卞炯
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：上海生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 重组人载脂蛋白AⅠ的原核表达及活性检测初探被引量：1
- 2010年
- 目的原核表达人载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ),对其表达进行优化,同时对ApoAⅠ活性检测方法进行初步研究。方法通过构建3种不同的重组质粒来研究以组氨酸(His)6融合蛋白表达、(His)6-pro(前肽)融合蛋白与单目的基因表达之间的差别,其中(His)6-pro-ApoAⅠ质粒中目的基因第3、4、7位密码子进行无义突变。随后采用镍离子柱纯化重组蛋白,间接法测定ApoAⅠ对被内毒素(LPS)攻击的细胞的保护效果来检测其生物活性。结果单目的基因(pET28a-ApoAⅠ)、组氨酸标记的融合蛋白(pET28a-(His)6-ApoAⅠ)以及(His)6-pro(前肽)融合蛋白(pET28a-(His)6-pro-ApoAⅠ)表达量分别为17、40、95mg/L,经镍柱纯化后的重组蛋白经Western blot、分子筛层析以及生物活性检测,表明原核表达的ApoAⅠ为单体蛋白且具有相应的生物学活性。结论原核表达的ApoAⅠ与人血浆提纯的天然ApoAⅠ分子生物性状无明显差异。
- 卞炯何毅明祝慈芳王黎吴玮朱威
- 关键词：原核表达蛋白纯化生物活性
- 人血浆载脂蛋白AⅠ冻干品干热法灭活病毒的效果验证
- 2014年
- 目的采用干热法对纯化的人血浆载脂蛋白AⅠ(apolipoprotein AⅠ,ApoAⅠ)冻干品进行病毒灭活处理,并对灭活效果进行验证。方法将脂包膜病毒伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯(Sindbis)病毒及非脂包膜病毒脑心肌炎(encephalomyocarditis,EMC)病毒按1∶9(v∶v)的比例分别加至3批ApoAⅠ样品中,冻干后于水浴中(100±1)℃加热30 min灭活,分别于加热后5、10、20、30 min取样,检测病毒滴度,绘制病毒灭活动力学曲线,并检测干热法灭活病毒对目的蛋白理化性质及生物活性的影响。结果干热法对ApoAⅠ样品中的脂包膜和非脂包膜病毒均可有效灭活,灭活20 min后,3种指示病毒的滴度均迅速下降;干热法灭活后,冻干品的外观、复溶时间、复溶后澄明度、目的蛋白的平均回收率(95.44%)均符合要求,样品的SDS-PAGE、Western blot图谱、免疫电泳行为、二级结构和生物活性均无显著变化。结论干热法能有效灭活脂包膜和非脂包膜病毒;在ApoAⅠ纯化工艺中采用S/D法和干热法两步病毒灭活步骤,可保证制品的安全性。
- 卞炯何毅明吴玮刁武平朱威
- 关键词：载脂蛋白A冻干品灭活
- 载脂蛋白A-I的研究进展
- 载脂蛋白A-Ⅰ(ApoA-Ⅰ)作为人体血浆HDL分子中载脂蛋白的主要成分，在人体生理和病理过程中发挥着重要的作用。早年的研究表明其具有胆固醇的逆向转运功能，从而对动脉粥样硬化有抵抗与治疗作用。最新研究表明，其还具有其它显...
- 卞炯楼觉人朱威
- 关键词：分离纯化
- 文献传递
- 人血浆载脂蛋白AⅠ的纯化
- 2014年
- 目的 初探大规模纯化人血浆载脂蛋白AⅠ（apolipoprotein A Ⅰ,ApoA Ⅰ）的低成本生产工艺.方法 以人血浆组分Ⅳ为原料,通过等电点沉淀、阴离子层析、低温乙醇沉淀和超滤等步骤纯化ApoA Ⅰ蛋白,并放大实验室纯化方法来纯化ApoA Ⅰ.结果 放大纯化方法生产的ApoA Ⅰ的得率和纯度分别为59.0％和85.6％,经相关方法验证为人血浆ApoAⅠ.结论 实验室方法放大的纯化工艺可纯化ApoA Ⅰ.
- 卞炯祝慈芳何毅明朱威
- 关键词：纯化
