许鹏程
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 新疆辣椒CMV基因组序列分析与CP基因多克隆抗体制备被引量：1
- 2017年
- 克隆新疆辣椒LJ-10 CMV基因组片段,并进行序列分析,构建CMV CP基因的原核表达载体,并制备CP基因的多克隆抗体。利用RT-PCR技术,克隆新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1(3 357 nt)、RNA2(3 042 nt),RNA3(2 212 nt)全基因组片段,与Gen Bank上登陆的CMV亚组IA、亚组IB、亚组Ⅱ分离物进行序列分析和系统进化树分析。将LJ-10 CMV CP基因克隆到原核表达载体p ET-22b中,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达纯化,以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备CMV特异性抗血清,并进行间接ELISA和Western blotting分析。结果显示,成功克隆了新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1、RNA2、RNA3全基因组片段,序列分析及系统进化树分析表明,该分离物属于CMV亚组IB。成功构建了LJ-10 CMV CP基因的原核表达载体p ET-CMV-CP,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导获得了与预期大小一致的分子量约为27 k D的重组蛋白,制备了CMV的特异性抗血清。间接ELISA和Western blotting分析表明,制备的抗血清效价为1:500-1 000。新疆辣椒LJ-10 CMV分离物属于CMV亚组IB,成功构建了LJ-10 CMV CP基因的原核表达载体,制备了相应的多克隆抗体。
- 周东刘贞刘丽许鹏程郑银英
- 关键词：黄瓜花叶病毒外壳蛋白原核表达
- 加工番茄SlAGO4A基因过表达及干扰载体构建与遗传转化被引量：1
- 2017年
- [目的]构建加工番茄SlAGO4A基因过表达及干扰载体,获得相应的转基因番茄植株。[方法]利用PCR技术从番茄c DNA文库中获得2 727 bp的加工番茄SlAGO4A基因。构建SlAGO4A基因的过量表达载体35S:SlAGO4A。以获得的SlAGO4A基因为模板,获得了SlAGO4A PIWI的220 bp的片段,构建SlAGO4A基因的RNAi干扰载体RNAi-PIWI,通过农杆菌介导的遗传转化,获得SlAGO4A过表达及干扰转基因番茄阳性植株,并利用实时荧光定量PCR(QRTPCR)技术检测过表达番茄阳性植株中的SlAGO4A基因的表达水平。[结果]经PCR鉴定获得5株独立转化的里格87-5干扰转基因加工番茄株系,获得6株独立转化的里格87-5过量表达转基因加工番茄株系,其6株SlAGO4A基因过表达的阳性植株的表达量均有不同程度的上调。[结论]为阐明SlAGO4A基因在加工番茄抗病毒信号通路中的功能奠定基础。
- 许鹏程路遥周东刘丽刘丽娜郑银英
- 关键词：加工番茄PCR
