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细胞培养密度对MCF7细胞calpain2和FAK的水解及活性影响被引量：1: 2014年; 目的:探讨细胞培养密度对乳腺癌MCF7细胞钙激活中性蛋白酶2(calpain 2)和焦点黏附蛋白(FAK)的水解及活性的影响。方法:常规培养乳腺癌细胞MCF7,分别以1×106、5×106、1×107个细胞传代于不同的6 cm皿中,培养36 h后,形成不同的培养密度(分别为低密度、正常密度和高密度),裂解细胞,提取蛋白行Western blot检测calpain 2和FAK的表达,用磷酸化抗体检测FAK的Y397位点磷酸化水平;MCF7细胞高密度培养并calpain 2抑制剂处理后,用Western blot法检测FAK水解情况和磷酸化水平。结果:不同密度培养对calpain 2的表达没有明显影响,但可影响calpain 2的水解,培养密度加大,水解程度加强;培养密度也可以影响FAK的水解模式,低密度培养细胞的FAK以较大的水解片段为主,高密度培养的FAK则以较小片段为主,高密度培养细胞FAK Y397磷酸化水平比低密度的低;给予calpain 2特异性抑制剂后,高密度培养细胞FAK大片段增多,小片段减少,其Y397位点的磷酸化水平增高。结论:细胞高密度培养可使MCF7细胞calpain 2的活性增强,FAK的水解程度加大,降低FAK的磷酸化。; 陈腾祥霍建云王宁王金利王晋星一陈妮陈林崔唱张金娟毛大华胡晓霞; 关键词：钙激活中性蛋白酶细胞密度细胞培养

肿瘤微环境与肿瘤细胞转移的研究进展: 肿瘤转移是恶性肿瘤的基本特征和重要标志,也是大多数癌症患者的主要致死原因。肿瘤发生转移是由肿瘤细胞内在的特性改变所决定的,尤其与所处的微环境息息相关。肿瘤微环境是指肿瘤细胞在生长过程中,由肿瘤细胞及细胞外间质相互作用后形...; 陈妮周力洪阳; 关键词：肿瘤微环境转化生长因子趋化因子低氧; 文献传递

不同培养密度及培养方式对肝癌细胞相关干细胞基因表达的研究: 目的：观察肝癌细胞(LM3、HepG2)在不同培养密度以及不同培养方式时干细胞基因的表达，进一步了解肝癌细胞的生活环境对肝癌细胞与肝癌的影响，探讨肝癌发生的分子水平机制，为临床肝癌诊断及治疗提供依据。; 陈妮周力洪阳; 关键词：肝癌细胞微球体 OCT4 NANOG

肿瘤微环境与肿瘤细胞转移的研究进展: 肿瘤转移是恶性肿瘤的基本特征和重要标志,也是大多数癌症患者的主要致死原因。肿瘤发生转移是由肿瘤细胞内在的特性改变所决定的,尤其与所处的微环境息息相关。肿瘤微环境是指肿瘤细胞在生长过程中,由肿瘤细胞及细胞外间质相互作用后形...; 陈妮周力洪阳; 关键词：肿瘤微环境转化生长因子趋化因子低氧

肿瘤微环境与肿瘤细胞转移的研究进展: 肿瘤转移是恶性肿瘤的基本特征和重要标志,也是大多数癌症患者的主要致死原因。肿瘤发生转移是由肿瘤细胞内在的特性改变所决定的,尤其与所处的微环境息息相关。肿瘤微环境是指肿瘤细胞在生长过程中,由肿瘤细胞及细胞外间质相互作用后形...; 陈妮周力洪阳; 关键词：肿瘤微环境转化生长因子趋化因子低氧; 文献传递

不同培养密度及培养方式对肝癌细胞相关干细胞基因表达的研究: 目的:观察肝癌细胞(LM3、HepG2)在不同培养密度以及不同培养方式时干细胞基因的表达,进一步了解肝癌细胞的生活环境对肝癌细胞与肝癌的影响,探讨肝癌发生的分子水平机制,为临床肝癌诊断及治疗提供依据。方法:第一部分:肝癌...; 陈妮周力洪阳; 关键词：肝癌细胞微球体 OCT4 NANOG; 文献传递

