陆仁飞
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：江苏大学临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 伤寒沙门菌小RNA T64的功能被引量：1
- 2016年
- 目的:探究小RNA T64对伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)表型的影响。方法:用λ-Red重组系统构建小RNA T64的基因缺失变异株,并将携带T64基因序列的重组质粒导入T64缺陷株制备T64回补株,同时将该质粒导入hfq基因缺陷变异株。绘制T64高表达株的生长曲线,观察T64对细菌生长的影响;接种半固体平板观察细菌的动力;结晶紫染色法观察细菌生物膜形成情况。结果:序列分析表明,T64基因缺失变异株构建成功;生长曲线显示,T64高表达促进细菌的生长;与空载体对照株相比,T64高表达株的动力稍减弱;生物膜分析结果显示,T64高表达株生物膜形成能力强于空载体对照株;回补T64基因后,T64缺陷株生物膜形成能力基本恢复,而hfq缺陷株依旧难以形成生物膜。结论:T64能促进细菌生长,且在一定程度上抑制细菌的动力;其有助于S.Typhi形成生物膜,但不足以消除hfq基因缺失对生物膜形成的抑制作用。
- 徐慧袁一航陆仁飞刘娟利张盈生秀梅徐顺高黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌小RNA生物膜形成
- 小RNA SbfR增强伤寒沙门菌动力和侵袭力被引量：3
- 2018年
- 目的:探究小RNA SbfR对伤寒沙门菌动力和侵袭力的影响及其潜在机制。方法:用前期构建的SbfR缺陷株(△SbfR+pBAD/Myc-HisA)、SbfR回补株(△SbfR+pBAD/Myc-HisA-SbfR)和空载体株(WT+pBAD/Myc-HisA)进行细菌动力实验和HeLa细胞侵袭实验,观察SbfR对伤寒沙门菌的动力和对HeLa细胞侵袭力的影响。通过基因芯片分析SbfR缺陷株与回补株全基因组表达的差异,并进一步用qRT-PCR分析SbfR对2个鞭毛和2个侵袭相关基因的调控作用。结果:与空载体株、SbfR回补株比较,SbfR缺陷株动力和侵袭力均明显下降(P<0.01或0.05);缺陷株鞭毛和侵袭相关基因的转录表达水平均比回补株明显下降(均P<0.05)。结论:SbfR通过促进鞭毛和侵袭相关基因的表达,增强伤寒沙门菌的动力和侵袭力。
- 孙嘉遥陆仁飞赵昕黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌小RNA侵袭力
- Fis介导伤寒沙门菌滞留菌形成
- 2017年
- 目的:探讨伤寒沙门菌滞留现象的存在,研究Fis在伤寒沙门菌滞留菌形成中发挥的作用。方法:用药敏纸片和最小抑菌浓度检测进行药敏实验,挑选伤寒沙门菌敏感的抗生素。利用菌落计数法,绘制细菌存活曲线。qRT-PCR检测伤寒沙门菌fis的表达。采用细菌滞留实验分析细菌滞留能力。结果:伤寒沙门菌在对数生长的早期和中晚期都存在滞留现象。与野生株相比,fis基因缺失株的滞留能力下降。结论:Fis可参与伤寒沙门菌滞留菌的形成。
- 颜冬梅陆仁飞赵昕张盈黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌FIS抗生素
- 伤寒沙门菌sRNA S2959增强细菌动力和生物膜形成能力被引量：4
- 2018年
- 目的研究伤寒沙门菌小RNA(sRNA) S2959对细菌动力以及生物膜形成能力的影响。方法利用Red重组系统制备伤寒沙门菌sRNA S2959缺陷株(△S2959),同时制备sRNA S2959缺陷株的空载体株(△S2959-pBAD)和回补株(△S2959-p S2959)等相关菌株。通过sRNA S2959缺陷株和野生株的生长曲线实验观察sRNA S2959缺失后对细菌生长的影响;通过细菌sRNA S2959缺陷株、空载体株、回补株的泳动能力实验和生物膜实验观察sRNA S2959对细菌动力以及生物膜形成能力的影响;再用定量PCR(q PCR)方法检测细菌鞭毛相关基因在sRNA S2959相关菌株中的表达水平。结果成功制备sRNA S2959缺陷株和回补株; sRNA S2959缺陷株和野生株在LB和TSB液体培养基中的生长曲线无明显差异;与野生株相比,sRNA S2959缺陷株的泳动能力和生物膜形成能力下调(P<0.05),而回补株的泳动能力和生物膜形成能力较缺陷株显著增加(P<0.05); q PCR结果显示,高表达sRNA S2959后,细菌鞭毛相关基因(flh D、fli A和flj B)的mRNA水平分别上调大约4、3和6倍。结论伤寒沙门菌sRNA S2959促进鞭毛的表达,进一步上调伤寒沙门菌动力以及生物膜的形成能力。
- 陆仁飞陆仁飞黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌SRNA生物膜
- 伤寒沙门菌非编码RNA AsfD的分子鉴定及表达特性
- 2018年
- 目的:对伤寒沙门菌flhDC基因对侧编码的疑似非编码RNA AsfD进行分子鉴定及表达特性分析。方法:在AsfD已知序列区设计特异性引物,体外转录制备RNA探针,通过RNA印迹检测伤寒沙门菌AsfD的表达;使用cDNA末端快速扩增(5'rapid amplification of cDNA ends,RACE)和RT-PCR分析AsfD的转录起始位点和终止区域;用qRT-PCR检测AsfD在伤寒沙门菌不同生长时相和环境应激下的表达特性。结果:RNA印迹结果表明,伤寒沙门菌中确实存在AsfD表达,长度在2 300 nt左右;5'RACE分析表明,AsfD转录起始点位于flhC基因终止密码子下游590 bp;RT-PCR结果表明其转录终止区域位于flhD基因起始密码子上游558～788 bp之间;序列分析显示AsfD全区域没有明显的ORF结构;qRT-PCR结果显示,AsfD在伤寒沙门菌生长的稳态期表达较高,酸、氧和高渗环境应激后均明显下降(P<0.01)。结论:AsfD为伤寒沙门菌一长链非编码RNA,在不同时相和应激条件下存在表达调节。
- 刘锐种晓丹赵昕陆仁飞孙嘉遥黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌非编码RNA环境应激
