曹江
- 作品数：99 被引量：170H指数：7
- 供职机构：徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- Blimp-1在小鼠异基因造血干细胞移植后对GVHD的影响
- 陈翀宋旭光张焕新曹江潘彬安立才刘凯歌徐开林
- 关键词：BLIMP-1异基因造血干细胞移植GVHD
- CD47在初诊正常核型急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义被引量：3
- 2017年
- 目的 探讨CD47在初诊正常核型急性髓系白血病（AML）患者中的表达水平及临床意义.方法 选取137例初诊正常核型AML患者及3名健康志愿者.采用流式细胞术及实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）对健康志愿者骨髓造血干细胞（HSC）和造血祖细胞（MPP）及AML患者骨髓单个核细胞（MNC）和白血病干细胞（LSC,Lin-CD34＋CD38-CD90-）的CD47表达水平进行检测;采用基因组分析平台检测患者FMS样酪氨酸激酶3内部串联重复（FLT3-ITD）.采用超高速流式分选系统分选CD34＋CD38-CD47lo和CD34＋CD38-CD47hi细胞.将两组细胞均用MethoCult H4445培养液培养接种于含有琼脂糖的甲基纤维素板,12 d后计数MPP集落形成单位（CFU）,同时将1＆#215;105个CD34＋CD38-CD47lo和CD34＋CD38-CD47hi细胞分别移植到经280 cGy照射的NSG（NOD-SCID IL-2Rγnull）小鼠,8周后处死小鼠,流式细胞术检测人CD45＋细胞比例.结果 CD47的表达在初诊正常核型AML患者中高于健康志愿者,CD47在AML各法、美、英协作组（FAB）亚型中均有表达,相对表达量比较差异无统计学意义（F=0.545,P〉0.05）.137例患者中CD34＋CD38-CD47hi 37例,其中17例（46%）FLT3-ITD阴性,20例（54%）为FLT3-ITD阳性;CD34＋CD38-CD47lo的患者100例,其中63例（63%）FLT3-ITD阴性,37例（37%）FLT3-ITD阳性,CD34＋CD38-CD47hi与CD34＋CD38-CD47lo患者相比较,FLT3-ITD阳性率差异无统计学意义（χ2=3.79,P〉0.05）.将FACS分选的CD34＋CD38-CD47lo和CD34＋CD38-CD47hi接种于含有琼脂糖的甲基纤维素板12 d后,仅CD34＋CD38-CD47lo细胞可以形成CFU.NSG小鼠移植实验显示CD34＋CD38-CD47lo细胞可重建造血,CD34＋CD38-CD47hi植入失败.结论CD34＋CD38-CD47hi富集LSC,可作为AML患者化疗后微小残留病的监测指标.
- 程海曹江陈伟齐昆明闫志凌徐开林
- 关键词：髓样急性CD47集落形成单位测定CD47
- 基因工程Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨输注慢病毒载体介导的小鼠基因工程调节性T淋巴细胞（Treg细胞）对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病（GVHD）及移植物抗白血病（GVL）效应的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将小鼠叉状头螺旋转录因子（Foxp3）基因转导入Balb/c小鼠的CD4＋CD25-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.以Balb/c小鼠为供者.C57BL/6小鼠为受者,进行异基因骨髓移植,移植当天受者接受X线直线加速器全身照射.用随机数字表法将受者分为5组,每组10只.（1）单纯照射组：经受者尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2 ml;（2）白血病对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋C57BL/6小鼠T淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞株（EL4细胞）500个;（3）移植对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个;（4）工程Treg组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个＋基因工程Treg细胞5×106个;（5）空载体对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个＋空载体转导的CD4＋CD25-T淋巴细胞5×106个.