赵昕
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
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- Fis介导伤寒沙门菌滞留菌形成
- 2017年
- 目的:探讨伤寒沙门菌滞留现象的存在,研究Fis在伤寒沙门菌滞留菌形成中发挥的作用。方法:用药敏纸片和最小抑菌浓度检测进行药敏实验,挑选伤寒沙门菌敏感的抗生素。利用菌落计数法,绘制细菌存活曲线。qRT-PCR检测伤寒沙门菌fis的表达。采用细菌滞留实验分析细菌滞留能力。结果:伤寒沙门菌在对数生长的早期和中晚期都存在滞留现象。与野生株相比,fis基因缺失株的滞留能力下降。结论:Fis可参与伤寒沙门菌滞留菌的形成。
- 颜冬梅陆仁飞赵昕张盈黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌FIS抗生素
- 副溶血弧菌CalR蛋白的表达纯化及其DNA结合活性分析被引量：1
- 2017年
- 目的:原核表达和纯化副溶血弧菌的CalR蛋白并分析其DNA结合活性,为后续深入研究其对靶基因的分子调控机制奠定基础。方法:以副溶血弧菌野生株RIMD2210633基因组DNA为模板,PCR扩增calR的编码区序列,将其克隆入p ET28a中获得重组载体;将重组载体导入大肠埃希菌BL21λDE3中,获得重组蛋白表达菌株,该菌株经IPTG诱导表达His6-CalR,用Ni-柱树脂进行蛋白纯化。PCR扩增T3SS1相关基因exsC、exsD和VP1687的启动子区序列,通过凝胶阻滞实验检测His6-CalR蛋白对它们的结合活性。结果:成功表达纯化出可溶性His6-CalR蛋白;凝胶阻滞实验结果显示,重组蛋白His6-CalR能够直接结合exsC、exsD和VP1687的启动子区。结论:本研究表达纯化的副溶血弧菌CalR蛋白具有DNA结合活性,可用于后续的转录调控机制研究。
- 张凌宇侯书宁赵昕孙佳遥张义全黄新祥
- 关键词：副溶血弧菌DNA结合活性
- 小RNA SbfR增强伤寒沙门菌动力和侵袭力被引量：3
- 2018年
- 目的:探究小RNA SbfR对伤寒沙门菌动力和侵袭力的影响及其潜在机制。方法:用前期构建的SbfR缺陷株(△SbfR+pBAD/Myc-HisA)、SbfR回补株(△SbfR+pBAD/Myc-HisA-SbfR)和空载体株(WT+pBAD/Myc-HisA)进行细菌动力实验和HeLa细胞侵袭实验,观察SbfR对伤寒沙门菌的动力和对HeLa细胞侵袭力的影响。通过基因芯片分析SbfR缺陷株与回补株全基因组表达的差异,并进一步用qRT-PCR分析SbfR对2个鞭毛和2个侵袭相关基因的调控作用。结果:与空载体株、SbfR回补株比较,SbfR缺陷株动力和侵袭力均明显下降(P<0.01或0.05);缺陷株鞭毛和侵袭相关基因的转录表达水平均比回补株明显下降(均P<0.05)。结论:SbfR通过促进鞭毛和侵袭相关基因的表达,增强伤寒沙门菌的动力和侵袭力。
- 孙嘉遥陆仁飞赵昕黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌小RNA侵袭力
- 伤寒沙门菌长链非编码RNA AS-RpoH分子鉴定被引量：2
- 2017年
- 目的:探讨伤寒沙门菌非编码RNA AS-RpoH的分子特性,为进一步研究其调控功能和机制奠定基础。方法:在AS-RpoH表达高峰区设计特异性探针,运用RNA印迹检测AS-RpoH的表达;通过PCR寻找AS-RpoH可能的转录起始位点和终止位点;在yhhk编码区设计特异性探针,运用RNA印迹分析yhhk的转录产物。结果:RNA印迹结果显示,AS-RpoH在沙门菌中确实存在,长约3 000 nt;PCR结果表明,AS-RpoH的转录终止位点位于rpo H基因起始密码子上游191~238 nt之间;而其转录起始位点可能位于yhh K上游;RNA印迹分析结果表明yhh K基因的转录产物与AS-RpoH的长度一致。结论:长链非编码RNA AS-RpoH在伤寒沙门菌中存在表达,可能为yhh K的3'非翻译区。
- 李雪娇刘锐熊昌艳赵昕黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌非编码RNA分子鉴定
- 伤寒沙门菌非编码RNA AsfD的分子鉴定及表达特性
- 2018年
