周东
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 番茄OPA3-like基因的生物信息学分析及原核表达被引量：1
- 2017年
- [目的]获得高效表达的类视神经萎缩蛋白3(OPA3-like),并分析其生物信息学功能。[方法]利用Vector NTI和ExPASy,Signal P,Plant-mPLoc等在线工具对OPA3-like蛋白基本理化性质、信号肽、跨膜区及亚细胞定位进行分析;构建原核表达载体pET22b-OPA3-like、pET28a-OPA3-like、pET32a-OPA3-like并分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE对结果进行验证。[结果]OPA3-like蛋白是不稳定蛋白,含有跨膜区,可能位于叶绿体;原核表达表明,对于同一重组质粒而言,融合蛋白在两种菌中的表达量无明显差别,其中,转化pET28a-OPA3-like可表达20kDa的融合蛋白;转化pET32a-OPA3-like可表达37kDa的融合蛋白,且主要都以包涵体形式存在,转化pET22b-OPA3-like无融合蛋白的表达。[结论]转化pET32a-OPA3-like的表达菌可以高效表达融合蛋白(37 kDa),有利于进一步研究OPA3-like在植物中的亚细胞定位及功能。
- 刘丽娜周东张丽丽崔百明郑银英
- 关键词：番茄生物信息学分析重组质粒原核表达
- 加工番茄SlAGO4A基因过表达及干扰载体构建与遗传转化被引量：1
- 2017年
- [目的]构建加工番茄SlAGO4A基因过表达及干扰载体,获得相应的转基因番茄植株。[方法]利用PCR技术从番茄c DNA文库中获得2 727 bp的加工番茄SlAGO4A基因。构建SlAGO4A基因的过量表达载体35S:SlAGO4A。以获得的SlAGO4A基因为模板,获得了SlAGO4A PIWI的220 bp的片段,构建SlAGO4A基因的RNAi干扰载体RNAi-PIWI,通过农杆菌介导的遗传转化,获得SlAGO4A过表达及干扰转基因番茄阳性植株,并利用实时荧光定量PCR(QRTPCR)技术检测过表达番茄阳性植株中的SlAGO4A基因的表达水平。[结果]经PCR鉴定获得5株独立转化的里格87-5干扰转基因加工番茄株系,获得6株独立转化的里格87-5过量表达转基因加工番茄株系,其6株SlAGO4A基因过表达的阳性植株的表达量均有不同程度的上调。[结论]为阐明SlAGO4A基因在加工番茄抗病毒信号通路中的功能奠定基础。
- 许鹏程路遥周东刘丽刘丽娜郑银英
- 关键词：加工番茄PCR
- 新疆辣椒CMV基因组序列分析与CP基因多克隆抗体制备被引量：1
- 2017年
- 克隆新疆辣椒LJ-10 CMV基因组片段,并进行序列分析,构建CMV CP基因的原核表达载体,并制备CP基因的多克隆抗体。利用RT-PCR技术,克隆新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1(3 357 nt)、RNA2(3 042 nt),RNA3(2 212 nt)全基因组片段,与Gen Bank上登陆的CMV亚组IA、亚组IB、亚组Ⅱ分离物进行序列分析和系统进化树分析。将LJ-10 CMV CP基因克隆到原核表达载体p ET-22b中,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达纯化,以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备CMV特异性抗血清,并进行间接ELISA和Western blotting分析。结果显示,成功克隆了新疆辣椒LJ-10 CMV的RNA1、RNA2、RNA3全基因组片段,序列分析及系统进化树分析表明,该分离物属于CMV亚组IB。成功构建了LJ-10 CMV CP基因的原核表达载体p ET-CMV-CP,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导获得了与预期大小一致的分子量约为27 k D的重组蛋白,制备了CMV的特异性抗血清。间接ELISA和Western blotting分析表明,制备的抗血清效价为1:500-1 000。新疆辣椒LJ-10 CMV分离物属于CMV亚组IB,成功构建了LJ-10 CMV CP基因的原核表达载体,制备了相应的多克隆抗体。
- 周东刘贞刘丽许鹏程郑银英
- 关键词：黄瓜花叶病毒外壳蛋白原核表达
- 加工番茄PVY^(N:O) HC-Pro、STV RdRp酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活验证
- 2018年
- 马铃薯Y病毒(potato virus Y,简称PVY)和南方番茄病毒(southern tomato virus,简称STV)是加工番茄上非常普遍的病毒,以从加工番茄c DNA文库中筛选与病毒功能蛋白互作的基因为目标,构建PVY HC-Pro、STV RdRp Cyto Trap酵母双杂交诱饵载体,为抗病基因的筛选工作奠定基础。通过PCR技术,扩增PVY HC-Pro、STV RdRp片段分别克隆到诱饵载体p Sos,用酶切、测序结果正确的2个诱饵载体重组质粒转化酵母感受态cdc25H,进行自激活检测及毒性验证。将不同组合的酵母转化液涂布于SD/Glu(-UL)培养基(SD/Glu指含有葡萄糖的SD培养基,-UL指缺失尿嘧啶、亮氨酸2种氨基酸)平板上,于25℃培养4 d后,挑取3个单菌落分别划线于2个SD/Glu(-UL)和2个SD/Gal(-UL)培养基上,并分别置于25、37℃继续培养5 d。结果表明,在25℃培养条件下,SD/Glu(-UL)和SD/Gal(-UL)培养基上酵母菌生长正常;在37℃培养条件下,SD/Glu(-UL)培养基上无酵母菌的生长,SD/Gal(-UL)培养基上阳性组合酵母生长正常,阴性组合酵母均不生长。构建的p Sos-HC-Pro、p Sos-RdRp诱饵载体没有转录自激活活性和毒害作用,可用于Cyto Trap酵母双杂交系统。
- 路遥周东郑银英
- 关键词：加工番茄PVY酵母双杂交自激活诱饵载体
