朱富成
- 作品数：8 被引量：3H指数：2
- 供职机构：南京工业大学生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 来源于铜绿假单胞杆菌(Pseudomon asaeruginosa)所产蛋白酶PT121克隆表达及其在小肽合成上的应用被引量：2
- 2015年
- 【目的】基于前期筛选到的P.aeruginosa PT121所产有机溶剂耐受性蛋白酶,本研究对该蛋白酶进行克隆表达,研究了重组蛋白的酶学性质及小肽合成上的应用。【方法】参考文献中报道的相似蛋白酶pseudolysin设计引物从菌株PT121基因组中克隆到耐有机溶剂蛋白酶PT121基因las B。构建诱导表达重组质粒p ET22b-las B,于大肠杆菌中进行表达。考察蛋白酶PT121酶学性质及小肽合成上的应用。【结果】序列分析表明las B基因编码信号肽、前肽及成熟肽3个部分,成熟肽部分含有301个氨基酸,分子量约33 k Da,属于金属蛋白酶M4家族。通过破碎条件优化,一步法制备得到较为纯净的重组蛋白酶PT121,其比活力达7700 U/mg,该酶呈现了较高的热稳定性,p H稳定性及溶剂耐受性,与野生菌P.aeruginosa PT121所产蛋白酶性质一致。在50%DMSO体系中高效催化合成了多种小肽,其中阿斯巴甜前体(Cbz-Asp-Phe-NH2)产率高达91%。【结论】蛋白酶PT121基因在大肠杆菌中克隆表达为进一步研究相关催化机理及分子改造奠定了基础。
- 朱富成庄宇何冰芳
- 关键词：异源表达有机溶剂耐受性
- 耐有机溶剂蛋白酶的突变体
- 本发明属于基因工程研究领域，涉及一种耐有机溶剂蛋白酶的突变体。本发明所述的五个突变改造的蛋白酶是由具有氨基酸序列为SEQIDNo.1的来源于铜绿假单胞菌的蛋白酶中氨基酸残基取代而产生的，所述的氨基酸突变包括第46、224...
- 何冰芳庄宇朱富成吴斌
- 蜡样芽胞杆菌蛋白酶的克隆及在枯草芽胞杆菌系统中的高效表达被引量：2
- 2015年
- 基于来源于Bacillus cereus WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶WQ的液相色谱-双质谱(LC-MS-MS)分析结果,设计引物,克隆耐有机溶剂蛋白酶WQ的基因,测序分析表明该蛋白酶的开放阅读框(ORF)大小为1 701 bp,编码566个氨基酸,其中含有信号肽(28个氨基酸)、前肽(220个氨基酸)及成熟肽序列(含954 bp编码318个氨基酸),相对分子质量约为3.7×104。将不带自身信号肽的蛋白酶基因apr WQ插入穿梭质粒p MA5中,构建了表达载体p MA5/apr WQ。该表达载体导入枯草芽胞杆菌WB600中获得阳性重组子WB600-p MA5/apr WQ,通过优化培养基成分以及培养条件,重组子发酵产蛋白酶体积酶活达到17 400 U/m L,约为高产野生菌产酶量的5倍。重组蛋白酶在多种有机溶剂(体积分数为50%)中表现出了良好的耐受性,验证了重组菌表达的蛋白酶与来源于B.cereus WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶性质一致,该耐有机溶剂蛋白酶的高效表达为进一步发挥其高效生物催化作用等实际应用奠定了基础。
- 承龙飞朱富成刘可可何冰芳
- 关键词：枯草芽胞杆菌发酵优化
- 耐有机溶剂蛋白酶的突变体
- 本发明属于基因工程研究领域，涉及一种耐有机溶剂蛋白酶的突变体。本发明所述的五个突变改造的蛋白酶是由具有氨基酸序列为SEQIDNo.1的来源于铜绿假单胞菌的蛋白酶中氨基酸残基取代而产生的，所述的氨基酸突变包括第46、224...
- 何冰芳庄宇朱富成吴斌
- 文献传递
- 基于分子动力学技术分析耐有机溶剂蛋白酶PT121的结构稳定机制
- 朱富成庄宇何冰芳
- 关键词：PSEUDOMONASAERUGINOSA分子动力学模拟
- 一种耐有机溶剂蛋白酶PT121或其突变体高效合成苄氧羰基阿斯巴甜的工艺
- 本发明公开了一种耐有机溶剂蛋白酶PT121或其突变体高效合成苄氧羰基阿斯巴甜的工艺，具体为：耐有机溶剂蛋白酶PT121或其突变体催化苄氧羰基天冬氨酸和苯丙氨酸甲酯或其盐酸盐酶法合成苄氧羰基阿斯巴甜。其中耐有机溶剂蛋白酶P...
- 何冰芳朱玲朱富成刘可可吴斌柏中中
- 文献传递
- 来源于蛋白酶M4家族的Thermolysin及蛋白酶PT121稳定性分子机理研究
- 酶作为生物大分子活性物质，以其独特的催化性能，已被广泛应用于化工、食品、环境等领域。但其在工业应用领域常具有不稳定性的特点，尤其是在高温、有机溶剂中很容易失活，限制了其工业用途。来源于极端环境的微生物为了适应环境的需要常...
- 朱富成
- 关键词：稳定性分子机理嗜热蛋白酶
- ARTP诱变选育嗜热蛋白酶高产菌
- 薛刚朱富成何冰芳
- 关键词：嗜热蛋白酶地衣芽孢杆菌发酵优化
