67％,变异系数分别为3.79％、1.66％和1.02％.在一定范围内,聚乙二醇、蔗糖、枸橼酸钠、人白蛋白浓度变化对优化方法测定α1-AT生物活性没有影响.结论 以牛胰蛋白酶作为参考标准品的优化α1-AT生物活性测定方法可用于α1-AT制备工艺中的常规质量控制.
- 祝慈芳吴玮刁武平
- 关键词：Α1抗胰蛋白酶胰蛋白酶发色底物法