钙激活中性蛋白酶-2对整合素β4水解的影响被引量：3: 2015年; 目的:观察乳腺癌细胞系MCF7细胞中,钙激活中性蛋白酶2(calpain-2)对整合素(integrin)β4水解的影响。方法:利用"短发夹"RNA(shRNA)和微小RNA(mirRNA)技术结合的calpain-2基因沉默(gene silencing)慢病毒质粒(GIPZ lentiviral shRNAmir)转染乳腺癌细胞株MCF7,嘌呤霉素筛选稳定沉默calpain-2基因的细胞株,细胞株传4代,用荧光显微镜观察转染效率,用蛋白质印迹(Western blot)实验检测calpain-2基因沉默效率及integrinβ4水解的情况。结果:嘌呤霉素筛选、细胞传4代,荧光显微镜下观察显示转染和筛选后,EGFP表达阳性的MCF7细胞的比例分别达到(95.6±2.6)%(空shRNAmir载体)、(97.1±1.7)%(Calpain-2 shRNAmir1)和(97.7±0.2)%(Calpain-2 shRNAmir 2),差异无统计学意义(P>0.05);Western blot结果显示,基因沉默的MCF7细胞中calpain-2的表达被明显抑制,相对于空shRNAmir载体转染的MCF7细胞,差异有统计学意义(P<0.01),calpain-2的表达下调到21.5%(Calpain-2 shRNAmir 1)和18.8%(Calpain-2 shRNAmir 2),空shRNAmir载体转染的MCF7细胞中calpain-2的表达与未转染的MCF7细胞比较,差异无统计学意义(P>0.05);比较calpain-2基因沉默和空shRNAmir载体转染的MCF7细胞,发现integrinβ4均被水解,水解片段的分子量主要有200 k D、130和95 k D;calpain-2基因沉默后,calpain-2基因沉默MCF7细胞中200 k D的水解片段比空shRNAmir载体转染的MCF7细胞减少(P<0.01)。结论:在乳腺癌细胞MCF7中,calpain-2可能参与integrinβ4的200 k D片段的形成,从而参与调整integrinβ4的构象变化。; 胡晓霞霍建云张金娟潘娅王晋星一陈妮张祥令陈腾祥; 关键词：乳腺肿瘤蛋白水解基因沉默

细胞培养密度对MCF7乳腺癌细胞integrin β4水解的影响被引量：2: 2015年; 目的:研究细胞培养密度对MCF7乳腺癌细胞integrinβ4水解机制。方法:常规培养高密度和低密度MCF7乳腺癌细胞,分别给予钙离子螯合剂和肝素处理,用Western blot检测不同培养密度MCF7细胞integrinβ4的水解情况;用Fluo-3 AM作为钙离子荧光探针,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内钙离子的分布。结果:Western blot检测结果显示,在低密度和高密度培养的MCF7细胞中,integrinβ4的水解模式不同;在高浓度培养的细胞中,200 k D integrinβ4片段产生增多;激光共聚焦扫描显微镜观察发现,低密度培养MCF7细胞中,钙离子的绿色荧光主要成团或颗粒状分布,而且与红色荧光有较多的重合,部分钙离子分布于细胞核内;在高密度培养的细胞中,钙离子在细胞质膜和细胞核中的定位较少;钙离子螯合剂BAPTA-AM处理可使200 k D integrinβ4明显减少;10-6mol/L的肝素能够减少MCF7细胞200 k D水解片段的增多,随着肝素浓度的增高,抑制效果有所增强;相对于BAPTA-AM,10-4mol/L肝素的抑制效应减弱。结论:高密度培养的MCF7细胞中,钙离子从钙库中释放,细胞外内流增多,激活calpain 2,导致200 k D integrinβ4水解片段增多。; 严莉莎霍建云董宇华潘娅王晋星一陈妮臧贵勇胡晓霞陈腾祥; 关键词：钙离子肝素

雌二醇对三阴乳腺癌细胞integrin β4水解作用的影响被引量：3: 2015年; 目的:研究三阴乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞中雌二醇对整合素(integrin)β4水解的促进作用。方法:常规培养MDA-MB-231细胞至指数增长期,分别给予17β-雌二醇、雌激素受体(ER)特异性阻断剂4-羟基他莫西芬(OHT)和G蛋白偶联受体30(GPR30)特异性阻断剂G-15干预30 min,采用蛋白质印迹(Western blot)实验检测钙激活中性蛋白酶2(calpain 2)的表达和integrinβ4水解的情况。结果:17β-estradiol在短时间内可促进MDA-MB-231细胞130和95k D integrinβ4水解片段的产生,促进作用呈浓度依赖方式,而对calpain 2表达没有明显影响;4-OHT不能阻断17β-estradiol对integrinβ4的水解作用,且其本身可促进integrinβ4水解;G-15能阻断17β-estradiol对integrinβ4的水解。结论:在TNBC MDA-MB-231细胞中,17β-estradiol可通过GPR30促进130和95k Dintegrinβ4水解片段的产生。; 陈腾祥严莉莎霍建云张金娟潘娅王晋星一陈妮臧贵勇胡晓霞; 关键词：三阴乳腺癌

肿瘤微环境与肿瘤细胞转移的研究进展: 转移是恶性肿瘤的基本特征和重要标志,也是大多数癌症患者的主要致死原因.肿瘤发生转移是由肿瘤细胞内在的特性改变所决定的,尤其与所处的微环境息息相关.肿瘤微环境是指肿瘤细胞在生长过程中,由肿瘤细胞及细胞外间质相互作用后形成的...; 陈妮周力洪阳; 关键词：恶性肿瘤细胞转移微环境

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陈妮

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