吕超
- 作品数：14 被引量：17H指数：2
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- NANOG基因表达下调对急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡的影响
- 2013年
- 目的探讨NANOG基因在人急性T淋巴细胞白血病（WALL）细胞株中的表达及下调该基因表达对细胞凋亡的影响及可能机制。方法利用RT-PCR及Westernblot方法检测T-ALL细胞系MOLT-4、CCRF—HSB2、Jurkat细胞NANOG基因表达情况。通过构建携带NANOG特异性shRNA的慢病毒载体包装病毒颗粒，感染MOLT-4细胞后经分选获得稳定表达株，并在基因及蛋白水平检测NANOG干扰效率。用流式细胞术检测各组细胞早期凋亡（Annexin VV7-AAD-）及晚期凋亡（Annexin V＋/7-AAD＋）率，并利用实时定量PCR技术检测凋亡相关基因的表达情况。结果MOLT-4和CCRF—HSB2细胞NANOGmRNA及蛋白表达阳性。构建慢病毒干扰质粒pLB．shNANOG-1、pLB—shNANOG-2及pLB．shRNA对照，包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达（1．83～3．12）×10^8IU／ml。病毒感染MOLT-4细胞后经实时定量PCR及Wesmmblot方法证实两种shRNA可有效下调NANOGmRNA及蛋白的表达。流式细胞术检测显示shNANOG．1及shNANOG。2组细胞早期凋亡率分别为（8．06±1．61）％及（5．67±1．59）％，较MOLT-4组[（1．13±0．40）％]及对照shRNA组[（1．15±0．49）％]明显升高（P〈0．05）。而各组细胞晚期凋亡率无明显变化（P〉0．05）。实时定量PCR法证实shNANOG-1及shNANOG．2转染的细胞中TP53、PMAIPl、CASP9等基因表达较未转染组及转染非特异shRNA组显著升高（P〈0．05），而Bcl-2基因表达则明显下降（P〈0．05）。结论NANOG在多种人T-ALL细胞系中表达，下调NANOG的表达可引发T_ALL细胞凋亡。
- 曹江李莉吕超孟凡静周俊陈翀曾令宇李振宇徐开林
- 关键词：基因NANOG白血病淋巴样细胞凋亡
- NANOG基因在急性淋巴细胞白血病细胞的表达及其慢病毒干扰载体的构建被引量：1
- 2014年
- 本研究探讨NANOG基因在人急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞中的表达并构建特异性干扰NANOG表达的慢病毒载体。利用RT-PCR及Western blot技术检测MOLT-4、CCRF-HSB2、Jurkat等ALL细胞系及在我院住院治疗的15例新诊断的ALL患者骨髓细胞中NANOG的表达情况。通过构建携带NANOG特异性shRNA的慢病毒载体包装病毒颗粒,感染MOLT-4细胞后经分选获得稳定表达株,并在基因及蛋白水平检测NANOG干扰效率。结果表明,MOLT-4细胞、CCRF-HSB2细胞以及33.3%的ALL患者中可见NANOG基因mRNA的扩增产物及蛋白表达。测序表明,ALL患者及MOLT-4、CCRF-HSB2细胞主要表达NANOGP8 mRNA。构建慢病毒干扰质粒pLB-shNANOG-1、pLB-shNANOG-2及pLB-shcontrol,包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达(1.83-3.12)×108IU/ml。病毒感染MOLT-4细胞后经流式细胞仪分选获得GFP+细胞。实时定量PCR及Western blot证实,两种shRNA可有效下调NANOG基因及蛋白的表达。结论:MOLT-4细胞、CCRF-HSB2细胞以及部分ALL患者骨髓细胞中存在NANOG的表达,其主要为NANOGP8 mRNA的转录。成功构建了特异性干扰NANOG表达的慢病毒载体,获得可稳定下调NANOG表达的MOLT-4细胞株。
- 曹江孟凡静李莉吕超周俊程海陈伟陈翀徐开林
- 关键词：NANOG急性淋巴细胞白血病慢病毒
