应向贤
- 作品数：74 被引量：84H指数：5
- 供职机构：浙江工业大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省重大科技专项基金国家科技型中小企业技术创新基金更多>>
- 相关领域：化学工程轻工技术与工程生物学理学更多>>
- 荧光假单胞菌短链脱氢酶的克隆、表达及酶学性质分析
- 2011年
- 为了研究荧光假单胞菌中短链脱氢酶的生理角色和催化特性,从荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens GIM1.49基因组DNA克隆表达了一个短链脱氢酶的编码基因pfd,并分析了该基因产物的酶学性质。基因pfd全长684 bp,编码227个氨基酸,推算分子量为24.2 kDa。将携带短链脱氢酶基因的重组质粒pET28b-pfd转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,得到了28 kDa的表达产物。重组荧光假单胞菌短链脱氢酶(PFD)能氧化4-氯-3-羟基丁酸乙酯、1-苯乙醇、苯甲醇、仲丁醇和还原4-氯-乙酰乙酸乙酯、2-溴-苯乙酮、4-溴-苯乙酮等底物。以4-氯-3-羟基丁酸乙酯为底物时活力最高,Km值为186.40 mmol/L,Vmax为89.56 U/mg。氧化4-氯-3-羟基丁酸乙酯时,最适反应温度和pH分别为12℃和10.5,倾向于利用NAD+作辅酶;而还原4-氯-乙酰乙酸乙酯时,最适温度和pH为24℃和8.8,倾向于利用NADPH作辅酶。重组PFD能耐受50%(V/V)的甲醇等有机助溶剂,Ca2+(1 mmol/L)和EDTA(5 mmol/L)对其酶活有一定的促进作用。上述结果表明,重组PFD是一个新型的短链脱氢酶,其代谢角色推测与卤代次级醇的氧化降解有关。
- 薛群应向贤杨池汪钊
- 关键词：荧光假单胞菌酶学性质
- 化学酶法合成D-泛解酸内酯的研究进展被引量：10
- 2016年
- 泛酸俗称维生素B5,是辅酶A合成的前体,而D-泛解酸内酯是D-泛酸合成的前体。D-泛解酸内酯的化学合成是以甲醛和异丁醛为起始原料,经醛缩合、腈化及内酯化等反应生成DL-泛解酸内酯,再经选择性拆分得到D-泛解酸内酯。化学法与酶法相结合有助于高效、绿色地合成高光学纯度的D-泛解酸内酯。内酯水解酶催化混旋泛解酸内酯的选择性拆分已经成功地实现了工业生产。对羰基还原酶、醇脱氢酶和羟基腈裂合酶等在化学酶法合成D-泛解酸内酯中的最新进展进行了综述。
- 汪钊黄美娟高亮应向贤赵嫚孙杰
- 关键词：D-泛解酸内酯氧化还原酶
- 一种三酶共表达重组菌及其在(S)-香茅醇合成中的应用
- 本发明公开了一种三酶共表达重组菌及其合成(S)‑香茅醛中的应用，所述重组菌是将老黄酶NemR‑PS、醇脱氢酶YsADH和葡萄糖脱氢酶BmGDH<Sub>M6</Sub>的编码基因共同导入宿主细胞构建而成。本发明利用共表达...
- 应向贤周雪婷王崎舟
- 文献传递
- 手性含氮饱和杂环醇的化学法与生物酶法合成被引量：1
- 2015年
- 手性含氮饱和杂环醇是一类重要的有机化合物,是许多合成药物和天然活性物质的结构组成单元。综述了哌啶醇、奎宁醇及吡咯烷醇等手性醇的化学及生物酶法合成进展,重点介绍了生物酶法在制备手性哌啶醇、奎宁醇及吡咯烷醇中的应用。
- 应向贤范雅君黄美娟汪钊
- 关键词：哌啶醇
- 一种果蔬发酵同时制备营养型果粉和白酒或酒精的方法
- 本发明提供了一种果蔬发酵同时制备营养型果粉和白酒或酒精的方法，所述方法流程如下：水果→清洗→榨汁酶解→离心过滤→果汁调配→酒精发酵同时酶脱苦处理→酵母自溶→酒精蒸馏→喷雾干燥。本发明以低值、残次柑桔、苹果，西瓜、葡萄、番...