每天观察受者存活情况;记录GVHD及白血病的发生情况;各组均于小鼠濒死前取其肝脏、小肠、皮肤、脾脏等组织,进行病理学观察;取长期存活（超过60 d）受者的骨髓细胞,检测嵌合情况.结果 单纯照射组、白血病对照组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为（10.3±1.5）d、（20.7±1.9）d、（26.0±4.3）d、（49.0±17.7）d和（24.4±4.1）d,工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组,差异有统计学意义（P＜0.05）.白血病对照组小鼠肝、脾组织病理切片均存在白血病细胞浸润表现,移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片存在GVHD病理改变,而工程Treg组长期存活小鼠各组织病理切片结构基本正常,
- 曹江李莉陈翀曾令宇李振宇程海徐开林
- 关键词：移植物抗宿主病移植物抗白血病
- AATF-Che1超家族基因原核表达及其融合蛋白纯化
- 2014年
- 目的 体外构建抗凋亡转录因子（AATF）-Che1重组蛋白原核表达载体pGEx-4T-1-AATF-Che1,优化pGEX-4T-1-AATF-Che1重组载体原核诱导表达条件,并获得可溶性的纯化谷胱甘肽巯基转移酶（GST）融合蛋白.方法 采用聚合酶链反应（PCR）法从pGEX-4T-1-AATF重组质粒扩增出AATF-Che1基因,将其与原核表达载体pGEX-4T-1双酶切后,回收目的基因片段.通过T4连接酶定向连接AATF-Che1基因和线性化原核表达载体pGEX-4T-1,获得重组蛋白AATF-Che1原核表达质粒pGEX-4T-1-AATF-Che1.将构建正确的表达质粒转化入大肠埃希菌感受态细胞BL21,并采用诱导剂异丙基硫代β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白AATF-Che1的表达.考察不同诱导剂IPTG浓度、诱导时间和诱导温度对重组蛋白表达量及表达方式的影响,从而对诱导条件进行优化.采用谷胱甘肽琼脂糖凝胶珠对可溶形式的GST融合蛋白进行纯化,并采用Western蛋白免疫印记（WB）法鉴定获得的纯化蛋白.结果 原核表达质粒pGEX-4T-1-AATF-Che1的酶切、PCR鉴定结果及测序结果均正确;IPTG诱导蛋白在约65 kD处出现了1条新的蛋白条带,即AATF-Che1与GST的融合蛋白.不同的诱导时间及不同的IPTG浓度条件下,诱导融合蛋白的量均未见明显变化;37℃诱导时,重组蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中,而16℃诱导时,融合蛋白可溶性地存在于上清液中.最终成功获得AATF-Che1可溶性纯化的融合蛋白,且WB法鉴定其抗原性良好.结论 体外成功构建AATF-Che1基因重组蛋白原核表达载体pGEX-4T-1-AATF-Che1,寻找到优化的重组载体原核诱导表达条件,并获得了大量可溶形式纯化的GST融合蛋白,为进一步研究AATF-Che1超家族基因在肿瘤中的作用奠定了基础.
- 周俊曹江孟凡静冯浩潘秀英吴庆运陈翀牛铭山徐开林
- 关键词：原核表达
- 鼠基因工程Treg的构建及鉴定
- ＜正＞目的:制备慢病毒载体为基础的鼠基因工程调节性T细胞（Treg）,检测其表型变化,并观察其增殖能力及免疫抑制能力。方法:构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序列（IRES）和绿色荧光蛋白基因（GFP）的双顺反子...
- 曹江徐开林陈翀程海曾令宇
- 文献传递
- 26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响及凋亡机制的研究
- 2015年
- 目的 探讨26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖及细胞凋亡的影响,并分析其作用机制.方法 无菌条件下对Jurkat细胞与RS4;11细胞进行培养,根据有无b-AP15处理,将其分为4组：①Jurkat细胞实验组;②Jurkat细胞对照组;③RS4;11细胞实验组;④RS4;11细胞对照组.其中,Jurkat细胞实验组与RS4;11细胞实验组采用浓度分别为0.05,0.10,0.50,1.00,5.00 μmol/L b-AP15处理24,48 h;Jurkat细胞对照组与RS4;11细胞对照组采用RPMI 1640培养基进行同步培养.采用CCK-8法绘制4组细胞增殖曲线;采用Annexin Ⅴ-别藻蓝蛋白（APC）/7-氨基放线菌素D（7-AAD）双标记流式细胞术检查4组细胞凋亡情况;采用流式细胞术检测细胞4组细胞周期分布情况;采用实时定量PCR检测4组细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2相关Ⅹ蛋白（Bax）基因、B细胞淋巴瘤/白血病（Bcl）-2基因、Ⅹ连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、周期素依赖性激酶（CDK）1基因及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3基因mRNA表达水平.