- AMPK激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸对U937细胞增殖、分化和凋亡的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨单磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPK）激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸（AICAR）对急性单核细胞白血病细胞系U937细胞增殖、分化和凋亡的影响，并分析其可能的作用机制。方法用不同浓度AICAR处理U937细胞24、48h，用CCK-8法绘制细胞增殖曲线；以细胞形态学、AnnexinV／7-氨基放线菌素D（7-AAD）双标记等分析细胞凋亡情况；用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CDllb表达。用实时定量PCR检测Bcl—xL、Bax、Bim、caspase-3mRNA表达的变化。结果AICAR对U937细胞增殖具有显著抑制作用，且作用呈时间和剂量依赖性，24、48h的半数抑制浓度（IC50）值分别为1．1和0．9mmoL／L。1．0mmol／LAICAR作用U937细胞24h，流式细胞术检测结果显示CDllb阳性细胞率无明显变化（P〉0．05），但细胞形态学出现典型的凋亡特征；AnnexinV／7-AAD标记的阳性细胞升高，细胞凋亡率为（6．81±1．16）％，高于对照组的（2．744-0．32）％（P〈0．05）。1．0mmol／LAICAR诱导U937细胞凋亡过程中Bcl—xL、Bax表达无明显变化，Bim、caspase-3表达显著增加（P〈0．05）。结论AICAR能有效抑制U937细胞增殖及促进细胞凋亡，但对U937细胞向髓系分化无明显影响，其促凋亡机制与上调Bim与caspase-3基因表达有关。
- 吕超曹江孟凡静曾令宇陈翀吴庆运徐开林
- 关键词：U937细胞
- Blimp-1条件性基因敲除小鼠模型的建立
- 陈翀宋旭光陆小云王力吕超王曼徐开林
- 关键词：BLIMP-1基因敲除基因型
- 携带GST标签的小鼠Blimp-1基因表达载体的构建及其在原核细胞中的表达
- 目的:本研究构建携带小鼠Blimp-1基因的重组表达载体,检测GST-Blimp-1融合蛋白在BL21细胞的表达.方法:利用RT-PCR扩增小鼠Blimp-1基因,将其克隆至pCR-blunt载体中,酶切制备Blimp-...
- 宋旭光陈翀张焕新吴庆运潘彬陆小云吕超李振宇曾令宇徐开林
- 关键词：BLIMP-1
- 靶向AATF基因shRNA表达载体的构建及其稳定表达的白血病U937细胞系的建立被引量：2
- 2013年
- 本研究旨在构建靶向AATF基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人白血病U937细胞系。根据GenBank数据库提供的AATF mRNA序列,以228～249、303～324、443～464位序列作为RNA干扰位点,排除同源可能,合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆至经BamHⅠ、HindⅢ双酶切线性化的pSilencer 3.1人H1启动子干扰载体中,利用测序鉴定所构建的重组载体是否正确,经电穿孔将3个重组载体(pSA-1、pSA-2、pSA-3)转染人白血病U937细胞系,G418(500 mg/L)有限稀释法持续筛选8周后,扩增获得稳定表达的细胞系;RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染细胞系的AATF mRNA和AATF蛋白表达。结果表明,AATF干扰序列及读码框完全正确。稳定转染细胞AATF mRNA表达下调,AATF蛋白表达量下降(P<0.05)。结论:成功地构建AATF shRNA真核表达载体及AATF表达稳定抑制的白血病U937细胞系,为以AATF基因为靶点的人白血病进一步研究奠定了实验基础。
- 吕超曹江孟凡静曾令宇潘彬陈翀吴庆运宋旭光李振宇潘秀英徐开林
- 关键词：短发夹RNA白血病
- NANOG基因对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及细胞周期的影响
- 2014年