- 汪钊魏春应向贤章银军
- 产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及发酵过程研究被引量：18
- 2011年
- 从不同泡菜中筛选到6株产γ-氨基丁酸(GABA)的乳酸菌,其中A号乳酸菌产量相对较高,GABA产量为1.261 g/L。A号菌株经16S rDNA鉴定为植物乳杆菌,初步命名为Lactobacillus plantarum WZ011。通过单因素和正交设计方法对其发酵培养基进行优化,得到最佳培养基成分(g/L):葡萄糖13,酵母膏5,谷氨酸钠12,盐酸吡哆醇0.15,无水乙酸钠2,MgSO4.7H2O 0.02,MnSO4.4H2O 0.001,FeSO4.7H2O 0.001,NaCl 0.001。Lactobacillus plantarum WZ011发酵动力学曲线表明GABA的发酵过程大致分为菌体生长与产物生成2个阶段。降低培养基的氮源含量和添加盐酸吡哆醇,谷氨酸钠的利用率提高至99%且GABA生产速率提高了2倍多。优化后GABA最高产量可达5.814 g/L,比优化前提高了79%,且提前了48 h进入GABA生产稳定期。
- 周青魏春应向贤章银军汪钊
- 关键词：Γ-氨基丁酸植物乳杆菌发酵
- 一种重组融合酶及其在乙醛酸甲酯合成中的应用
- 本发明公开了一种重组融合酶及其在合成乙醛酸甲酯中的应用，所述重组融合酶是将乙醇酸氧化酶、过氧化氢酶和血红蛋白通过连接肽连接构成。本发明以乙醇酸氧化酶突变体、过氧化氢酶和血红蛋白的融合酶为生物催化剂，催化200mM乙醇酸甲...
- 应向贤王灿张连春陈梁赵嫚白彦兵汪钊
- 文献传递
- 蜡样芽孢杆菌烯醇还原酶基因的克隆、表达和酶学性质研究被引量：2
- 2015年
- 从蜡样芽孢杆菌WZY004基因组DNA中克隆获得了烯醇还原酶基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶形式过量表达。重组烯醇还原酶经Ni-NTA亲和层析分离纯化后,对其酶学性质进行了详细表征。该重组酶经SDS-PAGE检测为单一条带,其分子量为38.2 k D。该酶最适p H和温度分别为7.5与60°C。对氧代异佛尔酮的Km和Vmax值分别为1.83 mmol/L与1.13 U/mg。底物特异性分析表明该酶对柠檬醛、2-甲基-2-戊烯醛和反式-2-癸烯醛均有较高活力,其中对柠檬醛的比酶活高达1.33 U/mg。
- 应向贤李国四范雅君胡宝军汪钊
- 关键词：蜡样芽孢杆菌酶学性质
- 脂肪酶选择性水解酰胺工艺条件的初步研究
- 本文对脂肪酶Nov435选择性水解拆分2-氯-N-(1-(4-氯苯基)乙基)乙酰胺的工艺进行了研究。通过对反应介质、转化时间、底物浓度、温度和转速等影响因素的考察,得到较优的拆分工艺:反应介质为含水量为0.2％的甲苯,酶...
- 曾玲胡蓉应向贤章银军汪钊
- 关键词：乙酰胺脂肪酶水解反应反应介质底物浓度
- 文献传递
- L-异亮氨酸产生菌的代谢改造与发酵控制策略被引量：3
- 2012年
- L-异亮氨酸是人体必须氨基酸,广泛应用于医药、食品、化妆品等领域。本文综述了谷氨酸棒杆菌和大肠杆菌合成L-异亮氨酸的调控机制,重点阐述了代谢工程技术在L-异亮氨酸产生菌改造中的应用,并讨论了L-异亮氨酸发酵中的主要影响因素.
- 杨池应向贤熊斌宋清清汪钊
- 关键词：L-异亮氨酸代谢工程发酵条件