- 目的:对伤寒沙门菌flhDC基因对侧编码的疑似非编码RNA AsfD进行分子鉴定及表达特性分析。方法:在AsfD已知序列区设计特异性引物,体外转录制备RNA探针,通过RNA印迹检测伤寒沙门菌AsfD的表达;使用cDNA末端快速扩增(5'rapid amplification of cDNA ends,RACE)和RT-PCR分析AsfD的转录起始位点和终止区域;用qRT-PCR检测AsfD在伤寒沙门菌不同生长时相和环境应激下的表达特性。结果:RNA印迹结果表明,伤寒沙门菌中确实存在AsfD表达,长度在2 300 nt左右;5'RACE分析表明,AsfD转录起始点位于flhC基因终止密码子下游590 bp;RT-PCR结果表明其转录终止区域位于flhD基因起始密码子上游558～788 bp之间;序列分析显示AsfD全区域没有明显的ORF结构;qRT-PCR结果显示,AsfD在伤寒沙门菌生长的稳态期表达较高,酸、氧和高渗环境应激后均明显下降(P<0.01)。结论:AsfD为伤寒沙门菌一长链非编码RNA,在不同时相和应激条件下存在表达调节。
- 刘锐种晓丹赵昕陆仁飞孙嘉遥黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌非编码RNA环境应激
- 非编码小RNA T64对伤寒沙门菌基因表达的影响被引量：2
- 2014年
- 目的:对由转录组测序获得的伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)非编码小RNA(small non-coding RNA,snRNA)T64的表达进行验证,并对其功能进行初步探讨。方法:选取特异性引物采用反转录PCR(RT-PCR)和普通PCR确认T64在S.Typhi中的表达;将含有T64 snRNA序列的重组质粒导入S.Typhi野生株构建T64高表达株;结合应用S.Typhi全基因组芯片分析技术,比较S.Typhi T64高表达株和空载体对照株在对数期基因表达谱差异,并对部分基因芯片结果进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证。结果:RT-PCR结果显示,snRNA T64在S.Typhi确有表达;基因芯片分析结果显示,与空载体对照株比,snRNA T64高表达株在对数期有20个基因表达上调,7个下调;4个被选基因表达的qRT-PCR结果与芯片分析结果相符。结论:snRNA T64在S.Typhi中表达,可能在基因的表达调节中发挥重要作用。
- 王哲鑫吉滢赵昕徐顺高黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌基因芯片分析实时荧光定量PCR基因表达调节
- 非编码RNA AsrH对伤寒沙门菌表型的影响
- 2016年
- 目的:研究非编码RNA Asr H在伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)中的作用,观察其对应激条件下的生存能力、动力以及生物膜形成等表型的影响。方法:用自杀质粒p GMB151介导的同源重组法,制备asr H基因启动子缺失变异株;绘制生长曲线,观察S.Typhi在酸、氧和高渗应激条件下的生长;用半固体平板培养观察S.Typhi的动力;用结晶紫染色法观察S.Typhi生物膜形成情况。结果:序列分析表明,在变异株asr H基因启动子区域缺失了120 bp;生长曲线显示,与野生株相比,asr H缺陷株在酸性和高渗应激下的生存能力明显降低,而在氧应激下一定时间内升高;asr H缺陷株动力几乎完全消失,而生物膜形成能力强于野生株。结论:Asr H有助于S.Typhi在酸性和高渗应应激环境下生长,对S.Typhi的动力至关重要,且能抑制生物膜的形成。
- 刘娟利李雪娇熊昌艳徐慧赵昕黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌非编码RNA环境应激生物膜
- 细菌素免疫蛋白调控伤寒沙门菌耐药和生物膜的形成被引量：2
- 2017年
- 目的:研究伤寒沙门菌SPI-8编码的两种细菌素免疫蛋白的功能。方法:用自杀质粒p GMB151介导的同源重组法,制备细菌素免疫蛋白基因缺陷变异株(△t3036,△t3038,△t3036△t3038);采用药敏纸片法检测细菌对8种抗菌药物的抵抗能力;结晶紫染色法观察细菌生物膜的形成。结果:通过PCR验证及序列比对,伤寒沙门菌细菌素免疫蛋白基因缺陷变异株制备成功;药敏实验结果显示,△t3038和△t3036△t3038变异株对氨苄西林、庆大霉素、多黏菌素B、环丙沙星、卡那霉素、亚胺培南等6种抗菌药物的抵抗能力明显变弱(P均<0.01),△t3036对8种抗菌药物的抵抗能力均无明显变化;生物膜形成实验结果显示,与野生株相比,△t3036生物膜形成能力增强(P<0.05),△t3038和△t3036△t3038生物膜形成能力明显减弱(P均<0.01),而△t3036△t3038生物膜形成能力较△t3038减弱。结论:伤寒沙门菌细菌素免疫蛋白T3036和T3038均能够促进细菌生物膜形成,T3038能够增强细菌对抗菌药物的抵御。
- 陈珉池刘锐颜冬梅赵昕黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌耐药生物膜