- 目的 探讨NANOG基因在人类急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞株中的表达,并研究下调该基因表达对ALL细胞增殖和细胞周期的影响以及可能机制.方法 选取ALL的MOLT-4、CCRF-HSB2、Jurkat 3种细胞系为研究对象.利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot技术检测MOLT-4、CCRF-HSB2、J urkat细胞系中NANOG的表达情况.通过构建携带NANOG基因的特异性shRNA的慢病毒载体包装病毒颗粒（pLB-shNANOG-1和pLB-shNANOG-2）,该病毒感染MOLT-4细胞后,经分选获得稳定表达株作为实验组：shNANOG-1组和shNANOG-2组;以空质粒（pLB-sh control）感染的细胞和正常MOLT-4细胞分别作为阴性对照组和空白对照组.在基因及蛋白水平下,检测各组NANOG的干扰效率.采用CCK-8法及流式细胞仪检测实验组和对照组细胞增殖能力及细胞周期的变化,并利用实时定量PCR技术检测p53通路相关基因的表达变化.结果 包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达（1.83～3.12）×108 IU/mL.2种shRNA可有效下调病毒感染MOLT-4细胞的NANOG基因及蛋白的表达.CCK-8法检测显示shNANOG-1及shNANOG-2组细胞在不同时间点其光密度值（OD）较空白对照组及阴性对照组下降,在培养72 h后最为明显,实验组与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.001）.细胞周期检测显示,shNANOG-1及shNANOG-2组细胞在G0/G1期细胞比例较空白以对照组及阴性对照组高（P＜0.001）,但两组细胞在S期细胞比例较空白对照组及阴性对照组低（P＜0.01）,而在G2/M期细胞比例在各组间差异无统计学意义（P＞0.05）.实时定量PCR法证实shNANOG-1及shNANOG-2组细胞中TP53及CDKN1A基因表达上调,而MDM2及CCND1基因表达下调,实验组与对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 NANOG在部分人类ALL细胞系中有表达,下调NANOG后可通过MDM2-TP53-CDKN1A通路抑制白血病细胞的增殖,并使细胞阻滞于G0/G1期.
- 孟凡静李莉曹江吕超周俊程海陈伟陈翀徐开林
- 关键词：慢病毒感染
- 免疫性血小板减少症患者白介素-22及相关CD4＋T细胞亚群的表达被引量：10
- 2012年
- 本研究通过检测初治的成人免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中白介素-22(IL-22)及相关CD4+T细胞亚群的表达,探讨其在ITP发病机制中的作用。以我院住院治疗的40例新诊断的急性ITP患者及40例健康对照者为研究对象,应用ELISA法检测外周血血浆中IL-22的含量,采用流式细胞术检测Th1、Th17、Th22细胞亚群的比例,并分析其相关性。结果表明,新诊断的ITP患者血浆中IL-22的含量为(364.12±94.22)pg/ml,显著高于健康对照者(P<0.001);ITP患者外周血Th1细胞比例为(18.92±6.03)%,Th22细胞比例为(2.28±0.51)%,显著高于健康对照者(P<0.05);且ITP患者血浆IL-22水平与Th1和Th22细胞比例之间存在正相关(Th1:r=0.42,P=0.022;Th22:r=0.40,P=0.030);而ITP患者Th17细胞比例与健康对照者比较无明显差异,且与IL-22水平无相关性。结论:成人ITP患者外周血中IL-22水平明显升高,且与Th1、Th22细胞比例之间密切相关,提示IL-22与Th1和Th22细胞在ITP的发病中可能起着协同作用,而Th17细胞可能与ITP的发病无关。
- 曹江李莉陈翀吕超孟凡静曾令宇李振宇潘秀英徐开林
- 关键词：免疫性血小板减少症白细胞介素-22CD4+T细胞亚群TH1细胞TH22细胞
- Blimp-1在小鼠骨髓移植后GVHD中的作用
- 宋旭光陈翀马莎吕超王曼徐开林
- NANOG基因对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及细胞周期的影响
- 目的探讨NANOG基因在人急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞株中的表达,研究下调该基因的表达对细胞增殖和细胞周期的影响以及可能机制。方法选取3种急性淋巴细胞白血病细胞系MOLT-4、CCRF-HSB2、Jurkat为研究对...
- 曹江孟凡静李莉吕超周俊程海陈伟陈翀徐开林
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