结果 ①b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖均具有抑制作用,且该抑制效应呈时间与剂量依赖性;Jurkat细胞经b-AP15处理24,48 h后,半数抑制浓度（IC50）分别为（1.52±0.35）μmol/L与（0.54±0.01） μmol/L,RS4;11细胞经b-AP15处理24,48 h后IC50分别为（0.97±0.02）μmol/L与（0.08±0.03）μmol/L.②使用浓度为1.5 μmol/L b-AP15处理Jurkat细胞实验组后,其与Jurkat细胞对照组相比细胞凋亡率显著增高,且差异有统计学意义（P＜0.001）;使用浓度为1.0 μmol/Lb AP15处理RS4;11细胞实验组后,其与RS4;11细胞对照组相比细胞凋亡率亦显著增加,且差异亦有统计学意义（P＜0.001）;且Jurkat细胞与RS4;11细胞经b-AP15处理48 h后,与处理24 h后者相比细胞凋亡率增高,且差异均有统计学意义（t=11.887,7.449;P＜0.001）.③与Jurkat细胞对照组相比,使用浓度为1.5 μmol/L b-AP15处理Jurkat细胞实验组24 h后,Jurkat细胞周
- 周俊曹江孟凡静冯浩徐开林
- 关键词：蛋白酶抑制药细胞周期JURKAT细胞RS4
- 长春瑞滨上调小鼠尾静脉血管内皮细胞Toll样受体4的表达
- 2012年
- 背景:Toll样受体4除与抗感染免疫有关外,在心肌梗死、脑梗死等组织损伤和自身免疫病等非感染性炎症反应中也发挥着重要作用。目的:观察长春瑞滨对小鼠尾静脉血管内皮细胞Toll样受体4表达的影响。方法:取20只BALB/c小鼠,随机分为实验组和对照组,实验组尾静脉注射长春瑞滨,对照组注射生理盐水。结果与结论:注射后48h,实验组小鼠尾静脉血管出现内皮细胞脱落、血栓形成和炎细胞浸润,损伤部位内皮细胞高表达Toll样受体4;对照组小鼠尾静脉血管无明显损伤表现,血管内皮细胞Toll样受体4阴性或弱表达。表明长春瑞滨上调了小鼠尾静脉血管内皮细胞Toll样受体4表达,提示Toll样受体4可能参与了长春瑞滨致静脉血管内皮损伤的发生过程。
- 钱韦韦陈翀曹江高立艳周莹谭迎春李振宇
- 关键词：TOLL样受体4炎症
- 靶向AATF基因shRNA表达载体的构建及其稳定表达的白血病U937细胞系的建立被引量：2
- 2013年
- 本研究旨在构建靶向AATF基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人白血病U937细胞系。根据GenBank数据库提供的AATF mRNA序列,以228～249、303～324、443～464位序列作为RNA干扰位点,排除同源可能,合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆至经BamHⅠ、HindⅢ双酶切线性化的pSilencer 3.1人H1启动子干扰载体中,利用测序鉴定所构建的重组载体是否正确,经电穿孔将3个重组载体(pSA-1、pSA-2、pSA-3)转染人白血病U937细胞系,G418(500 mg/L)有限稀释法持续筛选8周后,扩增获得稳定表达的细胞系;RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染细胞系的AATF mRNA和AATF蛋白表达。结果表明,AATF干扰序列及读码框完全正确。稳定转染细胞AATF mRNA表达下调,AATF蛋白表达量下降(P<0.05)。结论:成功地构建AATF shRNA真核表达载体及AATF表达稳定抑制的白血病U937细胞系,为以AATF基因为靶点的人白血病进一步研究奠定了实验基础。
- 吕超曹江孟凡静曾令宇潘彬陈翀吴庆运宋旭光李振宇潘秀英徐开林
- 关键词：短发夹RNA白血病
- 慢病毒介导的人B区缺失凝血因子Ⅷ在NOD/SCID小鼠体内表达
- ＜正＞目的:在动物体内实验水平观察携带人B区缺失凝血因子Ⅷ的慢病毒载体是否能介导NOD/SCID小鼠表达一定水平的人Ⅷ因子,并观察Ⅷ因子能否长期稳定表达。方法:慢病毒转移质粒pXZ208BDDhFⅧ及其对照质粒pXZ20...
- 陈翀徐开林鹿群先程海曹江
- 文献传递
- 不同方案糖皮质激素联合小剂量利妥昔单抗治疗成人原发免疫性血小板减少症的疗效比较
- 目的:比较不同方案糖皮质激素联合小剂量利妥昔单抗治疗成人原发免疫性血小板减少症(ITP)的疗效及安全性.方法:74例ITP患者中,男35例、女39例,中位年龄34 (18～70)岁,新诊断的ITP 60例(81.08％)...
- 邢伟伟李振宇闫志凌刘凯歌李宁曹江潘秀英何徐彭徐开林
- 关键词：血小板减少症免疫性利妥昔单抗糖皮质激素
